槐耳浸膏的实验研究及临床应用进展【临床医学论文】.doc

临床医学论文-槐耳浸膏的实验研究及临床应用进展作者：李立新　叶胜龙　王艳红　汤钊猷【摘要】 　　槐耳颗粒目前在临床肿瘤治疗中运用较为广泛全文对槐耳的菌质制备、化学研究、作用机制、药理及毒理研究、临床应用等方面作一综述，旨在为槐耳的进一步研究提供帮助 【关键词】 槐耳浸膏　实验研究　临床应用槐耳是我国民间重要的药用真菌其学名为 trametes robiniophila murr，中药名为槐栓菌[1]它是生长在槐及洋槐、青檀等树干上的高等真菌子实体按 Ainsworth 等 1973 年真菌分类系统，属于真菌门 Eumycota，担子菌亚门 Bisidiomycotina，层菌纲 Hymenomycetes，非褶菌目 Aphyllophorales，多孔菌科 Polyporaceae，栓菌属 Trametes[2]现代不少文献误认为它是槐树上的黑木耳，以致对其认识较为混乱经考证：槐耳的入药史最早可追溯到公元 3 世纪（1600 年前）葛洪的《肘后方》到明朝的《本草纲目》等有关草本均有记载其别名有“槐菌”、“槐蛾”、“槐鸡”、“槐鹅”等现已确证槐耳就是槐栓菌[2]它味苦辛，性平无毒，有“治风”、“破血”、“益力”的功效[3]。

1 槐耳菌质的制备由于槐耳的生长条件要求严格，生长周期很长，生物效应较低，难以满足药用需要目前已采用固体发酵工艺来生产槐耳菌质，即药用真菌在农副产品组成的固体营养基质上生长，分解基质，吸取营养，生长菌体供药用在0~100 天的发酵过程中，随着发酵时间的延长，基质转化为菌质，产品中多糖含量迅速下降，蛋白质含量逐步上升当发酵周期达 45 天左右时，多糖与蛋白质含量渐趋稳定，这时期菌质中提取成分的抑瘤率最高，也是菌质中槐耳菌丝体由营养生长转向生殖生长的阶段现已知道多糖蛋白（PS-T）是槐耳菌质的重要有效成分，因此测定多糖与蛋白质的含量可作为发酵质量的监控指标和判定菌质的发酵终点，也是药品的重要质量标准[4]近来也有作者改用双向发酵工程来生产菌质即由以往仅用富含碳、氮等营养的农副产品作为营养基质，改为采用具有一定活性成分的中药材作为药性基质，它既能提供真菌成长所需的营养，又因真菌的酶而被改变组织成分，从而产生新的性味功能实验证实：由黄芪作为基质发酵槐耳菌而产生的菌质，其药效明显超过槐耳菌质[5]2 槐耳的基础研究2.1 化学研究槐耳菌质得精致槐耳多糖蛋白，简称 PS-T经小鼠肉瘤 S180 抑瘤试验，抑瘤率达 40%~47%，说明 PS-T 具有抗癌活性，是槐耳菌质和槐耳清膏的有效作用部位[6]。

槐耳多糖蛋白是一种棕褐色粉末，没有明显的熔点，在 280℃时变黑，易溶于热水，稍溶于低浓度乙醇，不溶于高浓度乙醇、丙酮、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇等有机溶剂其水溶液透明呈黏稠状，pH 值为 5.5，无旋旋光性[7]经高效液相色谱和电泳分析表明其主成分基本为均一多糖，并由光谱和气相层析方法证明槐耳多糖为一蛋白结合杂多糖，其具体组成为：6 种单糖（含量为41.53%）和 18 种氨基酸（含量为 12.93%）该多糖蛋白的分子量为 30 000，其多糖分子糖苷键构型主要为 β 型[7~10]2.2 作用机制2.2.1 促进巨噬细胞功能槐耳多糖蛋白（PS-T）能激活巨噬细胞，增强巨噬细胞的吞噬功能，使之直接杀伤肿瘤细胞并处理、递呈肿瘤抗原，进而激活 T 细胞产生抗肿瘤效应巨噬细胞还可释放 TNF-α、IL-1、IFN-α 等细胞因子来调节抗肿瘤效应经槐耳多糖蛋白作用后的小鼠，其血清中溶菌酶活性也明显增加[11]2.2.2 诱导细胞因子槐耳多糖蛋白能明显诱生 α、γ 干扰素，对 α 干扰素促进 NK 细胞活性有协同作用，后者又可产生 IFN-γ、IL-2 等IL-2 可刺激 T、B 淋巴细胞增殖活化。

活化的巨噬细胞也可产生 IFN-α、IL-1、CSF 等细胞因子在这些细胞因子的协同作用下增强 T 细胞、巨噬细胞、NK 细胞等对肿瘤细胞的杀伤能力[6，11]2.2.3 促进细胞免疫功能槐耳多糖蛋白对脐血 EaRF(活性花环)及 GVHR（移植物抗宿主反应）有增强作用另外在干扰素尤其是 IFN-γ 的协同作用下可使 NK 细胞活性增强，提高CTL 对肿瘤的杀伤作用[6]陈慎宝等[11]用槐耳多糖给小鼠腹腔注射，10 天后取血测定淋巴细胞转化率均高于生理盐水对照组陆鹏等[12]应用二乙基亚硝胺制备大鼠肝癌模型，同时给大鼠灌服槐耳浸膏，20 周后取肝用免疫组化检测IL-2R 阳性细胞，证明槐耳浸膏能增加肝内 IL-2R 阳性细胞数，从而增强体内细胞免疫功能2.2.4 提高体液免疫作用陈慎宝等[11]通过动物实验表明槐耳多糖蛋白可明显提高机体产生抗体的水平在特异性抗体的作用下，可增加吞噬细胞的调理吞噬作用及发挥 ADCC 作用，进而杀伤、吞噬或溶解肿瘤细胞2.2.5 抑制肿瘤血管生成陈大兴等[13]用不同浓度的槐耳浸膏作用于人胎脐静脉血管内皮细胞，观察其对细胞的增殖能力、迁移能力、附壁能力及血管生成的影响。

结果发现槐耳浸膏≥2mg/ml 时可显着降低肿瘤组织的血管内皮细胞的增殖能力，减少血管形成，抑制血管内皮细胞的迁移、黏附，从而降低肿瘤组织中的微血管密度许戈良等[14]观察了槐耳浸膏对血管内皮生长因子（VEGF）诱导的人脐静脉内皮细胞增殖和分化成血管能力的影响结果显示：槐耳浸膏在浓度为0.1g/L～10g/L 时能明显抑制 VEGF 诱导的内皮细胞增殖，呈量效关系它阻止内皮细胞由 S 期进入 G2/M 期在浓度为 1g/L 时可抑制内皮细胞体外分化成管样结构，浓度为 10g/L 时则完全阻断内皮细胞体外分化成管样结构的能力，说明槐耳浸膏对血管内皮细胞体外构建新生血管具有抑制作用2.2.6 诱导肿瘤细胞凋亡 临床实践及细胞实验已证明槐耳浸膏能抑制多种肿瘤细胞的增殖诱导肿瘤细胞的凋亡是其发挥这一作用的途径之一周进等[15]采用不同浓度的槐耳浸膏与人胰腺癌细胞 Panc-1 共同培养，发现槐耳浸膏能明显抑制 Panc-1 的生长，细胞周期阻滞主要在 G1 期槐耳浸膏在浓度为 3.0mg/ml、作用时间 36h时达到凋亡高峰，凋亡率达 15%～20%细胞免疫组化进一步证实槐耳浸膏能上调凋亡基因 Caspase-3 的表达。

程若川等[16]将不同浓度的槐耳浸膏与人直肠癌 HR8348 细胞共同培养 36h，结果显示细胞凋亡指数随槐耳浸膏浓度的增加而增加，当浓度为 4.0mg/ml 时达到最大槐耳浸膏组 bcl-2、bcl-xl、bak、p53蛋白表达较空白对照组明显增强，而 bax 变化不明显槐耳浸膏组 bak/bcl-2 和 bak/bcl-xl 比值显着大于空白对照组另外有作者分别观察了槐耳浸膏诱导人肺腺癌细胞 A549、食管癌细胞、Molt-4 细胞的凋亡作用，证明槐耳浸膏对这些肿瘤细胞均有明显诱导凋亡的作用[17~19]2.2.7 逆转耐药细胞株槐耳浸膏能逆转部分耐药细胞株，同时对化疗亦有增敏作用张玉宝等[20]观察了槐耳浸膏在乳腺癌综合治疗中的作用并探讨了其相应的机制结果提示：0.01mg/ml 剂量的槐耳颗粒能显着降低化疗药物 ADM 对人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/A 的 IC50（3.95μg/ml），与逆转前耐药细胞株 MCF-7/A 的IC50（17.67μg/ml）相比，差异有显着性（P20 000mg/kg，大鼠>15 000mg/kg）均未能测出 LD50，且在观察期间均未引起动物死亡。

大鼠按人临床用药量的 5.5 倍、50.6 倍、95 倍灌胃 90 天，家兔各剂量组连续给药半年，实验动物生长正常，生化指标、血象无异常，也未见药物引起的病理改变,特殊毒理如诱变试验和微核与染色体畸变等试验均为阴性反应[6]3 槐耳的临床应用3.1 槐耳颗粒治疗肝癌蒋梅等应用槐耳颗粒治疗中晚期原发性肝癌 98 例，所有病例均服药 1 个月以上，最长服药时间 38 个月治疗期间停用其它抗癌药物结果显示肿瘤完全缓解 0 例，部分缓解 2 例，无变化 24 例，病变进展 72 例瘤体稳定率为24.49%Ⅱ期患者中 6 个月、1 年、3 年生存率分别为94.74%、73.68%、10.53%Ⅲ期患者中 6 个月、1 年、3 年生存率分别为68.66%、16.67%、1.67%AFP 阳性病例中稳定及下降率为 37.97%槐耳颗粒对患者的疼痛、纳呆、失眠症状均有不同程度的改善[24]郭添胜等[25]比较了槐耳颗粒联合肝动脉化疗栓塞术及单用肝动脉化疗栓塞术治疗原发性肝癌的近期疗效，发现两者差异无显着性，联合组在肝功能改善、人体功能状况评分改善、减少粒细胞下降率、改善食欲下降较单纯组好3.2 槐耳颗粒治疗乳腺癌钟少文等[26]将 62 例Ⅳ期乳腺癌病人分为两组：治疗组 29 例，连服槐耳颗粒 3 个月。

对照组 33 例，以 CTX+THP+5-Fu 化疗，每 3 周为 1 个疗程，共 4个疗程结果表明治疗组不仅在中医证候、生存质量的改善方面优于对照组，在中位生存时间上也优于后者另外槐耳浸膏联合化疗治疗乳腺癌不仅可以提高化疗疗效，减轻毒副反应（白细胞、血红蛋白下降等），还可提高乳腺癌患者的 IgG、IgA、IgM 水平，促进机体的免疫功能[27，28]3.3 槐耳颗粒治疗消化道恶性肿瘤邓艾平等[29]将 74 例有化疗指征的消化道恶性肿瘤患者随机分为两组，分别给予槐耳颗粒联合化疗（羟基喜树碱 10mg/m2，亚叶酸钙 100mg，5-Fu 500mg）和单用化疗观察患者在治疗后的疗效和生活质量的改变结果前者治疗后总有效率为 60.5%，生活质量状况 Karnofsky 评分提高及稳定者占 86.6%；后者总有效率为 33.3%，生活质量状况 Karnofsky 评分提高及稳定者占 69.5%两者差异有显着性槐耳颗粒联合化疗治疗大肠癌、胃癌术后患者，同样具有减轻不良反应，提高生存率的作用，并能促进机体的细胞免疫功能[30，31]3.4 槐耳颗粒治疗慢性乙肝槐耳多糖蛋白对小鼠血清干扰素诱生作用非常明显。

对感染鸭肝炎病毒的实验鸭使用该药后可使其血清 HBV-DNA 水平明显下降唐保元等[32]用槐耳颗粒治疗慢性乙肝病毒感染者 20 例，结果 HBeAg 阴转 6 例（占 30%），其中 3 例HBeAb 转为阳性，1 例在 HBeAg 转为 HBeAb 时 HBsAg 阴转，提示槐耳对慢性乙肝有较好疗效目前槐耳颗粒已在临床上得到较为广泛应用，涉及以肿瘤疾病为主的多项领域，并已取得了许多独到的疗效现有的基础理论研究已为槐耳颗粒抑制肿瘤提供了部分理论依据随着实验研究的不断深入，尤其是细胞生物学及分子生物学技术的运用，槐耳抑制肿瘤的机制必将会被人们揭开参考文献】[1] 邓叔群. 中国的真菌[M]. 北京：科技出版社，1963.515.[2] 庄毅. 槐耳的鉴定与考证[J]. 中国食用菌，1993，13（6）：22.[3] 李时珍. 槐耳[A]. 本草纲目下册（菜部）二十八卷[M]. 北京：人民卫生出版社，1982.1712. [4] 庄毅. 药用真菌的固体发酵[J]. 中国药学杂志，1991，26（2）：80.[5] 庄毅. 药用真菌新型固体发酵工程与槐芪菌质的研制[J]. 中国药学杂志，2004，39（3）：175-178.[6] 庄毅.真菌抗癌药物槐耳颗粒的研制[J].中国肿瘤，1999， 8（12）：540-543.[7] 郭跃伟, 程培元, 陈玉俊, 等. 槐耳菌丝体多糖的研究（Ⅰ）[J]. 中草药，1992，23（4）：175-177.[8] 郭跃伟, 程培元, 陈玉俊, 等. 槐耳菌丝体多糖的分离和分析[J]. 中国生化药物杂志，1993，1：56-60.[9] 周学敏, 郭跃。