F-7000荧光分光光度计操作规程和注意事项(含原理图).doc

F-7000 荧光分光光度计使用操作步骤1、开机：(1) 开启计算机2) 开启仪器主机电源按下仪器主机左侧面板下方的黑色按钮( POWER )同时，观察主机正面面板右侧的 Xe LAMP和RUN指示灯依次亮起来，都显示绿色2、 计算机进入 Windows XP 视窗后，打开运行软件1) 双击桌面图标( FL Solution 2.1 for F-7000 )主机自行初始化，扫描界面自动进入2) 初始化结束后，须预热 15-20 分钟，按界面提示选择操作方式3、 测试模式的选择：波长扫描( wavelength scan )(1) 点击扫描界面右侧“ Method ”2) 在"Gen era” 选项中的"Measureme nt"选择"wavele ngth sea n” 测量模式3) 在“ Instrument"选项中设置仪器参数和扫描参数主要参数选项包括：① 选择扫描模式“ Sean Mode”： Emission/Exeitation/Synehronous (发射光谱、激发光谱和 同步荧光) ② 选择数据模式" Data Mode": Fluorescence/Phosphprescence/Lumineseenee(荧光测量、磷 光测量、化学发光 )。

③ 设定波长扫描范围A、B、C、/终止波长( EX Start/End WL )/终止波长( EM Start/End WL )扫描荧光激发光谱 (Excitation) :需设定激发光的起始 和荧光发射波长( EM WL ) ;扫描荧光发射光谱 (Emission) :需设定发射光的起始 和荧光激发波长( EX WL) ;扫描同步荧光(Synchronous):需设定激发光的起始 /终止波长(EX Start/End WL ) 和荧光发射波长( EM WL )④ 选择扫描速度"Scan Speed'(通常选240nm/min )⑤ 选择激发 /发射狭缝( EX/EM Slit )⑥ 选择光电倍增管负高压“ PMT Voltage"(一般选700V)⑦ 选择仪器响应时间“ Response"(一般选Auto )⑧ 选择“ Report-设定输出数据信息、仪器采集数据的步长(通常选 0.2nm)及输出数据的起始和终止波长( Data Start/End)4)参数设置好后，点击“确定" 4、设置文件存储路径( 1)点击扫描界面右侧“ Sample" 2)样品命名“ Sample name"。

3) 选中“口 Auto File ”，打V可以自动保存原始文件和 TXT格式文本文档数据4) 参数设置好后，点击“ OK"5、 扫描测试( 1)打开盖子，放入待测样品后，盖上盖子 (请勿用力) 2)点击扫描界面右侧“ Measure”(或快捷键F4),窗口出现扫描谱图6、 数据处理(1) 选中自动弹出的数据窗口2) 选择“ Trace",进行读数并寻峰等操作 3)上传数据7、 关机顺序(逆开机顺序实施操作) :(1) 关闭运行软件 FL Solution 2.1 for F-7000 ，弹出窗口，如图 62) 选中 “O Close the lamp, then close the monitor windows ?"，打 “O” 3) 点击“ Yes”窗口自动关闭同时，观察主机正面面板右侧的 Xe LAMP指示灯暗下来, 而 RUN 指示灯仍显示绿色4) 约十分钟后，关闭仪器主机电源，即按下仪器主机左侧面板下方的黑色按钮( POWER)目的是仅让风扇工作，使 Xe 灯室散热)5) 关闭计算机注意事项1) 注意开机顺序步骤 1-( 2)若是未先开主机，则程序会抓取不到主机讯号2 ) 注意关机顺序。

3) 为延长仪器使用寿命，扫描速度、负高压、狭缝的设置一般不宜选在高档4) 关机后必须半小时(等氙灯温度降下)方可重新开机仪器原理荧光产生原理：荧光物质分子吸收了特定频率辐射后， 由基态跃迁至第一电子激发态（或更高激 发态）的任一振动能级，在溶液中这种激 发态分子与溶剂分子发生碰撞，以热的形 式损失部分能量后，而回到第一电子激发 态的最低振动能级（无辐射跃迁）然后 再以辐射形式去活化跃迁到电子基态的任 一振动能级，便产生荧光由于无辐射跃 迁的几率大，因此分子荧光波长常常比激 发光长激发光源的波长通常是在紫外区， 荧光也可能在紫外区，但更多是在可见区 相对于基态和激发态两个最低振动能级之 间的跃迁所产生的荧光称为共振荧光，此 时吸收光谱与荧光光谱重叠1）荧光光谱的形状和激发光波长无 关，这是因为荧光的产生是由第一电子激 发态的最低振动能级开始的而和荧光物质 分子原来被激发至哪一个能级无关；（2） 荧光光谱的形状和吸收光谱的形状十分相 似，且互为镜像因为吸收光谱反映的是 第一电子激发态的能级分布情况；而荧光 光谱反映的是基态能级的分布情况，而基 态中能级的分布和第一电子激发态中的能 级分布是相类似的，所以荧光光谱的形状 与吸收光谱十分相似。

又因为在相当于由 基态中最低振动能能及跃迁到第一电子激 发态各振动能级而显示的荧光峰中，基态 的振动能级越高，贝U两个能级的差距越小， 即荧光波长越长所以前后两者不但形状 相似而且互为镜像一內耗鶴外If馨分了单重态、三重态昵级结构及分子荧光、诱光产生示意图Am觉电荧光分光光度计示意图。