热原试验-演示文稿课件.ppt

热原检查法家兔热原试验每日一话题 试验目的将一定剂量的供试液(医疗产品的萃取液)，静脉注入家兔体内，在规定的时间内观察家兔体温升高的情况，以判定供试品是否具有潜在的致热作用依据方法：GB/T14233.2-2005医用输液、输血、注射器具检验方法；中国药典2010； ISO 10993-12:2005GB/T16886.12-2005.热原试验的应用热原试验应用于药物及医疗产品的检测（注射器、输液器、输血器、引流管、手术器械等等）热原概念热原：引入或释放到机体内后能引起恒温动物体温异常升高的物质它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热原及化学热原等细菌性热原，是某些细菌的代谢产物、细菌尸体及内毒素致热能力最强的是革兰氏阴性杆菌的产物，其次是革兰阳性杆菌类，革兰阳性球菌则较弱，霉菌、酵母菌、甚至病毒也能产生热原热原引起机体发热机理外源性致热原多为大分子物质，特别是细菌内毒素分子量非常大，不能通过血脑屏障直接作用于体温调节中枢，而是通过激活血液中的中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和单核一吞噬细胞系统，使其产生并释放内源性致热原，通过下述机制引起发热热原引起机体发热机理热原白细胞(WBC)吞噬白细胞崩解，释放内源性致热源原作用于体温调节中枢产热增加、散热减少体温上升 实验设备及材料超净工作台、电热干燥箱、水浴锅、天平、电子称、肛门体温计（仪器设备需经国家相关部门检定）、注射器、三角烧瓶、棉球、家兔固定架、时钟等等。

所用试剂： 医用生理盐水、75%乙醇、凡士林 供试液的制备依据标准：ISO10993：12（GB/T16886.12）按0.2g:1ml（样品:生理盐水）的比例进行萃取，条件为371，时间为721小时萃取液应在2小时内使用完毕试验家兔饲养环境1 在做热原检查前12日，供试用家兔 应处于同一温度环境中；2 实验室和饲养室的温度相差不得大于3，实验室的温度应控制在1725；3 在试验全部过程中，应注意室温的温度变化不得大于3，防止动物骚动并避免噪声干扰 试验家兔的选择 1. 未曾用于热原检查的家兔； 2. 或供试品判定为符合规定，但组内升温达0.6的家兔； 3. 或3周内未使用的家兔，均应在检查供试品前37日内预测体温，进行挑选挑选试验用家兔的条件与检查供试品时相同，仅不注射药液，每隔30分钟测量体温1次，共测8次，8次体温均在38.039.6的范围内，且最高与最低相差不超过0.4的家兔，方可供热原检查用 试验家兔的选择家兔应健康，雌雄不限，体重1.7kg以上，雌兔应无孕预测体温前7日即应用同一饲料饲养，在此期间内，体重应不减轻，精神、食欲、排泄等不得有异常现象(科学饲养) 用于热原试验后的家兔，如供试品判定为符合规定，至少应休息48小时方可再本试验用，其中体温升高0.6 以上的家兔，至少休息两周后以上。

如供试品判定为不符合规定，则组内全部家兔不再使用每一家兔的使用次数，用于一般药品的检查，不应超过10次 试验家兔的选择 （一）家兔在试验前至少1小时开始停止给食并置于适宜的装置中，直到试验完毕应使用精密度为0.1的测温装置测量家兔体温测温探头或肛温计插入肛门的深度和时间各兔应相同，深度一般约6cm，时间不少于1.5分钟，每隔30分钟测量体温1次，一般测量2次，两次体温之差不得超过0.2.试验前家兔的准备 试验前家兔的准备（二） 以此两次体温的平均值作为该兔的正常体温当日使用的家兔，正常体温应在38.039.6的范围内，且各兔间的正常体温之差不得超过1. 试验前器械的准备注射器（带针头）及一切与供试品溶液接触的器皿应是无菌、无热原，如试管等应采用干热灭菌法置烘箱中用250加热至少30分钟，也可用其他适宜的方法除去热原试验方法 取适用的家兔3只，测定其正常体温后15分钟以内，自耳静脉缓缓注入规定剂量(10ml/kg)并温热至约38的供试品溶液，然后每隔30分钟按前法测量其体温1次，共测6次，以6次体温中最高的一次减去正常体温，即为该兔体温的升高温度 试验方法如3只家兔中有1只体温升高了0.6或0.6以上，或3只家兔体温升高均低于0.6，但体温升高的总和达1.3或1.3以上，应另取5只家兔复试，检查方法同上。

结果判断在初试的3只家兔中，体温升高均低于0.6，并且3只家兔体温升高总和低于1.3；或在复试的5只家兔中，体温升高0.6或0.6以上的家兔不超过1只，并且初试、复试合并8只家兔的体温升高总和为3.5或3.5以下，均判为供试品的热原检查符合规定 结果判断 在初试的3只家兔中，体温升高0.6或0.6以上的家兔超过1只；或在复试的5只家兔中，体温升高0.6或0.6以上的家兔超过1只；或在初试、复试合并8只家兔的体温升高总和超过3.5，均判为供试品的热原检查不符合规定当家兔体温升高为负值时，均以0计展望检查结果的准确性和一致性取决于试验动物的状况、试验室条件和操作的规范性家兔法检测内毒素的灵敏度为0.001g/ml,试验结果接近人体真实情况，但操作繁琐费时，不能用于注射剂生产过程中的质量监控，且不适用于放射性药物、肿瘤抑制剂等细胞毒性药物制剂 注意事项 （1）试验室内保持安静，避免强烈直射阳光、灯光等刺激 （2）试验过程中避免家兔骚动，保持体温稳定 （3）试验室、饲养室温度及其变化应符合要求 （4）试验过程中不得随意更换肛门体温计 记录表格编号体重（kg）试验 前体温() 试验 后体温() 体温上升() 1 2 X123456 1 2.0 2 2.3 3 1.8。