MS培养及配置标准及过程.doc

MS培养基配制标准操作程序曲昙(0)实验步骤1 MS培养基母液的母液的配制由于组培的植物不同，需要配制不同的培养基，为减少T件量，可把药品配成浓缩 液有些微量元素和有机成分成分浓度极低，因此，先配制成母液的母液建议浓度如下表:药品名称配制的终浓度配制50ml的总质量(g)烟酸0.01g/ml0.5VB60.1g/ml5甘氨酸0.2g/ml10NaMo04.2H200.05g/ml2.5CUSO4.5H2O0.05g/ml2.5KI0.1g/ml5H3BO30.062g/ml3.1MnSO4. H2O0.169g/ml8.45ZnSO4. 7H2O0.172g/ml8.6C0O.6H2O0.05g/ml2.5VB10.1g/ml5母液的母液的配制过稈：(1) 根据表中的浓度，称取50ml体积的药品的质量2) 加入到相应的溶液中,定容至50mlo(3) 放入密封50ml级胶管中，・20C保存2 MS培养基母液浓度表：(1) MS-A (macro)：为工作液浓度的50倍NH4NO3KNO341.25g/500ml47.5g/500m IMgSO4 ・ 7H2O9.25g/500mlKH2PO49.25g/500ml(2) MS-B (micro)：为工作液浓度的100倍H3BO30.124g/200mlMnSO4 ・ 4H2O0.338g/200mlZnSO4 ・ 7H2O0.172g/200mlCuSO4 ・ 5H2O0.0005g/200mlCoCI2 ・ 6H2O0.0005g/200mlKI0.0166g/200mlNa2Mo04 ・ 2H2O0.005g/200ml(3) MS-C：为工作液浓度的100倍CaCI2 ・ 2H2O22.0g/500ml（4） MS-D：为工作液浓度的100倍烟酸0.01g/200mlVB60.01g/200mlVB10.002g/200ml甘氨酸0.04g/200ml（5） MS-E：为工作液浓度的100倍Na2-EDTA3.725g/500mFeSO4 ・ 7H2O2.875g/500m3母液的配制MS-A：称取 NH4NO3 41.25g> KNO347.5g、MgSO4 ・ 7H2O9.25g、KH2PO4 9.25g, 蒸憾水溶解，容量瓶定容至500mlo 4C的冰箱中保存。

MS-B：吸取母液的母液如下，熬憎水定容至200ml4C的冰箱中保存母液的母液量母液终浓度H3BO30.124g/200mlMnSO4 ・ 4H2O0.338g/200mlZnSO4 ・ 7H2O0.172g/200mlCuSO4 ・ 5H2O0.0005g/200mlCoCI2 ・ 6H2O0.0005g/200mlKI0.0166g/200mlNa2MoO4 ・ 2H2O0.005g/200mlMSG称取CaQ2 • 2H2O22.0g熬憎水溶解，容量瓶定容至500ml0 4C的冰箱中保存MS-D：吸取母液的母液如下，蒸馄水定容至200mL 4C的冰箱中保存.烟酸母液的母液量母液终浓度0.01g/200mlVB6VB1甘氨酸0.01g/200ml0.002g/200ml0.04g/200mlMS-E：称取Na2・EDTA 3.725g、FeSO4 - 7H2O 2.875g蒸镉水溶解，容量瓶定容至 500mlo 4C的冰箱中避光保存4 MS培养基基木T作液的配制MS培养基基本T作液质最表组成成分数量(mg/l)NH4NO31650KNO31900CaCI2 ・ 2H2O440MgSO4 ・ 7H2O370KH2PO4170KI0.83H3BO36.2MnSO4 ・ 4H2O22.3ZnSO4 ・ 7H2O8.6Na2MoO4 ・ 2H2O0.25CoCI2 - 6H2O0.025组成成分数量(mg/l)Na2・EDTA37.3FeSO4 ・ 7H2O27.8CuSO4 ・ 5H2O0.025蔗糖30肌醉100.0烟酸0.5盐酸毗哆醇0.5甘氨酸2.0盐酸硫钱等0.4pH5.8（1） 配制1升工作液，烧杯中放入700ml左右的蒸锚水，按顺序分别吸取MSA母液 20ml、MSB 母液 10ml、MS-C母液 10ml、MSD 母液 10mk MS-E 母液 10ml。

2） 加入固体蔗糖30g （根据具体实验调节浓度），溶解3） 加入所需的激素定容至1000ml4） 0.1-1mol/l 的 HCI 或 NaOH 调整 pH 值5） 如果配制固体培养基加入一定浓度的琼脂琼脂浓度为10%〜15%6） 液体培养基可选择高温高压灭菌和过滤消毒2种方法間体培养基采用高温高压 灭菌方法倒入三角瓶等培养器血中，封口消毒7） T.作液配制的注意事项：由于培养基内有丰富的营养物质，极利细菌和真菌繁殖，造成污染，影响组培 的成功，一般有高温高压消毒和过滤消毒两种方法高温高压消毒：一般用消毒锅消毒，注意消毒锅不能装的过满，锅内保持 1.1 Kg/cm2的压力，温度120C左右，大约15-20分钟即可过滤消毒：一些易受高温破坏的培养基成分如IAA、IBA、ZT等，不宜用高温 高压法消毒，可用过滤消毒，可过滤消毒麻再加入已高温高压消毒的培养基中，过滤消毒应 在无菌室或超净工件台上进行，以避免污染培养基。