蛋白质cd光谱定性解析_总结.doc

蛋白质的圆二色性(1)由氨基酸通过肽键连接而成；(2)光学活性基团：肽键、芳香氨基酸残基、二硫桥键；(3)蛋白质有多个结构层次，相同的氨基酸序列，因蛋白质的折叠结构不同，基团的光学 活性受到影响蛋白质的圆二色特征(1)光学活性基团及折叠结构；(2)250nm 以下的光谱区，肽键的电子跃迁引起；(3)250~300nm 光谱区，侧链芳香基团的电子跃迁引起；(4)300~700nm 光谱区，蛋白质辅基等外在生色基团引起蛋白质 CD 光谱的波长范围：远紫外区（185-245nm)、近紫外区（245-320nm)分子构象分子构象电子跃迁电子跃迁 形式形式极值的波长极值的波长[θθ]*103Deg.cm2/dmolαα-螺旋螺旋（（αα-helix））n→π﹡→π﹡π→π﹡π→π﹡221~222nm(-) 207~210nm(-) 191nm(+)-38~-40 -36~-40 72~86ββ-折叠折叠（（ββ-sheet））n→π﹡→π﹡π→π﹡π→π﹡217~218nm(-) 195~197nm(+)-19~-21 28~42ββ-转角转角（（ββ-turn））n→π﹡→π﹡π→π﹡π→π﹡227nm(-) 弱弱 200~205nm(+) 192.5(-)强强无规卷曲无规卷曲 (random coil)π→π﹡π→π﹡230nm(-) 215~218nm （（+）） 195~202nm(-)强强-1.6 1~2 -25~-50圆二色谱法分析多肽二级结构圆二色谱法分析多肽二级结构圆二色谱是一种特殊的吸收谱，它通过测量蛋白质等生物大分子的圆二色光谱，从而得到生物大分子的二级结构，简单、快捷，广泛应用在蛋白质折叠，蛋白质构象研究，酶动力学等领域。

圆二色谱紫外区段（190-240nm），主要生色团是肽链，这一波长范围的CD 谱包含了生物大分子主链构象的信息α-螺旋构象的 CD 谱在222nm、208nm 处呈负峰，在 190nm 附近有一正峰β-折叠构象的 CD 谱，在217-218nm 处有一负峰，在 195-198nm 处有一强的正峰无规则卷曲构象的CD 谱在 198nm 附近有一负峰，在 220nm 附近有一小而宽的正峰蛋白浓度与使用的光径厚度和测量区域有一定关系，对于测量远紫外区德氨基酸残基微环境的蛋白而言，浓度范围在 0.1~1.0mg/ml，则光径可选择在0.1~0.2cm 之间，溶液体积则在 200~500ul而测量近紫外区的蛋白质三级结构，所需浓度要至少比远紫外区的浓 10 倍方能检测到有效信号，且一般光径的选择均在 0.2~1.0cm，相应的体积也需增加至 1~2mL缓冲液可选 50~100mmol trs-HCl、PBS 等，尽量除去 EDTA远紫外近紫外二硫键一般都是不对称的，它在圆二色性光谱上，于195-200nm和250-260处有谱峰色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸残基的侧链其谱峰在230-310nm之间，色氨酸残基侧链的谱峰一般集中在290- 310nm之间，但有时也会向短波长方向移动从而与酪氨酸残基侧链的谱峰重叠在250-260nm之间，苯环的谱峰又与二流键的谱峰重叠。