毕业论文（设计）-冬虫夏草的研究进展与发展趋势.doc

西藏职业技术学院毕业论文论文题目：冬虫夏草的研究进展与发展趋势姓名：学号：专业：班级：系别：指导教师：年 月曰教务处制冬虫夏草的研究进展与发展趋势摘要：冬虫夏草是一种名贵的药用真菌，由于其自身独特的药用价值而成为各 国研究的热点本文综述了近年对冬虫夏草人工培养、深层发酵、无性型的分离 与鉴定、化学成分、药理作用等方面的研究进展，并阐述了其研究趋势 关键词： 冬虫夏草；合理采集；深层发酵；药理作用正文：冬虫夏草产门青藏高原，为我国传统的名贵药材，药用历史悠久，享誉 海内外但冬虫夏草仅在特定的区域里分布，天然产量菲常有限，加上长期过度 采挖和生态环境的破坏，这种珍贵药材的分布范围和发生数量已经出现明显的萎 缩趋势保护和合理利用冬虫夏草资源，寻求通过人为干预促进其生存繁衍的新 途径，以满足不断增长的保健与药用的需求，已经成为迫在眉睫的任务近年来，随着人们生活水平的提高，对健康的要求愈加重视，而冬虫夏 草则以其良好的治疗和保健效果，吸引了国内外广大消费者的更大关注从冬虫 夏草开发出来的产品越来越多，正形成一个巨大的产业引言冬虫夏^[Corclyceps sinensis（Berk） Sacc.], 乂名虫草、冬虫草、夏草冬虫，是 一种虫生真菌，属麦角菌目Clavicipitales＞麦角菌科Clavicipitaceae的虫草属 Co rdyceps。

冬虫夏草具冇多种药理功能，并含冇抗癌活性物质，长期以来一直 被视为珍贵的中药和藏药，享誉全世界，特别在东南亚地区影响广泛市售的冬 虫夏草多为该真菌有性阶段的成熟子实休，由真菌寄生（后期腐生）在虫草蝙蝠蛾 {Hepialus Annorieanus）幼虫体内生长繁殖，占据整个虫体，形成僵虫，在5 — 6 川份由头部长岀子座，形成子囊砲子成熟的子囊砲子喷岀后，子座逐渐枯萎， 地下的僵虫空虚，干燥后形成虫草复合体由于冬虫夏草特殊的药用价值，使国内外对其需求量与H俱增，但受生长 条件的限制，天然冬虫夏草产量很冇限，且因过度采挖使天然虫草产量逐年下降, 远远不能满足市场需求因此，近年来国内外在冬虫夏草菌种分离、无性型鉴定、 天然虫草与人工菌丝体的药理研究、人工培养以及菌丝体的深层培养方面进行了 大量的研究，取得了一定的进展1冬虫夏草无性型的研究冬虫夏草是一种子囊菌，其生活史可分为分生抱子阶段（无性型）和子囊 抱子阶段(有性型)在人工培养、液体发酵等实际生产中通常运用冬虫夏草菌 的无性阶段，因此其菌种的止确鉴定至关重要，引起科学家高度关注1.1冬虫夏草菌种的分离冬虫夏草菌前期寄生后期腐生，加Z生长缓慢，分离获得冬虫夏草的纯菌株 较为困难，因此获取纯菌种是冬虫夏草人工培育及无性型研究的关键。

口前常用 的分离途径主要有以下三种：从子囊抱子分离菌种首先在产地挖取新鲜虫草，尽量在无菌条件下收取较 纯净的了囊抱了，接种于琼脂培养基上，在不污染的情况卜•能生长出菌落；或者 在子座上套一个纸袋，收集成熟的子囊孑包子，经洗涤、净化、发芽后，在显微镜 下挑取单个抱子接种至长出菌落⑴从僵虫组织分离菌种取新鲜虫草，洗净、消毒，切取僵虫小块置琼脂平板 上培养，一般1〜2个月能长出菌落［2］从了座分离菌种选择了座饱满、完整的冬虫夏草标木经酒精表面消毒后， 用无菌刀片切取子座可孕部及内菌核(注意不要触及虫体肠道及体壁)，取绿豆大 小的组织块置于平板培养基上培养至长出菌落⑶1.2冬虫夏草无性型的鉴定近年来，冬虫夏草的人工发酵培养成为研究热点，国内报道与冬虫夏草有关 的菌种达1()个屈的30多种曾报道的无性型主要有虫草多毛抱Hirsutella hepiti> 111 国被毛抱 Hirsutella sinensis、蝙蝠蛾拟青W Paecilomyces hepiali> 111 国拟青需 Paecilomyces sinesis 蝙蝠蛾被抱霉 Mortierella hepiali、虫草头？雷 Cephdosporium sinensis、蝙蝠蛾柱霉 Scytalidiuin hepiale、中国弯颈霉 Tolypocladium sinensis、中国 金范霉 Chrysosporium sinensis、葡萄穗需屈 (Stachyhotry)等⑷。

但这几个菌种小中国拟青霉和蝙蝠蛾被砲霉经验证发现不可 能是冬虫夏草的无性型⑴面对如此众多的菌种和名称，引发了关于冬虫夏草无性型的标准、无性型的 种类以及如何确定冬虫夏草的无性型等问题的争议n前已有证据表明，中国被 毛抱(HirsmdlasirnrnsisX.J.Liu, Y. L. Guo, Y. X. Yu &W.Zcng)确属冬虫 夏草无性型［6-101o但其他报道的无性型与冬虫夏草的确切关系，尚有待进一步研 究冬虫夏草无性型的鉴定冬虫夏草的鉴定方法很多，早在1941年小林义雄 (Kobayase)就提出了确定无性型判定的五条标准：①具有虫草子座的一部分或 分枝产生的无性产孑包结构；②在形成虫草了实体的菌丝体上同时形成无性产抱结 构；③在长岀虫草子实体的同一寄主昆虫体上出现的无性产砲结构；④在同一地 区长虫草子实体的同种昆虫的不同虫体上同时观察到无性产抱结构；⑤山草的子 囊抱了接种在培养基上能形成无性产抱结构无性型分离比较传统可靠的方法是 子囊范子分离，但对于一些难以人工培养的虫草菌则不适用对于子囊范子难以 萌发的种，可以试着利用组织分离的方法获得无性型,但此方法难以排除误定的可 能；同时工作量大，需多批次多途径的进行分离。

利用了囊抱了的微循环产抱(microcycle conideation)现象鉴定山草无性型是 一种简便可靠的方法微循环产抱是丝状真菌小分生抱子萌发后无(或仅有极微 弱的)菌丝生长阶段的一种重复产抱现彖利用微循环产抱鉴定虫草无性型，简 便可靠，实用性强但不同虫草菌次生了囊抱了萌发和微循环产抱的条件各不相 同，因此在只获得少量子囊砲子的情况下未必能实现微循环产砲操作另外，在 未能用无性型菌株培育出批量完全形态的冬虫夏草以前，很难真正确定其是山草 的无性型〔⑴王伟等总结出一套鉴定虫草无性型的方法，主要包括：①多批次多途径分离 培养后相互验证；②挑取萌发的单抱子进行纯化培养；③同时进行组织分离和子 囊抱子分离，培养物相互验证；④发酵培养产物与天然虫草比较，具有相似的功 能和化学组成，聚丙烯酰胺凝胶电泳后呈相同的蛋口区带，火箭线状免疫电泳 (rocket line immunoelectrophoresis)证明两者具有相同的抗原性和交叉血清学关 系；⑤纯培养物与天然虫草在药理上具有一致性〔叨这些间接的方法尽管不能 最终鉴定冬虫夏草有性、无性的真实关系，但这些方法交替使用并严格相互验证, 可在很大程度上避免错判。

DNA指纹图谱鉴定法李增智等从青海的冬虫夏草子实体上分离到中国被 毛抱，并以RAPD为分子标记，获得了冬虫夏草和中国被毛抱相应的基因组DNA 指纹图谱，两者相似率高达96%,从而证明冬虫夏草的无性型为中国被毛砲［⑼ 赵锦等采用分子生物学手段，以rDNAITS区为分子指标，对采自四藏冬虫夏草 的有性和无性阶段进行比较分析，从分子水平证明中国被毛砲是冬虫夏草的无性 型⑺运用现代分了生物学方法从基因水平进行鉴定是目前较为先进可靠的方法 z-—，分子生物技术的迅速发展并应用于真菌的种质鉴定，无疑给冬虫夏草的无 性型鉴定提供了更客观的科学证据，但小国被毛抱是否为冬虫夏草真正的、唯一 的无性型，还需深入研究2冬虫夏草的人工培育为满足人们对虫草的需求，早在20世纪80年代初，我国就开始了人工培养 虫草的研究工作，并取得了一定进展沈南英等（1981,1983）是国内外在人工条件下，首次成功培养出冬虫夏草有性 了实体四川省中药研究所用中国被毛抱的抱了在室内接种于贡嘎蝠蛾的幼虫， 于1988年首次获得了与天然冬虫夏草形态特征完全相同的人工冬虫夏草俞永 信等从天然虫草小分离得到冬虫夏草菌，并在人工培养基上进行培养生长，使其 进行无性和有性繁殖，取其砲了接种于寄主昆虫，在模拟天然环境条件下长出了 座，培养出与天然完全相似的冬虫夏草®。

冬虫夏草的人工栽培必须掌握4项基本技术：①菌种用真正的无性阶段菌株 （含无性抱子）或用成熟的天然子囊抱子作接种体；②寄主蝙蝠蛾的饲养技术；③ 侵染途径；④模拟产地的生态环境，特别是土壤、土壤和大气中的温度、湿度和 光照等影响因素［⑶在完全人工控制条件下，将冬虫夏草菌感染寄主幼虫使Z产生与天然冬虫夏 草相同的子实体的研究方而，云南、四川等地已在高海拔地区取得了小而积培育 有性型成功的经验但由于周期长，高海拔地区无推广对象，投资大，效益不如 自然采集等多种因素限制，一•直未能大而积推广然而，在低海拔地区人工培育 岀有性冬虫夏草尚未取得突破性的进展3冬虫夏草菌丝体的液体深层发酵由于冬虫夏草特殊的生态环境和严格的寄生性及人工培育技术不成熟，造成 产量低、资源紧缺，价格昂贵因此，现在多采用人工培养其菌丝体作为替代物 口前很少有人报道利用固体培养基培养虫草菌丝体因为虽然相对于液体深层发 酵，固体培养具有设备简单、发酵条件易控制、培养物中全部营养和保健成分均 可充分利用等优点，但它不能分离纯菌丝体且培养周期较长，所以利用液体深层 发酵培养获得冬虫夏草菌丝体、提取物或发酵液，是解决冬山夏草药源的一种有 效途径。

液体发酵培养产物经药理和毒理研究，证明与天然冬虫夏草化学组成， 约理作用基木一致，可代替天然虫草生产虫草制品，以弥补口然资源的短缺到目前为止，液体深层发酵的研究取得了较大进展但由于产品市场竞争的 原因，有关工业化虫草菌菌丝体发酵技术还未曾有人报道根据已发表的液体深 层发酵试验结果，冬虫夏草菌丝体培养的最适条件是：小国被毛抱：最适生长温度为18-20°C , 20°C以上菌丝猛涨，25°C以上则抑 制生长，最适pH值为5・6,最佳碳源为葡萄糖，最佳氮源为蛋白）］东、酵母膏适 量配合，在有硫酸镁，磷酸二氢钾存在下生长旺盛〔⑷蝙蝠蛾拟青霉：最适培养温度为18-20°C，培养基装瓶量为10%,发酵时间 72h最佳，但具体培养基配方未发表2〕被抱霉屈：最适培养条件为温度26°C,发酵时间72h,培养基装瓶量为 60ml/250ml,培养基配比（％）为:葡萄糖2；酵母浸汁0.5；花生饼3；蚕蛹粉0.5； 奶粉0.2；磷酸氢二钠0.1；磷酸氢二钾0.15； VBilmg； VB6lmg；磷酸钙0.4； 硫酸镁0.025o采用此配比，发酵液的菌丝相对浓度可达54.3%〔⑹北虫草菌Y3：以土豆汁20%,蛋白月东0.8%,蔗糖2%,磷酸氢二钾0.15为 主的发酵培养基，温度25-26°C,转速125r/min,接种量5%,培养96-120h,可 获得较高的菌丝得率W头砲菌改良菌株A10：发酵培养基（％）葡萄糖4,酵母粉1,蛋白籐0.5,磷酸 二氢钾0.1,七水硫酸镁0.05, pH值6.0；发酵温度为26-28°C；装瓶量为 20ml/150ml；接菌量为5%；发酵30h可得菌丝体最大量［⑻。

4冬虫夏草的化学成分及药理作用4.1化学成分冬虫夏草真止的潜在价值或许是它们所形成的各类代谢产物，迄今人们已从 虫草及其无性型小检测或分离到多种生物活性物质冬虫夏草除了含粗蛋白 25.32%,粗纤维18.53%，碳水化合物28.9%,灰分4.1%,水分10.84%外，还含 有8.4%的脂肪在脂肪中，饱和脂肪酸13.0%（硬脂酸）、不饱和脂肪酸82.8%（油 酸占31.29%、B ■亚油酸占68.31%）此外，述从冬虫夏草中分离出D■甘露醇、 尿卩密呢、腺瞟吟、腺II票吟核昔、蕈糖、麦角帑醇、麦角帑醇过氧化物和胆帑醇软 脂酸酯，以及具有抑菌、抗病毒、抗癌作用的虫草菌素（3。