草履虫的培养观察(精).doc

培养和观察草履虫草履虫是原生动物的重要代表，也是初学动物学最先接触的动物以草履虫为代表的 纤毛虫在水质净化及监测上有着十分重要的价值本实验主要是介绍草履虫的纯化和多神培 养方法，并通过观察，掌握原生动物的基木特征，进而更好地理解有关原生动物的其他知识一、实验准备（一） 材料干稻草、旧稻草垫子、干玉米雄花穗、干荷叶、小麦粒、离芭叶、干酵母、动物内脏 （肝、胰、甲状腺等）、蛋黄、牛肉汁（50g牛肉、100g水，煮熟）二） 用品显微镜、放大镜、电炉、恒温培养箱、载玻片、盖玻片、滴管、微吸管、解剖针、烧 杯、培养皿、凹玻璃片、纱布、吸水纸、大头针、琼胶、质量分数为3%的甲基纤维素溶液、 碘液、葡萄糖、氯化钠、质量分数为1 %的洋红溶液、质量分数为0. 1%的中性红溶液三） 采集和培养1. 采集选取多处进行采集凡是有机物含量丰富的污水，均可采250〜500叽水样，当场用放 大镜检查水样镜检，凡呈乳白色，个体较大，圆柱状，一端稍圆一端稍尖的动物，就是草 履虫如果多次检查均未发现草履虫，水样可弃之，另选别处采集水样取I门I，经显微镜检 杏，凡含有草履虫的水样，要在离水样瓶1 0〜2 Ocm处，放置一盏灯，经以2 4h照明， 使草履虫向水的上层聚集。

2 .培养液制备制备方法较多，可根据教学实际进行选用1） 稻草培养液干稻草10g,剪成3Cm长,放人烧杯，加水1000ml,煮沸10~15min, 放凉，补足失去水分在1 OOOmL水面处划一刻度线，便于廿后失水再补2） 玉米雄花穗培养液 干玉米雄花穗15g,剪成3Cm长，加水1 000ml,煮沸10〜15min3） 荷叶培养液 干荷叶50g,适当撕碎，加水lOOOmL,煮沸15〜20min4） 麦粒培养液小麦粒1 0颗，加水1 0 0 OmL,煮沸10~i5mino（5） 离芭、稻草混合培养液离芭叶25g,加水500ml,煮沸5min,补足失去的水分后, 再加稻草培养液500ml o（6）干酵母培养液 市倍干酵母0. 59,加水1000mL，摇荡均匀后备用7） 脏器培养液 动物内脏5g,剪碎，加水1000ml,浸泡Id,滤去内脏与残渣，留下 纯净培养液8） 蛋黄培养液煮熟鸡蛋黄2g,加水1000ml,搅拌均匀9） 稻草垫培养液旧稻草垫，取其10g,剪成3cm长，加水lOOOmL,再加50g葡萄 糖以上方法中，第1〜8种，无论培养液煮沸与否均要放进恒温箱，在25〜300C下培养1〜 2d,目的是促使培养液长出细菌，以便接种草履虫后，供草履虫索饵。

而第9种方•法，既不 需煮沸培养液，又不需接种草履虫，直接将培养液放进恒温箱培养，只要稻草上附有草履虫 包囊，当包囊处于适宜条件时，草履虫就会破囊而出，进行旺盛的代谢活动，在5〜7d内大 量繁殖起来牛奶液培养将牛奶液搅拌均匀后，移入草履虫，温度保持在摄氏22度，二三廿后，草 履虫迅速繁殖，并旦出现处于分裂生殖状态的草履虫5口内虫体数量达到高峰，以后每隔 2星期在原有的培养液内再加入牛奶液，可长期维持草履虫的生活取多根完整的黄豆芽，分别放入多只试管内，试管中注入池塘水或河沟水，水的深度 以完全淹没黄豆芽为宜管I」用纱布塞住，将试管置于试管架上，在20C〜25C温度下放 置大约7〜10天，就会看到试管液面处有许多游动的小白点，这些小白点就是草履虫3.培养下面介绍三种培养方法1） 采集的水样经一昼夜照光，从水面下lCm处，在瓶壁上己经形成一圈“白线”的 地方，用微吸管取液滴一滴到载片上，经镜检证实水滴中只含草履虫，无任何其他微型生 物时，就可用一个新的干净滴管吸培养液，将载片上的草履虫吹人培养瓶中，放置在25〜 300C环境中继续培养5〜7d,草履虫就会大量繁殖起来2） 如果水样中混有少量其他微型生物，可以在载片上先滴一滴牛肉汁，再滴一滴含 有草履虫的水样，两滴间距2cm左右,用解剖针从肉汁一端引一条线到含有草履虫的水滴上。

两滴连结后，用放大镜仔细观察，会发现草履虫对牛肉汁敏感性很强，草履虫游到牛肉汁滴 的速度也快然后迅速将载玻片放置在显微镜下检查，在确认牛肉汁滴内尤其他微型生物时, 迅速用吸水纸切断连结线，用纱布擦干另一侧的水滴，用于净滴管把含草履虫的牛肉汁吹人 培养瓶中如此重复操作几次，然后将培养瓶放在25〜300C温度下继续培养，5〜7bd后就 会有大量草履虫繁殖出来3） 如果水样中混杂微型生物的种类与数量过多，不易排除，就需要采用逐步扩大法 一般是从水样中取液，在凹玻片内滴上1〜2滴，放置在显微镜下，边观察边用微吸管吸走 其他微型生物当凹坑水中无任何其他微型生物而只含草履虫时，往凹坑放少许培养液，在 25〜300C下培养，每LI补加1 / 3〜2 / 3培养液如果儿天后，草履虫数量有所增加， 就将其转入表面皿或培养皿，继续扩大培养如果再过几天后草履虫纯化培养效果理想，数 量又有所增加，就要再转入大容器培养液继续培养，一直到大容器培养液出现云雾状群落, 镜检全是草履虫时为止这里特别需要指出的是，草履虫的培养有可能失败究其原因很多，其中有两点是主 要的：其一，可能是接种草履虫的数量过少，个体质景又较差，它们进入新环境后，遇有不 适，很快死去，未能传宗接代；其二，可能是稻草之类的材料发霉或残留农药过多，接种后 的草履虫中毒死亡，不能繁殖。

因此，一旦发现培养液混浊、有特异臭味，镜检无草履虫, 就要弃之为避免由于培养失败贻误教学工作，应多做几瓶培养液，多选用几种培养方法4 .保种下面介绍三种保神方法1） 培养和观察草履虫的实验一结束，可将培养液集中在一起，放置在环境适宜处， 时常滴上1〜2滴牛奶（或豆浆），再补足失水景这些水样就是培养新的草履虫的材料， 使用起来十分方便2） 也可以将实验所剩培养液，注入几支试管里，按1： 4比例，注入新的麦粒浸出 液，管口用脱脂棉封住，然后将试管捆在一起，外裹纱布，竖放在容器内，就可长期保存3） 也可以在所剩培养液的容器上，加盖一张较厚的洁净的纸，天长日久，培养液会 逐渐干涸，只剩干稻草实验前，只要1何容器里加注凉开水，搅拌一下，浸渍Id用这种 浸渍液作接种材料，放人预制的新培养液里，在25〜30C的环境中培养，3〜5d后就会有新 的草履虫出现二、观察草履虫的方法步骤（一） 草履虫对刺激的反应取一滴清水，滴到干净载片上在清水滴旁边滴一滴含草履虫的培养液，在培养液远 离清水滴的边缘放一小条棉纤维，再在棉纤维未端放一点食盐，然后用解剖针迅速从清水滴 一侧向培养液水滴划去，将两者连通起来这时逐步溶解的氯化钠沿着棉纤维桥梁缓缓进入 培养液滴中，草履虫由于受到氯化钠的刺激，立即产生强烈的I口I避反应，一个个向清水滴游 去。

二） 草履虫的运动、消化、排泄细胞器的观察1. 第一种方法在载玻片上，滴一滴草履虫培养液，再加一滴质量分数为3%的甲基纤 维素液，用大头针轻轻混匀，盖好盖片，虫体由于在较轴稠环境中，运动受到极大限制，速 度明显减慢，在低倍镜下很容易找出运动最慢者，将它移至视野中央，转换高倍镜进行观察, 会见到虫体呈倒草鞋形，口沟明显，周身纤毛缓缓摆动，胞咽内波动膜急速地运动，体内有 大量的食物泡随着细胞质流动而流动如果我们紧盯着虫体一端观察，就会见到放射状的收 集管与位于其中间的伸缩泡交替扩张与收缩用这种方法进行观察,最好在20min之内完成, 否则虫体会发生变形崩解，如未观察完，需重新制片在制片时，为了能显示出食物泡，E以在滴好的培养液中，用玻璃棒蘸少量质景分数 为1%的洋红溶液与质液分数为0.1 %的中性红溶液与之相混，静置3〜5min,再加质量 分数为3%的甲基纤维素液，这样制片后镜检就能见到大小不一呈红色的食物泡，在草履虫 体内随细胞质的流动而流动2. 第二种方法 在载片上,先将滴加的培养液与染液相混,将一根略长于载片宽度的 头发，放在液滴右侧，垂直于载片长边方向放好，然后盖上盖玻片，使头发上下两端正好露 在载片之外。

取一小块吸水纸，沿着盖片有头发一侧的边缘吸水，吸到盖片下的水分大多被 吸走而又没有出现失水空缺的现象为止这时，用左手轻按着盖片，右手将头发轻轻拉出， 这样载片与盖片通过剩余的极少量水而紧紧地贴在一起在低倍镜下观察，就会看到放置头 发的位置，有不少草履虫被阻遏在那里，并被盖片斥成扁平状，找出其中运动最缓慢者，转 换高倍镜继续观察三） 大核的观察滴一滴培养液于载片上，加少许碘液与之相混，盖好盖片在低倍镜下观察，就会发 现被杀死的草履虫的身体中央，有一个大的肾形结构被染成深褐色，这就是草履虫的大核四） 草履虫接合生殖现象的观察经研究，每一种草履虫内存在着不同的繁殖群，每一个繁殖群内又存在不同的接合型, 只有同一个繁殖群内不同的接合型之间才能发生接合，进行接合生殖过去那种将含有生长 旺盛的草履虫的培养液，经离心去掉培养液，加自来水稀释，间隔一段时间观察接合生殖现 象的方法，之所以有时观察到的接合生殖率过低，其主要原因在于它们大多数属于不同的繁 殖群，不会发生接合，只有少数草履虫属于同一个繁殖群内的不同接合型，所以观察到的接 合生殖现象甚少为了避免上述接合生殖率过低的现象发生，就要把多处采来的草履虫，单 独进行纯化培养，并编号，勿混。

当草履虫旺盛的生长势头达到顶点，培养液开始出现变清 透明的时候，表明虫体己饱食即要转入饥饿，这时可将各个培养液一一进行离心，然后将浓 集的草履虫按照序号两两之间进行混合，放在20-2500环境下，每隔lh观察一次，如果 发现某组虫体间发生接合，成对现象较多，就表明它们是属于同一繁殖群内的两个相对接合 型以后只要将这两个相对接合型虫体各自分开培养，不断提供充足饵料，并让它们保持旺 盛生长，就可以随时取样相混合，草履虫会立即或在数小时之内发生接合生殖三、教学建议草履虫培养方法甚多，可以考虑在生物课外活动小组开展活动时，让学生分组同步进 行培养除了培养材料不同之外，其他一切条件都要一致，包括培养液的量接神草履虫口 期、接种草履虫数量、培养温度选择、间断观察时间、取样统计方法等待一个周期（如 15d）结束，就可以各自绘出不同培养液内草履虫增长曲线，通过对比，找出不同培养液间 草履虫数量出现的高峰口，以及数量大小，从中比较出培养液质量的优劣，为以后培养草履 虫时选择适宜材料找出根据1、 草履虫的培养：草履虫习性喜光，体长约0.15—0.30亳米，一般生活在湖泊、坑塘里，在腐殖质丰富 的场所及干草浸出液中繁殖尤为旺盛，适宜温度为22—28度，取池水置于玻璃培养缸中， 如见水层中有游动的颗颗白色小点，即表明有其存在，大量繁殖时，在水层中呈灰向色云雾 状飘动或回荡，乂称为“洞水”。

取“泡水”一滴置于显微镜下观察，每一白色小点便是草履虫 培养时可取“洞水”作种源另一种方法是取稻草绳约70厘米长，整段或剪成若干段置于玻 璃缸中，加入约5000亳升水，移入少量种源，将玻璃缸置在光照比较充足的地方，在水温 18—24度的水体中培养6—7天，草履虫己繁殖极多繁殖数量达顶峰时，如不及时捞取, 次II便会大部分死亡，所以一定要每天捞取，捞取量以1/3-1/2为宜同时补充培养液， 即添加新水和稻草，如此连续培养，连续捞取，就可不断地提供活饵2、 变形虫的培养：变形虫喜欢生活在水质比较清的水池或水流缓慢藻类较多的浅水中，有时附着在浸没于 水中或泥底的腐烂植物上，或浮在水面的泡沫上培养时取泥底表面的泥土或浮沫的水滴作 为种源，变形虫生活的最适宜温度是18—22度，春秋两季最易采集到变形虫的体型较大, 约有0.2—0.6亳米，肉眼可见一小白点，故可利用其在饱食时突然受震而牢固地附着在物 体上的特性把它分离出来作为种源其方.法是取含变形。