生物常规试剂的配制.pdf

附录 1 生物实验室常用试剂的配制 一、检验酸碱性的试剂 1. 酚酞试液取 0.1g 酚酞，溶解在 100mL60 ～90% 的乙醇溶液里，装在试剂 瓶内密闭保存酚酞试液在碱性溶液中呈红色 2. 甲基橙试液甲基橙是橙黄色粉末或晶状鳞片取0.1g甲基橙溶解在 100mL蒸馏水里制成当pH值由 3.1 ～4.4 时，颜色为红至黄色 3. 甲基红试液甲基红是红紫色晶体或红色粉末把0.1g甲基红溶在 100mL60% 乙醇里制得当 pH值由 4.4 ～6.2 时，颜色由红色至黄色 4. 麝香草酚酞（百里酚酞）试液把 0.1g 白色的麝香草酚酞溶解在100mL 90% 乙醇里制得当 pH值由 9.4 ～10.6 时，颜色为无色至蓝色 5. 溴甲酚紫指示剂将 0.1g 溴甲酚溶于 9.25mL的 0.02mol/L 氢氧化钠溶液 中，加蒸馏水稀释至 250mL制得当 pH值由 6.2 ～6.8 时，颜色由淡黄色变为淡 紫色，变色点在 pH 6.7 6. 溴甲酚绿试液溴甲酚绿是黄色晶体或红棕色粉末把0.1g 溴甲酚绿溶 于 100mL 20% 乙醇中，或把 0.1g 溴甲酚绿与 2.9mL 0.05mol/L 氢氧化钠溶液研 匀，用水稀释到 100mL制得。

当 pH值由 3.8 ～5.4 时，颜色由黄至蓝色 7. 甲基紫（结晶紫）试液把 0.1g 深绿紫色的甲基紫溶解在100mL的水里 制得当 pH值由 0.13～0.5 时，颜色由黄至绿； pH值由 1.0 ～1.5 时，颜色由 绿至蓝； pH值由 2.0 ～3.0 时，颜色由蓝至紫 8. 甲酚红指示剂把 0.1g 深红色的甲酚红溶解于100mL 50% 的乙醇中，或 将 0.1g 甲酚红与 5.3mL 0.05mol/L氢氧化钠研匀，用水稀释到100mL制得当 pH值由 0.2 ～1.8 时颜色由红至黄； pH值由 7.0 ～8.8 时，颜色由亮黄至紫红 甲酚红指示剂遇少量二氧化碳，能快速变色，反应灵敏，效果明显 9. 刚果红试纸（红色）把 0.5g 峋果红溶解于1L 水中，加入 5 滴乙酸， 滤纸用温热溶解液浸透后，取出晾干遇酸性溶液变蓝色当pH值变化范围为 3.0 ～5.2 时，颜色由蓝至红 二、反应试剂 1. 鉴定葡萄糖的试剂 （1）班氏（ Benedict）试剂 ①在 600mL 蒸馏水中溶解 173g柠檬酸钠和 100g 无水碳酸钠，冷却后稀释 到 850mL ②在 100mL 热蒸馏水中溶解17.4g 无水硫酸铜。

冷却后稀释到150mL把 硫酸铜溶液缓缓倒入上述柠檬酸钠一碳酸钠溶中，边加边搅拌， 如产生沉淀 要 过滤，班氏试剂配制后能长期使用如存放较久而产生沉淀时， 可取上层清液使 用，不必重配 （2）斐林氏（ Fehling’ s Solution）试剂 ①取 35g硫酸铜，溶解在400mL 蒸馏水里，加蒸馏水到500mL ②取 85g氢氧化钾（或 70g 氢氧钠）和 175g酒石酸钾钠，溶解在400mL 蒸 馏水里，加水馏水到500mL 上述两种溶液要分别保存， 使用时再等量地混和并搅拌 如溶液里有葡萄糖， 加等量斐林试剂，煮沸，会产生红色的氧化亚铜沉淀2.鉴定淀粉用的碘液取 2g 碘化钾，溶解在10 mL 蒸馏水中，再加1g碘， 待溶解后用蒸馏水稀释到300mL，即成碘液溶液在光亮处容易变成氢碘酸，须保存在深色玻瓶里 3.鉴定蛋白质用的双缩脲试剂分别配制 10%氢氧化钠溶液和1%硫酸铜溶 液，待用在 3 毫升待测中加入 1 mL 10%氢氧化钠溶液和1 滴 1%硫酸铜溶液 如果有蛋白质，会出现紫色反应 4.鉴定脂肪的试剂苏丹 IV 乙醇饱和溶液取 0.2g苏丹 IV ，放入无水乙醇 中，加热，使它充分溶解，成为饱和乙醇溶液。

过滤后倒进试剂瓶内密闭保存备 用 苏丹Ⅲ溶液的配制是： 0.1g 苏丹Ⅲ粉末加入95%乙醇 100mL，待全部溶解 后便可使用 5.提取植物 DNA 用的研磨液10.1g 三羟甲基氨基甲烷（ Tris）的盐酸溶液 (PH=8)2mL 和 8.67gNaCl、37.2g乙二胺四乙酸二钠（ EDTA）、20g十二烷基磺 酸钠（ SDS）混合溶解后，再用蒸馏水定容至1000mL 研磨液中各种成分的作用Tirs/HCl：提供缓冲体系， DNA 在这个缓冲体系 中呈稳定状态 NaCl 溶液： 0.15mol/L，能很好地溶解DNA EDTA：为 DNA 酶的抑制剂，可防止细胞破碎后DNA 酶降解 DNA SOS：可使蛋白质变性，与 DNA 分离 6.鉴定二氧化碳的试剂 （1）石灰水取饱和石灰水澄清液，密闭瓶内备用 （2）氢氧化钡（Ba(OH)2）在蒸馏水中加氧化钡得氢氧化钡氢氧化钡遇到 二氧化碳，也会生成碳酸钡白色沉淀，使溶液浑浊 （3）溴代麝香草酚蓝溶液取 0.1g 溴代麝香草酚蓝，溶解在100mL 蒸馏 水里，滴入少量 0.1%氢氧化钾溶液，使它成为碱性溶液而呈蓝色 本溶液 pH 值变化范围是 6.0（黄）至 7.6（蓝）。

待测物中如有二氧化碳， 会形成碳酸而使溶液变成黄色 三、分离液 1.用于分离肌纤维的试剂 （1）马克凯郎（ Maecallum）氏液也叫硝酸甘油溶液，取1 份浓硝酸、 2 份甘油、 2 份水、混合制得适于分离横纹肌和心肌组织 （2）30%氢氧化钾溶液或30%氢氧化钠溶液肌肉小块浸泡时间0.5～1 小 时 2.用于分离神经细胞的试剂 （1）甲醛一生理盐水溶液称取 58.44g氯化钠，用蒸馏水溶解，再稀释到 1000mL，加入 2g 40%甲醛溶液，可得甲醛一生理盐水溶液 这种溶液也是很好的上皮细胞分离液，既分离迅速， 又能保护纤细的上皮细 胞纤毛在上述溶液里，分离小肠和气管上皮组织需2h，口腔和皮肤上皮组织 需 3 天 （2）硼酸一生理盐水溶液在 0.75%生理盐水中加入硼酸，使成为饱和溶 液可用来分离脊髓灰质或脑灰质部位的神经组织 3.用于分离神经纤维的试剂硝酸银溶液取 0.5g硝酸银，溶解在 100 mL 水在即成 4.用于分离植物根尖细胞的试剂 （1）盐酸乙醇溶液在 1 份 95%乙醇中徐徐加入 1 份浓盐酸，即成盐酸乙 醇溶液密闭保存 2）4%盐酸溶液 5.用于分离植物纤维的试剂取 10g 氢氧化钠（或氢氧化钾） ， 溶解在 90mL水里，密闭保存。

6.用于分离植物木质部细胞的试剂—硝酸铬酸溶液取 1%硝酸和 10%铬酸 各 1 份配成 7.用于细胞质壁分离的试剂（1）30%蔗糖液（ 2）5%氯化钠溶液（ 3）5% 硝酸钾溶液 8.用于分离上皮细胞的试剂 （1）甲醛一生理盐水溶液（配方同前述）；（ 2）水合氯醛溶液取 5g 水合氯醛，用蒸馏水溶解，再稀释到100mL 制得上皮组织浸泡时间为一二天 9.用于分离植物细胞中绿体的试剂0.3mol/L 蔗糖 -0.01mol/L3氯化钾 -0.05mol/L 磷酸盐缓冲液（ PH=7.2）0.05mol/L 磷酸盐缓冲液的配制法是： A 液：取 0.05mol/L 的 Na2HPO4·12H2O(1.79g)溶解在 100mL 蒸馏水里 B 液：取 0.05mol/L 的 KH2PO4（0.58g）溶解在 100mL 蒸馏水里 取 A 液 80mL 和 B 液 20mL 混和后调整 PH=7.2即可 四、染色剂有些动植物组织和大多数细胞及细胞器是无色透明的，必须经 染色剂染色，才能在显微镜下观察清楚，常用染色剂的制法和适用范围如下表 名称制法适用范围洋红溶液取 5g明矾溶解在 95 mL蒸馏水里， 再加 0.5 克洋红，煮沸，冷却，过滤， 可加少许石炭酸防霉细胞核、整体标本、如 水螅、血吸虫乙酸洋红溶液取 100mL 45%乙酸，煮沸 30 秒， 加入 1 克洋红，搅拌，再煮2－5min， 冷却，过滤染色体、 洋葱表皮细胞、 口腔上皮细胞硼砂洋红溶液取 4g硼砂溶解在 96mL 蒸馏水里， 再加 3g 洋红， 加热到溶解，复用 100mL 70%乙醇冲淡。

经 24h过滤细胞核、淀粉粒、整体 标本铵明矾洋红溶 液取 5g 硫酸铝铵（铵明矾）溶解在 95mL 蒸馏水里，再加 0.5g洋红，煮沸， 冷却，过滤可加少许防腐剂整体标本、 蕨类原叶体、 植物表皮中性红溶液取 0.1g 中性红溶解在 500mL 的蒸馏水 里原生动物食物泡、动植 物组织活细胞内含物石炭酸品红 （苯酚品红） 溶液取 10g 石炭酸溶解在 190mL 蒸馏 水里，成甲液另取 0.3g 碱性品红（品 红）溶解在 10mL 95%乙醇里，成乙液 把甲液倒入乙液， 以蒸馏水稀释 5 倍现 用细菌、放线菌、原球藻， 胶原纤维、弹性纤维 中枢神经组织核质酸性品红溶液取 1g 酸性品红（品红）溶解在99mL 蒸馏水里细胞中白质体，动物细 胞细胞质，植物皮层、 髓部的薄壁细胞和纤维 素壁伊红溶液取 1g 伊红溶解在 99mL 蒸馏水里 或 99mL 70%乙醇里细胞质刚果红溶液取 0.1～0.2 g 刚果红溶液在100mL 蒸馏水里活菌、植物纤维素、动 物弹性纤维、胚胎材料乙酸地衣红溶 液取 100mL 45%乙酸，煮沸，徐徐加 入地衣红，直到饱和为止，冷却、过滤染色体番红花红溶液用番红花红配成0.5～1.0%乙醇溶液植物木质化、木栓化、 角质化组织、植物蛋白 孢子囊、细胞核、染色 体苏木精溶液取 1g 苏木精溶解在 6mL 无水乙醇 里，成甲液。

另配铵明矾饱和水溶液， 成乙液取 4mL 甲液同 150mL 乙液混 和，用纸遮盖，放光亮处约一周，经氧 化（“成熟”），过滤，加入25mL 甘油，25mL 甲醇、玻瓶密存备用动植物组织、纤维素细 胞壁、细胞核铁铵明矾苏木 精溶液取 2g 铁铵明矾溶解在98mL 蒸馏 水里，成甲液另取0.5g 苏木精溶解 在 100mL 蒸馏水里，成乙液甲乙液 不混合，甲液仅用作媒染 使材料易被 乙液染色甲液宜放18℃以下处，以 免产生黄色氧化膜 乙液氧化一月， 染 色效能最高， 过 3 个月会变质， 不能再 用细胞核、纤维素细胞壁苏丹 IV 溶液取 0.1g 苏丹 IV 溶解在 20mL95% 乙醇里，因乙醇能溶解脂肪， 所以脂肪 染色不要超过 10min木栓、角质层、脂肪瑞氏染液取 0.1g干的瑞氏色素溶解在50mL 甲醇里，深色玻瓶密封存用， 防止光解 和挥发血、疟原虫甲基紫溶液取甲基紫 0.5g溶解在 100mL 蒸馏 水里，再加乙酸 0.02 mL 血、疟原虫龙胆紫溶液取龙胆紫溶解在2%乙酸溶液，直 到溶液不变成深紫色为止（它有极强的致癌性）细胞核、染色体结晶紫溶液取 2g结晶紫溶解在 20mL95%乙 醇里，研磨，成甲液。

另取0.8g 草酸 铵溶解在 80mL 蒸馏水里，成乙液甲 乙液混和使用细菌、细胞核、染色体、 中心体、淀粉、纤维蛋 白、神经胶质、纤毛亮绿溶液取 0.5g亮绿溶解在 100mL 蒸馏水里细胞质固绿溶液取 0.1g 固绿溶解在 100mL 95%乙醇里纤维素细胞壁、动植物 浆质甲基绿溶液取 1g 甲基绿溶解在 60mL 蒸馏水 里，再加 1mL 冰乙酸木质化细胞壁、细胞核、 染色质甲基蓝取 1g 甲基蓝溶解在 29mL 70%乙 醇里，再加 70mL 蒸馏水细胞质、原生动物活体亚甲基蓝（美取 0.5 g 亚甲基蓝溶解在30mL 细菌、细胞核、血、活蓝）溶液95%乙醇里，再加100mL0.01%氢氧化 钾溶液体神经靛红溶液（1） 取 0.2g靛红溶解在 100mL 蒸馏水 里鉴定种子生命力（2）取 0.5g 靛红溶解在 94mL 蒸馏水 里，再加入 5mL 5%硫酸钠液和 0.5mL 冰乙酸分生组织苦味酸溶液取 1克苦味酸溶解在 99mL 蒸馏水 或 99mL 70%乙醇里细胞质五、干燥剂 干燥剂对游离水往往具有化学结合的作用，物理吸附作用或两种作用兼有 选用干燥剂应注意其本身。