乳与乳制品常规理化指标检验乳糖蔗糖和总糖的检测.doc

乳与乳制品常规理化指标检验乳糖蔗糖和总糖的检测YLNB 2.7一、高压液相色谱法（仲裁法）1. 原理食品中的多种糖，可利用高压液相色谱法的 卩一碳水化合物柱或氨基柱将它们分离，用示差折光检测器，检出各糖 液的折光指数，此折光指数与其浓度成正比2. 试剂所有试剂，如未注明规格，均指分析纯；所有实验用水， 如未注明其他要求，均指三级水2.1澄清剂：硫酸铜，质量分数7%氢氧化钠，质量分数4%2.2乙腈2.3标准溶液标准糖贮备液，10mg/ml精确称取被测糖的标样 1g,溶于水中，用水稀释至100ml容 量瓶内，定容2.3.2 标准糖工作液，4 mg/ml吸取4ml贮备液，置10ml容量瓶中，用乙腈稀释至刻度3. 仪器高压液相色谱仪，带碳水化合物分析柱或氨基柱4. 方法4.1样液制备精确称取2g左右奶粉或15g左右液态奶样品，加 30ml 水溶解，移至100ml容量瓶中，加澄清剂硫酸铜（4.1 ） 10ml, 氢氧化钠（4.1）4ml，振摇，加水至刻度，静置半小时，过 滤取4ml样品母液置10ml容量瓶用乙腈定容，通过0.45um 过滤器过滤，滤液备用4.2高压液相色谱仪工作条件：示差折光检测器：氨基柱流动相：乙腈/水=6/4流动相流速：1.0ml/min4.3进样在仪器稳定后，用注射器或进样阀注射 50uL标准样液共4次，记下保留时间，测定峰高，放弃第一次数据，取后 三者平均峰高值，同样注射样品 50ul四次得出平均峰高。

5. 结果计算样品中糖含量g/100g )=C，H10025C HH m(1)式中：C1 —标准糖溶液浓度，mg/ml;H—样品中糖的平均峰高；Hi—标准糖溶液的峰高；4 m H 100010 100m —样品的质量，g注：如果需同时测定样品中所含其他糖类，可在标准糖 溶液中加入各种糖1g，进样如前，记下各种糖保留时间，按 上列公式计算各值6. 允许差同一样品两次测定值之差不得超过两次测定平均值的 5%方法二 乳糖、蔗糖和总糖的测定（莱因一埃农氏法）1. 方法提要乳糖：样品经除去蛋白以后，在加热条件下，直接滴定 已标定过的费林氏液，样液中的乳糖将费林氏液中的二价铜 还原为氧化亚铜以次甲基蓝为指示剂，在终点稍过量时， 乳糖将蓝色的氧化型次甲基蓝还原为无色的还原型次甲基 蓝根据样液消耗的体积，计算乳糖含量蔗糖：样品除去蛋白质后，其中蔗糖经盐酸水解转化为 具有还原能力的葡萄糖和果糖，再按还原糖测定将水解前 后转化糖的差值乘以相应的系数即为蔗糖含量总糖：乳糖和蔗糖之和2. 试剂所有试剂，如未注明规格，均指分析纯；实验室用水， 如未注明其他要求，均指三级水2.1费林氏液（甲液和乙液）甲液：取34.639g硫酸铜，溶于水中，加入 0.5ml浓 硫酸，加水至500ml。

乙液：取173g酒石酸钾钠及50g氢氧化钠溶解于水中， 稀释至500ml，静置两天过滤2.2次甲基蓝溶液：10g/L2.3盐酸溶液：体积比1:12.4酚酞溶液：0.5g酚酞溶于75ml体积分数95%勺乙醇中， 并加入20ml水，然后再加入约 0.1mol/L的氢氧化钠溶液， 直到加入一滴立即变成粉红色，再加入水定容至 100ml2.5氢氧化钠：c (NaOH为300g/L取300g氢氧化钠，溶 于1000 ml水中2.6乙酸铅溶液：c ( PbAQ)为200g/L取20g乙酸铅，溶 解与100 ml水中2.7草酸钾一磷酸氢二钠溶液： 取草酸钾3g,磷酸氢二钠7g ,溶解于100mL水中3. 仪器常用理化实验室仪器4. 方法及结果计算4.1费林氏液的标定用乳糖标定4.1.1.1 称取预先在92〜94C烘箱中干燥2h的乳糖标样约 0.75g (准确到0.2mg)，用水溶解并稀释至 250ml将此乳 糖溶液注入一个50ml滴定管中，待滴定4.1.1.2 预滴定：取10ml费林氏液（甲、乙液各5ml）于250ml三角烧瓶中再加入 20ml蒸馏水，从滴定管中放出 15ml乳糖溶液于三角瓶中，置于电炉上加热，使其在 2min内沸腾，沸腾后关小火焰，保持沸腾状态 15s，加入3滴次甲基蓝溶液（2.2 ），继续滴入乳糖溶液至蓝色完全褪尽为止，读取所 用乳糖的毫升数。

4.1.1.3 精确滴定：另取10ml费林氏液（甲、乙液各 5ml） 于250ml三角烧瓶中，再加入 20ml蒸馏水，一次加入比预 备滴定量少0.5〜1.0ml的乳糖溶液置于电炉上，使其在2min 内沸腾，沸腾后关小火焰，保持沸腾状态2min,加入3滴次 甲基蓝溶液（2.2 ），继续滴入乳糖溶液（一滴一滴徐徐滴入）, 待蓝色完全褪尽即为终点以此滴定量作为计算的依据（在同时测定蔗糖时，此即为转化前滴定量） 4.1.1.4 按（2）、（3）计算乳糖测定时，费林氏液的乳糖校 正值（f1）:A1V mj 1000250=4 V1 m1(2) 4 Vj mjAL 1(3)式中：A—实测乳糖数，mgV i—滴定时消耗乳糖液量， ml;m—称取乳糖的质量，g;AL —由乳糖液滴定毫升数查表 1所得的乳糖数，mg用蔗糖标定4.121称取在105C烘箱中干燥2h的蔗糖约0.2g （准确至 0.2mg）,用50ml水溶解并洗入100ml容量瓶中，加入 10ml 水，再加入10ml盐酸（2.3 ）,置75C水浴锅中，时时摇动， 在2min30s到2min45s之间，使瓶内温度升到 67C自达到 67 C后继续在水浴中保持 5min,于此时间内使其温度升至69.5 C,取出，用冷水冷却，当瓶内温度冷却至 35C时，加2滴酚酞指示剂（2.4 ）,用300g/l的氢氧化钠（2.5 ）中和 至呈中性。

冷却至 20C，用水稀释至刻度，摇匀并在此温度下保温30min后在按4.1.1.2 和4.1.1.3 操作得出滴定10ml费林氏液所消耗的转化糖量4.1.2.2 按式（4） （5）计算蔗糖测定时，费林氏液的蔗糖校 正值（f2）:V2 m2 1000100 0.95=10.5263 V2 m2(4)10.5263 V2 m2AL（5）式中：A2 —实测转化糖数，mg;V 2—滴定时消耗蔗糖液量， ml;m2 —称取蔗糖的质量，g;AL1 —由蔗糖液滴定毫升数查表 1所得的转化糖数，mg4.2乳糖的测定样品处理称样：乳粉称取2-3g （牛乳、花色奶：17-18g ;酸 乳样品：10-12g）（准确至0.01g），用100ml水分数次溶解 并洗入250ml容量瓶中4.2.1.2 加4ml乙酸铅（2.6 ）、4ml草酸钾一磷酸氢二钠溶液，每次加入试剂时都要徐徐加入，并摇动容量瓶，用水稀释至刻度静止数分钟，用干燥滤纸过滤，弃去最初 25ml滤液后，所得滤液做滴定用滴定预滴定：将此滤液注入一个 50ml滴定管中，待测定 取10ml费林氏液（甲、乙液各 5ml）于250ml三角瓶中，再 加入20mL蒸馏水，在三角瓶中放入15mL滤液，置于电炉上， 使其在2min内沸腾，沸腾后关小火焰，保持沸腾状态 15s， 加入3滴次甲基蓝（2.2），混匀，然后徐徐滴入乳糖溶液至蓝色完全褪尽为止，读取所用乳糖的毫升数。

422.2 精确滴定：另取10ml费林氏液（甲、乙液各 5ml） 于250ml三角瓶中，再加入 20mL蒸馏水，一次加入比预备 滴定量少的乳糖溶液，置于电炉上，使其在2min 内沸腾，沸腾后关小火焰，保持沸腾状态 2min，加入3滴次甲基蓝（2.2），然后一滴一滴徐徐滴入乳糖溶液至蓝色完全 褪尽即为终点，以此滴定量作为计算的依据（在同时测定蔗 糖时，此即为转化前滴定量）乳糖含量的计算L 广人 025 100 V^< m式中：L—样品中乳糖的质量分数，Fi—由消耗样液的毫升数查表fi—费林氏液乳糖校正值；Vi—滴定消耗滤液量，mlm—样品的质量，go4.3蔗糖的测定转化前转化糖量的计算利用测定乳糖时的滴定量，自表 （6 ）g/100g1所得乳糖数，mg;1中查出相应的转化糖量，按式（7）计算：转化前转化糖書质量分数(% ) = J f2 0.25 100Vr x m(7)式中：F2 —由测定乳糖时消耗样液的毫升数查表 1所得转化糖数，mg;f 2—费林氏液蔗糖校正值；Vi—滴定消耗滤液量，mlm—样品的质量，g432样液的转化及滴定取50ml样液于100ml容量瓶中，加水10ml，再加入10ml 的盐酸（2.3 ）,置75C水浴锅中，时时摇动，在 2min30s至 2min45s之间，使瓶内温度升至 67C后。

自达到67C继续在 水浴中保持5min，于此时间内使其温度升至 69.5 C,取出，用冷水冷却，当瓶内温度冷却至 35C时，加2滴酚酞溶液指 示剂（2.4 ）,用氢氧化钠（2.5 ）中和至呈中性，冷却至20C, 用水稀释至刻度，摇匀并在此温度下保温 30min后再按滴定，得出滴定10ml费林氏液的转化液量转化后转化糖质量分数 （% ）_ F3 "2 汉0.50 勺00 /8）V2 m式中：F3 —由V2查表1所得转化糖数，mg；f 2—费林氏液蔗糖校正值；滴定消耗转化液量， mlm—样品的质量，g蔗糖含量的计算样品中蔗糖含量（g/100g）=l「l2 0.95 （9）式中：Li——转化后转化糖质量分数， %L 2――转化前转化糖质量分数，%0.95 ――蔗糖转化系数如样品中蔗糖与乳糖之比超过 3： 1时，则计算乳糖时应在滴定量中加入表2中的校正值后再查表 1和计算总糖二蔗糖+乳糖5.允许差5.1重复性由同一分析人员在短时间间隔内测定的两个结果之间的差值，不应超过结果平均值的 1.5%5.2重现性由不同实验室的两个分析人员对同一样品测得的两个结果之差，不应超过结果平均值的 2.5%表1乳糖及转化糖因数表（10ml费林氏液）滴定量，乳糖，mg转化糖，滴定量，乳糖，mg转化糖，mlmgmlmg1568.350.53367.851.71668.250.63467.951.71768.250.73567.951.81868.150.83667.951.81968.150.83767.951.92068.050.93867.951.92168.051.03967.952.02268.051.04067.952.02367.951.14168.052.12467.951.24268.052.12567.951.24368.052.22667.951.34468.052.22767.851.44568.152.32867.851.44668.152.32967.851.54768.252.43067.851.54868.252.43167.。