
免疫扩散试验.docx
1页免疫双向扩散试验一 原理为免疫沉淀反应剂中的抗原和抗体在含有电解质的琼脂凝胶中扩散相遇,在二者比例合适的地方,生成肉眼可见的线状沉淀物,即特异性抗原-抗体复合物琼脂凝胶含水量为98-99%时,形成网状结构,允许分子量20kDa以下的大分子物质自由扩散因为大部分抗原、抗体的分子量在20kDa以下,所以在琼脂凝胶中基本上可以自由扩散因不同抗原的化学结构、分子量和带电情况不同,所以在琼脂凝胶中的扩散速度不同,因而将不同的抗原进行分离彼此分离的抗原与它们相应的抗体在不同的部位结合,二者在比例适当的地方,因抗原-抗体复合物是不溶性的而从溶液中析出,变成肉眼可见的沉淀物,称为沉淀线• 实验材料正常人血清,兔抗人抗血清试剂配制0.9%的生理盐水100ml• 取0.9g氯化钠加水到100ml1.5%琼脂糖(每实验台配制50ml即可)• 取1.5g琼脂糖用100ml生理盐水溶解,微波炉(或电炉)加热融化抗血清每实验台一份制板(是本实验的关键)取一清洁干燥的载玻片平放于清洁且水平处,做好标记后(姓名,浓度)将已经融化并冷却到30度左右的琼脂糖用小烧杯铺于载玻片上琼脂糖铺板后应该均匀,不能凸凹不平,注意胶的厚度。
实验操作程序用生理盐水配制1.5%琼脂糖加热,融化制板,厚2-3mm打孔(用吸管打孔),小孔分布形状如图10pl人血清(淡黄色)加入中央孔(注意微量进样器的使用)不同稀释倍数(原倍、2、4、8、16、32倍)的兔抗人抗血清(色深)加入周围各孔20pl(用生理盐水在1.5ml小离心管倍比稀释即可,)]置湿盒中37度过夜根据沉淀线得出抗体效价。
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