PAS染色法.doc

精品文档，仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除PAS染色法-概况、原理PAS染色法概况　　PAS染色法（Periodic Acid-Schiff stain）在组织学上，主要用来检测组织中的糖类过碘酸把糖类相邻两个碳上的羟基氧化成醛基，再用Schiff试剂和醛基反应使呈现紫红色 PAS染色法原理PAS染色又称过碘酸雪夫染色，糖原染色一般用来显示糖元和其它多糖物质 　　原理：过碘酸能使细胞内的多糖乙二醇基氧化成二醛，再与Schiff氏液的无色品红结合，红色，定位于胞浆上 PAS染色法-应用、制作PAS染色法-应用随着医学实验技术的发展 ，近年来 ，糖原染色应用的范围更加广泛，如用以证明与鉴别细胞内空泡状的性质 ，心肌病变及其他心血管疾病的诊断 ，糖原累积病诊断和研究 ，糖尿病的诊断和研究 ，用于某些肿瘤的诊断等除用于糖原的鉴定和黏液的显示外 ，还可以观察肾小球基底膜 、结肠杯状细胞 中性黏液物质 、阿米巴滋养体和霉菌的着色临床诊断、分类和治疗提供 了重要的依据 PAS染色法-制作　　1. 固定液:用Carnoy液或75%酒精　Carnoy固定液: 纯酒精60 ml　冰醋酸10ml氯仿 30ml　　　2. 染色液 　　1) 过碘酸酒清夜配法: 　　过碘酸(HIO .2H O) 0.4g　95%酒精 35ml　M/5醋酸钠(2.72g+蒸馏水100ml) 5ml蒸馏水10ml。

保存于冰箱内,用棕色瓶,可用两周. 　　2)Schiff氏液: 　　0.5克碱性品红加入100毫升蒸馏水中,时时摇动三角瓶5分钟,使之充分溶解.冷却至50℃后过滤,加入10毫升1N盐酸.冷却至25℃,加入0.5-1克偏重硫酸钠,在室温中至少静置24小时,然后密封冰箱保存. 　　3) Schiff氏酒精液配置　Schiff氏液 11.5ml　1N HCI 0.5ml　纯酒精 23ml 　　4) 亚硫酸水 　　1%偏重亚硫酸钠10ml　1N HCI 10ml　蒸馏水 180ml的树胶溶解 PAS染色法-实验效果准备1、10g/L过碘酸液 　　2、 Schiff染液： 　　碱性品红 0.5g ，DH2O 100ml煮沸后，待片刻，加入碱性品红，振荡数分钟使品红溶解，冷至50℃加入1M的盐酸20ml，混匀待冷却至25℃加入偏重亚硫酸钠0.5g，混合，置于带塞的棕色瓶中，放于暗处24小时，染液为无色，如为微红则加活性炭1－2g，混合过滤，如过滤液仍有红色，应再加少许活性炭，时红色完全被吸收为止制成后置于棕色 瓶内保存在冰箱备用，如变为红色，则不能使用 　　4、苏木素液： 　　苏木素 0.9g ，95%乙醇 10ml 　　铵（钾）明矾 20g 　　DH2O 200ml 　　将苏木素溶于95%的乙醇，钾明矾溶于水（可加热），然后将苏木素液加入明矾液中混合，用强火煮沸后加氧化汞0.5g，迅速搅拌，成深紫色，迅速移入冷水中，次日过滤，临用时取此液95ml加冰醋酸5ml，可使细胞着色清楚。

方法：　　1、将新鲜血片或骨髓片用95%乙醇固定10分钟 　　2、10g/L过碘酸液作用20分钟 　　3、DH2O洗涤几次，晾干 　　4、Schiff染液，60分钟 　　5、用自来水洗涤15分钟（细水长流冲洗） 　　6、苏木素染液10分钟 　　7、自来水冲洗15分钟，待干 结果：　　阳性反应，胞浆呈红色，阴性反应，胞浆呈无色； 　　在正常血片中RBC不染色； 　　PLT染成深红色； 　　中性粒细胞胞浆染成红色或深红色，有些细胞有阳性颗粒； 　　单核细胞的胞浆染成淡红色，可含有细小或粗大阳性颗粒； 　　少数淋巴细胞的胞浆内含有少许小的淡红色或红色颗粒； 　　正常骨髓的幼稚细胞和有核RBC都不染色； 　　巨核细胞的胞浆内呈弥散红色或深红色 　　巨核细胞的胞浆内呈弥散红色或深红色 【精品文档】第 页。