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UPLC-ELSD 法测定 12 种保健食品中的牛磺酸 康明芹 陈明岩 王岸英 徐立明 张蕊蕊 张旭光 吉林出入境检验检疫局 吉林大学公共卫生学院 摘 要： 目的:建立保健食品中牛磺酸含量的测定方法方法:采用超高效液相色谱-蒸发光散射 (UPLC-ELSD) 法测定保健食品中牛磺酸含量色谱条件:采用 BEH Amide (50 mm×2.1 mm, 1.7μm) 色谱柱, 梯度洗脱, 流动相 A 为乙腈, 流动相 B 为 0.1%甲酸水, 流速 0.35m L·min-1, 柱温:40℃, ELSD 漂移管温度 40℃, ELSD 气体压力 150 k Pa, 增益值 100结果:牛磺酸浓度在 0.102.0 mg·m L-1范围内与峰面积呈良好线性关系 (r=0.999 9) , 不同剂型保健食品中牛磺酸的回收率在 98.5%100.7%之间, RSD 均小于 1.3 (n=6) 6 批次液体制剂样品的测定结果分别为:38.60、8.702、0.501 0、5.152、5.085、3.821 mg·m L -1;3 批次固体制剂样品的测定结果分别为:6.703、4.560 和 15.81 g/100 g;2 批次软胶囊样品的测定结果分别为:24.20、8.206 g/100 g;1 批硬胶囊样品的测定结果为 19.18%。

结论:本法经方法学验证, 可用于保健食品中牛磺酸的测定关键词： 牛磺酸; 保健食品; 超高效液相色谱; 蒸发光散射; 液体制剂; 固体制剂; 软胶囊; 硬胶囊; 作者简介：康明芹 Tel: (0431) 87607321;Email:85596583@.com收稿日期：2016 年 12 月 8 日基金：国家质检总局科技项目 (2012IK162, 2013IK163) Determination of taurine in health food by ultra-performance liquid chromatography with evaporative light scattering detectorKANG Ming-qin CHEN Ming-yan WANG An-ying XU Li-ming ZHANG Rui-rui ZHANG Xu-guang Jilin Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau; School of Public Health of Jilin University; Abstract： Objective:To establish a method for the determination of the contents of taurine in health food.Method:The content of taurine in health food was determined by ultra-performance liquid chromatography with evaporative light scattering detector.The chromatographic condition was as follows:BEH Amide (50 mm×2.1 mm, 1.7μm) was adopted, the mobile phase A was acetonitrile, the mobile phase B was water containing 0.1%formic acid at the flow rate of 0.35 m L·min-1 and the column temperature was 40℃, the drift tube temperature was 40℃, the gas pressure was 20 psi, the yield value was 100.Result:The calibration of taurine concentration was linear in the range of 0.10-2.0 mg·m L-1 (r=0.999 9) , The average recovery was 98.5%-100.7%with RSD<1.3% (n=6) .The contents of taurine in six batches of liquid samples were 38.60, 8.702, 0.501 0, 5.152, 5.085 and 3.821 mg·m L-1;The contents of taurine in three batches of solid samples were 6.703, 4.560 and 15.81 g/100 g;The contents of taurine in two batches of soft capsule samples were 24.20 and 8.206 g/100 g;The contents of taurine in one batch of hard capsule sample was 19.18%.Conclusion:It is proved by methodology validation that the method can be used for the determination of the contents of taurine in health food.Keyword： taurine; health food; UPLC; ELSD; oral liquid formulation; oral solid preparation; soft capsule; hard capsule; Received： 2016 年 12 月 8 日牛磺酸 (taurine) 又称 2-氨基乙基氨基酸, 是广泛存在于体内的一种含硫的非蛋白氨基酸, 是很多保健食品的成分之一[1]。

由于人体合成牛磺酸所需的半胱氨酸亚硫酸羧酶 (CSAD) 活性较低, 因此人体主要依靠摄取食物中的牛磺酸来满足机体需要牛磺酸具有保护视网膜、心肌、抗氧化作用, 并有促进免疫功能、促进脂类吸收的作用, 被广泛添加在保健食品中, 但过量的牛磺酸能抑制体内其他营养元素的吸收, 造成人体内营养失衡因此建立保健食品中牛磺酸的简便、准确的定量方法是必要的目前测定牛磺酸的方法主要有酸碱滴定法[2]、电位滴定法[2]、薄层色谱法[4-5]、气相色谱法[6]、高效液相色谱法[7-8]、离子色谱法[9]、氨基酸分析仪测定法[10]、液相色谱-质谱/质谱法[11]、毛细管电泳法[12]等我国国家标准 (GB/T 5009.169-2003) 采用邻苯二甲醛柱前衍生法和薄层色谱法, 衍生法操作复杂、衍生物稳定性差, 而薄层色谱法、酸碱滴定法灵敏度和特异性均较差, 无法准确定量, 已逐渐被淘汰王宏华等[13]利用柱前衍生-高效液相色谱法测定了保健食品纳豆胶囊中的牛磺酸, 黄丽丹等[8]利用 2, 4-二硝基氟苯柱前衍生化 HPLC 法测定了保健食品中牛磺酸含量, 均是利用衍生化的方法, 过程繁杂;王洪健等[10]利用氨基酸自动分析仪建立食品中牛磺酸的测定方法, 但利用氨基酸自动分析仪所需要的时间较长且普及性不高;液相色谱-质谱/质谱法对痕量分析比较适用, 陈晓峰等[11]利用超高效液相色谱串联质谱法直接测定了婴幼儿乳粉中的牛磺酸。

保健食品中牛磺酸含量较高, 因此本文采用 UPLC-ELSD 测定不同剂型保健食品中牛磺酸的含量, 前处理较为简单, 方法通用性强, 可避免繁杂的衍生过程, 能准确、快速地测定保健食品中牛磺酸的含量1 仪器和试药Waters E2695 高效液相色谱仪, 配备蒸发光散射检测器 (美国 Waters 公司) ;Vortex-Genie 2 型涡旋混匀器 (美国 Scientific Industries 公司) ;Milli-Q 纯水器 (美国 Millipore 公司) ;CPA225D 电子天平 (德国 Sartorius 公司) ;KQ-1000KDB 型超声波清洗器 (中国昆山市超声仪器有限公司) 乙腈、甲酸均为色谱纯, 德国 Merck 公司;牛磺酸对照品, 纯度≥99.0%, 美国Fluka 公司色谱柱:BEH Amide (亚乙基桥杂化颗粒键合氨基) 50mm×2.1 mm, 1.7μm;Waters 公司) 实验用样品均从市场购买, 分别为东方同乐口服液 (批号 20160403) ;健尔聪学生口服液 (批号 20150303) ;红景天口服液 (批号 160401) ;力克保健液 (批号 20150725, 20150613) ;生命一号 (批号 20150113) ;海王金樽牡蛎大豆肽肉碱口服液 (批号 20150821) ;汤臣倍健鱼油牛磺酸软胶囊 (批号 20160403G) ;海王牌 DHA 藻油锌牛磺酸软胶囊 (批号 20151001) ;海王牌针叶樱桃牛磺酸维C 咀嚼片 (批号 20150603) ;佳加学生钙牛磺酸矿维咀嚼片 (批号 20160304028) ;汤臣倍健氨基酸牛磺酸片 (批号 20140801A) ;中和鸿业牌增强免疫力胶囊 (批号20151101) 。

2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱:Waters BEH Amide (50 mm×2.1 mm, 1.7μm) ;流动相 A:乙腈;流动相B:0.1%甲酸水;梯度洗脱 (表 1) ;流速:0.35 m L·min;进样量:1μL;柱温:40℃;ELSD 漂移管温度 40℃;ELSD 气体压力:150 k Pa;增益值:100表 1 超高效液相色谱梯度洗脱程序 Tab.1 The gradient elution program of UPLC 下载原表 2.2 溶液的制备2.2.1 对照品溶液取牛磺酸 100 mg, 精密称定于10 m L 量瓶中, 加水溶解, 稀释并定容至刻度, 摇匀, 即得2.2.2 供试品溶液液体制剂:用水进行适当稀释, 过 0.22μm 滤膜作为供试品溶液固体制剂:取样品适量, 研匀, 精密称取细粉适量置于 50 m L 量瓶中, 加水 30 m L, 频率提取 10 min, 加水稀释并定容至刻度, 摇匀, 过 0.22μm 滤膜作为供试品溶液;软胶囊:取软胶囊 20 粒, 将内容物混匀, 精密称取适量于 50 m L量瓶中, 用三氯甲烷 150μL 完全溶解后用水稀释并定容至刻度, 摇匀后过0.22μm 滤膜作为供试品溶液;硬胶囊:取样品适量, 研匀, 精密称取细粉适量置于 50 m L 量瓶中, 加水 30m L, 频率提取 10 min, 加水稀释并定容至刻度, 摇匀, 过 0.22μm 滤膜作为供试品溶液。

2.2.3 空白溶液取纯水作为样品空白溶液2.3 系统适用性试验精密量取空白溶液、对照品溶液及供试品溶液及进行测定, 色谱图见图 1, A 为空白溶液色谱图, B 为对照品溶液色谱图, C1、C2、C3、C4 分别为液体制剂、固体制剂、软胶囊、硬胶囊的典型色谱图样品色谱图中, 牛磺酸色谱峰与相邻谱峰的分离度均大于 1.52.4 线性关系考察精密量取牛磺酸对照品溶液 0.1、0.2、0.4、0.8、2.0 m L, 分别置 10 m L 棕色瓶中, 用水稀释并定容至刻度, 制成质量浓度为 0.100 0、0.200 0、0.400 0、0.8000、2.000 mg·m L 牛磺酸工作标准溶液以质量浓度的对数值为横坐标 (X) , 峰面积的对数值为纵坐标 (Y) 绘制标准曲线线性方程:牛磺酸质量浓度在 0.100 0~2.000 mg·m L 范围内线性关系良好2.5 稳定性试。