多酚氧化酶检测试剂盒.docx

酚氧产品简介：多酚氧化酶(polyphenol oxidase , PPO)是自然界中分布极广的一种金属蛋白酶，普 遍存在于植物、真菌、昆虫的质体中，甚至在土壤中腐烂的植物残渣上都可以检测到多酚 氧化酶的活性，多酚氧化酶是一种蛋白体，在茶树生命活动和茶叶加工过程中参与一系列 由酶促活动而引起的化学变化，故又被称为生物催化剂该酶属于细胞木质素合成途径中 间的关键酶，研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理，为减少 水果石细胞含量提高其品质提供依据Leagene多酚氧化酶(PPO)检测试剂盒(邻苯二酚比色法)检测原理是以邻苯二酚作为 底物，在酶促反应的最适条件下采用每隔一定时间测定产物生成量的方法，于分光光度计 检测吸光度，以吸光度变化所需酶量进行计算该试剂盒主要用于植物组织的裂解液或匀 浆液、血清等样品中内源性的多酚氧化酶活性，尤其适用于检测水果中多酚氧化酶活性 该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途产品组成：编号名称 一一-TE042960TStorage试剂(A): PPO Lysis buffer500ml4°C试剂(B): PPO Assay buffer25ml4°C避光使用说明书1份自备料：1、 蒸馏水2、 研钵或匀浆器3、 离心管或试管4、 低温离心机5、 比色杯6、 分光光度计操作步骤(仅供参考):1、准备样品：① 植物样品：取植物组织或水果中层果肉加入预冷的PPO Lysis buffer研磨或匀浆，离心， 留取上清液，冻存，用于多酚氧化酶的检测。

② 血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，冻存，用于多酚氧化酶的检测③ 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用PPO Lysis buffer进行适当匀 浆，离心，取上清液，冻存，用于多酚氧化酶的检测④ 高活性样品：如果样品中含有较高活性的多酚氧化酶，可以使用PPO Lysis buffer进行 恰当的稀释2、加样：按照下表设置对照管、测定管，注意：对照管、测定管中为同一待测样品，但对 照管中为提前加热煮沸的样品溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡如果 样品中的PPO活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定样品的检测最 好能设置平行管，求平均值加入物(ml)对照管测定管待测样品0.20.2PPO Lysis buffer1.41.4PPO Assay buffer0.40.43、PPO检测：立即以分光光度计，比色杯光径1.0cm，以对照管为对照，测定测定管的 吸光度(A测定°)1min后立即测定测定管的吸光度(A测定詁计算：PPO活性单位的定义：在该实验条件下，每1 min吸光度变化0.01所需酶量为一个活 性单位组织样本 PPO(U)={(A 测定 1-A 测定 0)xVT}/(WxVSx0 ・01xt)式中：A测定产反应1 mi n后测定管的吸光度值A测定°二加入PPO Assay buffer立即测定的测定管吸光度值W=组织样本的重量(g)VT二提取酶液的总体积(ml)VS=测定时所用酶液体积(ml)液体样本PPO(U)=(A测定1-A测定o)/(0.01xt)式中：A测定产反应1min后测定管的吸光度值 A测定°二加入PPO Assay buffer立即测定的测定管吸光度值 t二反应时间注意事项：1、 待测样品中不能含有酶抑制剂，同时需避免反复冻融。

2、 PPO酶液提取时，注意低温操作，防止酶活性4弋保存2-3天亦可-20弋保存3、以煮沸的酶液为对照时，酶要充分失活4如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定每次检测指标不宜过多，否则操 作时间不一，有可能导致样本间的差异有效期：6个月有效相关：编号名称CC0007磷酸缓冲盐溶液（10 x PBS，无钙镁）CM0004LB培养基DC0032Masson三色染色液DF0135多聚甲醛溶液（4% PFA）NROOO1DEPC 处理水(0.1%)PS0013RIPA裂解液（强）TC1167尿素（Urea）检测试剂盒（脲酶波氏比色法）。