实验四酵母菌形态观察.ppt

实验四实验四 酵母菌的酵母菌的形态观察形态观察一、目的要求一、目的要求1.1.学习并观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学学习并观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌的死活细胞的试验方法和子囊习区分酵母菌的死活细胞的试验方法和子囊孢子的观察方法孢子的观察方法2.2.掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别二、基本原理二、基本原理        酵酵母母菌菌是是单单细细胞胞真真核核微微生生物物，，大大小小通通常常比比常常见见的的细细菌菌大大几几倍倍甚甚至至十十几几倍倍大大多多数数酵酵母母以以出出芽芽方方式式进进行行无无性性繁繁殖殖，，有有的的分分裂裂繁繁殖殖有有性性生生殖殖是是通通过过接接合合产产生生子囊孢子子囊孢子  美美蓝蓝是是一一种种无无毒毒性性的的染染料料，，氧氧化化型型呈呈蓝蓝色色，，还还原原型型呈呈无无色色酵酵母母菌菌的的活活细细胞胞新新陈陈代代谢谢作作用用强强，，有有较较强强的的还还原原能能力力，，能能使使美美蓝蓝由由蓝蓝色色的的氧氧化化型型变变为为无无色色的的还还原原型型而而死死细细胞胞或或代代谢谢作作用用较较弱弱的的衰衰老老细细胞胞则则呈呈蓝蓝色色或或淡淡蓝蓝色色，，借借此此即即可可对对酵母菌的死、活细胞进行鉴别。

酵母菌的死、活细胞进行鉴别酵母活细胞酵母活细胞新陈代谢新陈代谢还原能力还原能力美篮（还原型）美篮（还原型）无色无色美篮（氧化型）美篮（氧化型）蓝色蓝色        子子囊囊孢孢子子是是子子囊囊菌菌类类真真菌菌有有性性生生殖殖产产生生的的有有性孢子性孢子          在在酵酵母母菌菌中中，，能能否否形形成成子子囊囊孢孢子子、、子子囊囊孢孢子子的数量及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据的数量及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据           麦麦氏氏培培养养基基有有利利于于面面包包酵酵母母子子囊囊孢孢子子的的产产生生子子囊囊孢孢子子壁壁厚厚，，不不易易染染色色亦亦不不易易脱脱色色，，可可采采用用芽芽孢孢染染色色法法染染色色观观察察子子囊囊孢孢子子呈呈现现绿绿色色，，而而子子囊囊壁和营养细胞呈红色壁和营养细胞呈红色（也可用水浸片法观察）（也可用水浸片法观察）子囊孢子（水浸片法）子囊孢子（水浸片法）三、实验材料三、实验材料 1. 菌种：啤酒酵母、面包酵母菌种：啤酒酵母、面包酵母2. 培养基：豆芽汁斜面、麦氏培养基培养基：豆芽汁斜面、麦氏培养基3. 溶溶液液或或试试剂剂：：0.1%的的美美蓝蓝染染色色液液、、芽芽孢孢染染色色液液一套一套4. 仪器及其他用具：载玻片、显微镜等仪器及其他用具：载玻片、显微镜等四、四、 实验内容实验内容 1.1.水浸片法观察酵母菌的死活细胞（啤酒酵母）水浸片法观察酵母菌的死活细胞（啤酒酵母） 载片中央滴一滴载片中央滴一滴0.1%0.1%的美蓝染液的美蓝染液 无菌操作取菌并无菌操作取菌并将菌体与染液混匀将菌体与染液混匀 盖上盖玻片盖上盖玻片 镜检并绘图镜检并绘图 2. 子囊孢子的观察（面包酵母）（两人一组，交换观察）子囊孢子的观察（面包酵母）（两人一组，交换观察）1））生生孢孢培培养养：：菌菌种种活活化化接接种种麦麦氏氏产产孢孢培培养养基基，，28℃培养培养48h。

          2））水水浸浸片片法法观观察察：：载载片片上上滴滴一一滴滴0.1%的的美美蓝蓝染染液液，，无无菌菌操操作作取取面面包包酵酵母母与与染染液液混混匀匀 ，，盖盖上上盖盖玻玻片片，，镜检并绘图镜检并绘图（生活状态下的子囊孢子）（生活状态下的子囊孢子）3））染色法观察：染色法观察：制片制片(涂片、干燥、固定涂片、干燥、固定)           孔雀绿初染孔雀绿初染10min            95%乙醇脱色乙醇脱色20s           水洗水洗           番红复染番红复染5min          水洗干燥镜水洗干燥镜检检 (子囊孢子蓝绿色、营养细胞和子囊壁呈红色子囊孢子蓝绿色、营养细胞和子囊壁呈红色)染色法注意事项染色法注意事项：：1）制片前载玻片在火焰上）制片前载玻片在火焰上烤一烤，去除油脂烤一烤，去除油脂2）取菌不要太多）取菌不要太多（水滴呈（水滴呈浅白色）浅白色）3）固定时不可离火焰太近）固定时不可离火焰太近（菌体崩解）（菌体崩解）3.3.放线菌的插片培养（每组放线菌的插片培养（每组2 2皿）皿） 插片培养法：插片培养法：倒平板倒平板（将（将高氏合成高氏合成1号号培养基无培养基无菌操作倒平板，菌操作倒平板，厚于平时所倒平板厚于平时所倒平板））      插片（将插片（将无菌的盖玻片以大约无菌的盖玻片以大约45°角插入培养基中（角插入培养基中（8片片/皿皿/组）组）       接种接种（无菌操作取灰色链霉菌或紫（无菌操作取灰色链霉菌或紫色链霉菌划线色链霉菌划线接种于插片和培养基接触处接种于插片和培养基接触处））          培养皿底部贴标记培养皿底部贴标记             培养培养（将插片平板倒（将插片平板倒置，置，28℃培养培养3~5天）天）123456789接种位置接种位置插片顺序插片顺序示范试管接示范试管接平板技术平板技术4.4.霉菌小培养法的准备（每人一套）霉菌小培养法的准备（每人一套） 培养小室的准备和灭菌：培养小室的准备和灭菌：在平皿皿底在平皿皿底铺一张略小于皿底的圆滤纸片，再放铺一张略小于皿底的圆滤纸片，再放一一U形玻棒，其上放一洁净载玻片和形玻棒，其上放一洁净载玻片和两块盖玻片，盖上皿盖，两块盖玻片，盖上皿盖，160-170℃干热灭菌干热灭菌2h。

五、实验结果五、实验结果1.1.绘制绘制啤酒酵母的菌体形态和无性繁殖方式啤酒酵母的菌体形态和无性繁殖方式（芽殖），（芽殖），示芽体、营养体及死活细胞示芽体、营养体及死活细胞    死细胞涂黑表示，活细胞打上虚点表示死细胞涂黑表示，活细胞打上虚点表示2.2.绘制绘制面包酵母的有性繁殖方式面包酵母的有性繁殖方式（子囊孢子），（子囊孢子），示子囊孢子、营养菌体示子囊孢子、营养菌体   下次实验内容下次实验内容•放线菌的形态观察放线菌的形态观察—— 插片法插片法六、六、 思考题思考题 1. 在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌于一般细菌P43 ，，2（（2））2. 如何区别酵母菌的营养细胞和释放出子囊外如何区别酵母菌的营养细胞和释放出子囊外的子囊孢子的子囊孢子P44，，2  上次试验习题解答上次试验习题解答1.你你认认为为制制备备细细菌菌染染色色标标本本时时，，尤尤其其应应该该注注意意哪哪些些环节？环节？ P28，，2（（1））①① 载载玻玻片片要要洁洁净净无无油油迹迹，，制制片片时时取取水水和和菌菌量量不不宜宜过过多多，，涂涂片时应均匀涂开呈一薄层。

片时应均匀涂开呈一薄层②② 热热固固定定温温度度不不宜宜过过高高（（酒酒精精灯灯火火焰焰上上方方3～～4次次）），，否否则则会改变甚至破坏细胞形态会改变甚至破坏细胞形态③③ 水水洗洗时时，，不不要要直直接接冲冲洗洗涂涂面面，，而而应应使使水水从从载载玻玻片片的的侧侧面面或背面流下水流不宜过急、过大，以免涂面薄膜脱落或背面流下水流不宜过急、过大，以免涂面薄膜脱落2.为为什什么么要要求求制制片片完完全全干干燥燥后后才才能能用用油油镜镜观观察察？？P28，，2（（2））         制制片片未未完完全全干干燥燥就就滴滴油油观观察察，，水水油油不不相相混混溶溶，，视野易滑动而无法清晰观察视野易滑动而无法清晰观察3.你你认认为为那那些些环环节节会会影影响响革革兰兰氏氏染染色色结结果果的的正正确确性性？？其其中中最关键的环节是什么？最关键的环节是什么？P30，，2（（1））    ①① 菌龄：要用活跃生长期的幼龄培养物菌龄：要用活跃生长期的幼龄培养物②② 涂片：不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性涂片：不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性③③ 火焰固定：不以过热（酒精灯火焰火焰固定：不以过热（酒精灯火焰上方上方3～～4次）次）④④ 脱色程度脱色程度         革革兰兰氏氏染染色色乙乙醇醇脱脱色色程程度度为为实实验验成成功功的的关关键键步步骤骤。

脱脱色色不不足足，，阴阴性性菌菌误误认认为为阳阳性性菌菌，，脱脱色色过过度度，，阳阳性性菌菌被被误染成阴性菌，脱色时间一般为误染成阴性菌，脱色时间一般为30s4. 说说明明芽芽孢孢染染色色法法的的原原理理用用简简单单染染色色法法能能否否观观察察到到细细菌菌芽孢？芽孢？P 32，，2（（1））①① 芽芽孢孢染染色色的的原原理理：：细细菌菌的的芽芽孢孢壁壁厚厚、、不不易易染染色色亦亦不不易易着着色色，，用用着着色色力力强强的的染染色色剂剂孔孔雀雀绿绿通通过过加加热热或或延延长长染染色色时时间间而而使使菌菌体体和和芽芽孢孢着着色色，，菌菌体体的的染染料料经经水水洗洗后后已已被被脱脱色色，，而而芽芽孢孢一一经经着着色色就就不不易易被被洗洗脱脱，，再再经经番番红红复复染染后后，，芽芽孢孢仍仍保保留留初初染染液液的的绿绿色色，，而而菌菌体体和和芽芽孢孢囊囊被被染成复染液的红色染成复染液的红色②② 用用简简单单染染色色法法可可以以观观察察到到细细菌菌的的芽芽孢孢，，芽芽孢孢成成无无色色透透明状请确保镜头擦请确保镜头擦拭干净！拭干净！。