红辣椒中红色素的提取.docx

红辣椒中红色素的提取实验目的1. 学习从红辣椒中提取红色素2. 学习薄层层析法和柱层析法及应用3. 掌握提取、分离、鉴定天然化合物的方法产品介绍天然红辣椒中含有辣椒红色素（简称辣椒红），辣椒素、辣椒油酯等辣椒红是辣椒 红素、辣椒玉红素、胡萝卜素等色素的混合物，为深红色油状液体辣椒红是食品和化 妆品中的天然色素添加剂其化学组成为呈深红色的色素主要是由辣椒红脂肪酸酯和辣椒玉 红素脂肪酸酯所组成呈黄色的色素则是P-胡萝卜素，化学结构：HO—K^OH fH3 ,h3 h3c—'Oy^%^A^^xA^^x^x^x^^^A^ 厂十 CH3 ch3 ch3 ch3qCH3 ch3辣椒红OR— C—O YCH^ 0CH3 CH3 H3C_^^-O — LROY^^x^^^^^^x^x^^^^Ay^F^CH3 ch3 ch3 ch3』CH3CH3辣椒红的脂肪酸酯（R=3个或更多碳的链）另一个具有稍大Rf值的较小红色斑点，可能是由辣椒玉红素的脂肪酸酯组成<^~ch3 ch3 ch3 ch3CH3p-胡萝卜素实验原理：色谱法是分离、纯化、鉴定有机化合物的重要方法之一，有着广泛的用途色谱法是利 用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（即分配）的不同，或其它亲和作用性能 的差异，使混合物的溶液流经该种物质，进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组分分开。

流动的混合物称为流动相；固定的物质称为固定相（可以是固体，也可以是液体）依 据各组分在固定相中的作用原理不同，可分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、排阻色 谱等；依据操作条件的不同，又可分为柱色谱、薄层色谱、纸色谱、气相色谱、高效液相色 谱等下面着重介绍柱色谱与薄层色谱：柱色谱常用的有吸附色谱和分配色谱两种吸附色谱常用氧化铝和硅胶为吸附剂分配 色谱用硅胶、硅藻土、纤维素等为支持剂，以吸收大量的液体作为固定相吸附柱色谱通常 在玻璃管中填入表面积很大经过活化的多孔性或粉状固体吸附剂待分离的混合物溶液流过 吸附柱时，各种组分同时被吸附在柱的上端当洗脱剂流下时，由于不同化合物吸附力不同， 往下洗脱的速度就不同，就会形成不同的层次，即溶质在柱中自上而下按吸附力大小形成若 干色带；继续加洗脱剂，可将已经分开的溶质分别从柱上洗出收集；或将柱吸干，挤出后按 色带分割开，用溶剂将各色带中的溶质萃取出来谱带一斯沙一'一洗脱剂|一胸沙 一吸附剂柱色谱装置图薄层色谱又叫薄板层析，常用TLC表示是快速分离和定性分析少量物质的一种重要 实验技术属于固-液吸附层析的类型通常是把吸附剂放在玻璃板上成为一个薄层，作为 固定相，以有机溶剂作为流动相。

实验时，把要分离的混合物滴在薄层板的一端，用适当的 溶剂展开当溶剂流经吸附剂时，由于各物质被吸附的强弱不同，就以不同的速率随着溶剂 移动展开一定时间后，让溶剂停止流动，混合物中各组分就停留在薄层板上显示出一个个 色斑的色谱图若各组分无色，可喷洒一定的显色剂使之显色混合物中各物质在薄板上随溶剂移动的相对距离称为比移值（Rf值）R 色斑最高浓度中心至原点中心的距离f 展开剂前沿至原点中M的距离溶济前沿（a）原板 （b）巳展开层析板如上图中：Rf（化合物 1）= 30m = °25 Rf （化合物 2）= |2必=0.70在一定条件下，各物质具有一定的Rf值不同物质在相同条件下，具有不同的Rf值 因此，可利用Rf值对物质进行定性鉴定但物质的Rf值常因吸附剂的种类和活性、薄层的 厚度、展开剂及温度等的不同而异所以在鉴定样品时，常用已知成分作对照试验，在同一 个薄层板上进行层析，然后通过Rf值的比较，对物质作定性鉴定根据斑点的面积大小和 颜色的深浅的标准物的对照下还可进行定量主要试剂2 g红辣椒，二氯甲烷，乙醇，氯仿，硅胶H（60〜200目）主要仪器圆底烧瓶，烧杯，层析缸，薄层色谱板，层析柱，试管等。

实验流程红辣椒一二氯甲烷过滤•滤液蒸馏色素混合物薄层色谱分析红色素回流20min 柱色谱分离实验步骤1 .红辣椒色素的提取在50 mL圆底烧瓶中放入1g红辣椒和2~3粒沸石，加入15 mL二氯甲烷，回流30 min，冷却至室温，然后过滤除去固体蒸发滤液得到色素的一种粗混合物2.色素的薄层分析把少量粗色素样品用5滴二氯甲烷溶解在一个小烧杯中，用毛细管点在准备好的硅胶G 薄板上，用二氯甲烷作为展开剂，在层析缸中进行层析，记录每一点的颜色，并计算它们的R/值1〜2］3.红色素的柱层析分离用湿法装柱约8 g硅胶（60〜200目）在适量二氯甲烷中搅匀，装填到配有玻璃活塞 的层析柱中［3］柱填好后，将二氯甲烷洗脱剂液面降至被盖硅胶的砂的上表面将色素的粗 混合物溶解在少量二氯甲烷中（约1 mL），然后将溶液用滴管加入层析柱放置色素于柱 上后，用约50 mL二氯甲烷洗脱色素收集不同颜色的洗脱组份于小锥形瓶或试管中，当 第二组黄色素洗脱后，停止层析通过薄层层析来检验柱层析，若没有得到一个好的分离效果，用同样的步骤将合并的红 色素组份再进行一次柱层析分离鉴定含有红色素的组份.然后将主要含有同种组分的每组 组份合并。

注释［1］ 点样时，毛细点样管刚接触薄板即可，不然会拖尾，影响分离效果［2］ 详细操作可参考薄层色谱技术介绍［3］ 柱层析时，棉花不能塞的太紧，以免影响洗脱速度（太紧会流速太慢）！思考题（1） 为什么极性较大的组分要用极性较大的溶剂洗脱？（2） 层析柱中若有气泡或装填不均匀，会给分离造成什么影响？如何避免？（3） 如何利用Rf值来鉴定化合物？。