叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定.ppt

叶绿体色素的提取分离及理化性质的鉴定,一. 实验原理 1.1 叶绿素： 主要包括叶绿素a和b分子式: Chla C55H72O5N4Mg Chlb C55H70O6N4Mg结构式: 卟啉环化合物 四个吡咯环与四个=CH-组成一个大环,共轭双键形成一个大π键,环中央有一个镁原子,卟啉环决定叶绿素颜色,也是吸收可见光,并以诱导共振方式传递光能的根本所在,叶醇尾是由四个异戊二烯单位组成的双萜 Chla 蓝绿色 Chlb 黄绿色 脂溶性: 难溶于水,仅溶于酒精、丙酮、已醚、已烷等有机溶剂 卟啉环头部呈极性, 具亲水性; 叶醇尾部具亲脂性,皂化反应: Chla、Chlb 是双羧酸的酯 一个羧基被甲基酯化 可发生皂化反应 另一个羧基被叶醇基酯化 COOCH3 C32H30ON4Mg +2KOH COOC20H39 COOK C32H30ON4Mg +CH3OH+C20H39OH COOK 取代反应：卟啉环中的Mg2+可被H2+、Cu2+、Zn2+取代，被Cu2+、Zn2+取代后仍保持绿色,,,,,,光学特性：,（1）吸收光谱：色素溶液随波长改变而发生光吸收变化的图谱 Chla Chlb的吸收光谱有二个强吸收峰 640——660nm 红光部分 叶绿素特有 410——470nm 蓝紫光部分 卟啉环化合物共有 （2）荧光和磷光 荧光现象：Chl溶液在透射光下呈绿色，而反射光下呈红色的现象。

强度大，寿命短（10-9秒） 磷光： Chl溶液停止光照后，仍能在一定时间内放出暗红色的光 寿命长（10-2秒——10-3秒）,1.2 类胡萝卜素,类胡萝卜素 胡萝卜素 橙黄色 不溶于水 叶黄素 鲜黄色 溶于有机溶剂分子式、结构式： 胡萝卜素：C40H56 有α、β、γ三种同分异构体 叶黄素是胡萝卜素的衍生物，其两端的紫罗兰酮环第四位C上的H被OH取代，分子式为C40H56O2 类胡萝卜素吸收光谱都在蓝紫光部分，所吸收的光能传递给叶绿素用于光合作用，保护叶绿素分子不被氧化或阳光破坏,,1.3 类黄酮类,根据三碳桥的氧化程度可分为： 花色素苷：呈现颜色紫色锌化物、红色的碱盐、无色化合物 黄酮 防御伤害 存在于花器官和绿叶中 黄酮醇 紫外光保护剂，吸收UV-B，避免细胞受到伤害 异黄酮 功能多样鱼藤酮杀虫，植物防御素抑制微生物花色素苷分布广，溶解于细胞液中，与花、果、叶的颜色有关。

颜色受多因素影响：B环上羟基和甲氧基数目 羟基数多，吸收光向长波迁移，颜色偏蓝 羟基被甲氧基替代，吸收光向短波迁移，颜色偏红芳香酸对主要骨架的酯化液泡中pH值 酸红碱蓝营养状况 低温、缺氮、缺磷 促进化色素的形成和积累,不同花色素的取代基和颜色,花色素 3’ 4’ 5’ 颜色花葵素 -H -OH -H 橙红 花青素 -OH -OH -H 紫红花翠素 -OH -OH -OH 蓝紫芍药素 -OCH3 -OH -H 玫瑰红甲花翠素 -OCH3 -OH -OH 紫二甲花翠素 -OCH3 -OH -OCH3 紫红,,,,二. 试剂与材料,2.1 实验试剂： 石油醚（沸程60℃∽90℃）、丙酮、甲醇、氢氧化钾、石英砂、碳酸镁、氯化钠、醋酸铜。

2.2 仪器和器皿： 分光光度计、台秤、剪刀、 研钵、移液管、漏斗、大试管、层析缸 2.3 材料： 新鲜菠菜叶片，不同颜色的花和果实三.实验操作,丙酮研磨提取叶绿素 ↓过滤、洗研钵及残渣 ↓ ↓2mL丙酮提取液 余下的色素提取液用石油醚萃取 ↓ ↓ ↓ ↓ ↓ 加入6N HCl 纸层析 荧光 皂化反应 光破坏 （脱镁叶绿素） ↓ ↓ 分离色素 Cu取代 ↓ 扫描光谱 花色素实验,,,,四. 结果与分析,对实验现象作好详细记录， 并加以解释请对皂化反应现象做出合理解释，而不是单单用反应方程式来表示,五. 注意事项,实验中注意安全，石油醚、丙酮等试剂要远离火源研磨过程中丙酮要少量多次加入，以免研磨时四处飞溅过滤时不要使用滤纸而使用棉花，棉花塞在漏斗基部要松紧适当叶绿素要避光保存。

六. 思考题,6.1 叶绿素、荧光素酶以及绿色荧光蛋白都能产生荧光，它们的原理有什么不同？能量来源有何差异？6.2 转GFP的植物在检测绿色荧光时为何没有看到叶绿素的红色荧光?若选择荧光标记绿色植物细胞,在选择荧光物质时应首先考虑什么问题?6.3 如何判断呈橙黄色的花和果实中含的是类胡萝卜素还是花色素？,。