宁夏沙枣花黄酮成分及其抗氧化活性的研究.pdf

宁夏医科大学硕士学位论文宁夏沙枣花黄酮成分及其抗氧化活性的研究姓名：王基云申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：王妍;姚遥20100401宁夏医科大学硕士研究生学位论文 中文摘要 I 宁夏沙枣花黄酮成分及其抗氧化活性的研究宁夏沙枣花黄酮成分及其抗氧化活性的研究 摘摘 要要 本文研究了宁夏沙枣花(NX-EAB)中总黄酮的含量测定、提取工艺；并从宁夏沙枣花中分离出 5 个单体化合物，并鉴定出其中 2 个单体化合物的结构对宁夏沙枣花不同提取物和各分离组分及从中分出的单体化合物对 1,1-二苯基-2-苦肼基自由基（DPPH·）的清除作用做了研究，并用宁夏沙枣花醇提物（AE-NX-EAB）对四氯化碳(CCl4)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用做了研究为宁夏沙枣花中总黄酮的应用开发提供了实验数据与基础，具体内容摘要如下： 1．宁夏沙枣花中总黄酮含量的测定参照 05 版药典，采用紫外-可见分光光度法，以 NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 为显色体系，芦丁为对照品测定了宁夏沙枣花中总黄酮的含量，测得用石油醚脱脂后宁夏沙枣花中总黄酮的含量约为 2.70%，未用石油醚脱脂的宁夏沙枣花中总黄酮的含量约为 1.02%，采用高效液相色谱法分析测定了宁夏沙枣花中芦丁的含量，发现宁夏沙枣花中含有芦丁，含量为 0.029 mg/g。

2. 宁夏沙枣花中总黄酮提取工艺的研究首先对宁夏沙枣花总黄酮提取方法进行了研究，确定超声波提取法为最佳提取方法，通过单因素实验发现提取时间，提取次数，料液比， 乙醇浓度对宁夏沙枣花中总黄酮的提取均有显著影响， 且提取溶剂最佳为乙醇；通过 L9(34)正交设计实验，发现宁夏沙枣花中总黄酮提取的最佳工艺为 A2B2C1D3，即20 倍量 70%乙醇，超声波提取 1h，提取 3 次 3. 宁夏沙枣花中单体化合物的分离、纯化和鉴定从沙枣花中分离得到五个单体化合物，纯化并鉴定了 1 种黄酮类化合物 BIII：5, 7, 4′-三羟基黄酮醇-3-O-(6′′-O-E-p-香豆酰基)-β-D-葡萄糖苷； 1 种糖苷类化合物 CcII： 苯乙醇-β-D-葡萄糖苷 化合物 BIII 和 CcII在此前与宁夏沙枣花化学成分相关的其他文献中未见报道，均为首次从该植物中分离得到的 宁夏医科大学硕士研究生学位论文 中文摘要 II 4. 宁夏沙枣花清除自由基活性成分的研究实验采用紫外-可见分光光度法测定了沙枣花不同提取物对 DPPH 自由基的清除作用。

（1）宁夏沙枣花水煎液（ASE-NX-EAB）及其不同溶剂萃取物均具有清除 DPPH 自由基的能力清除能力如下：正丁醇萃取后水液>ASE-NX-EAB>正丁醇萃取物>乙酸乙酯萃取物>石油醚萃取物；（2）沙枣花超临界CO2总萃取物 1（SC-I-NX-EAB）和总萃取物 2（SC-II-NX-EAB）及其被不同溶剂萃取的各供试品对 DPPH 自由基均有不同程度的清除活性，其中 SC-I-NX-EAB 和SC-II-NX-EAB 及其被不同溶剂萃取的萃取物清除能力均具有以下特点：总萃取物>石油醚萃取后水液>正丁醇萃取后水液>乙酸乙酯萃取物≈正丁醇萃取物，且 SC-II-NX-EAB清除作用强于 SC-I-NX-EAB；（3）从宁夏沙枣花中分出的单体化合物 BIII 对 DPPH 自由基也具有清除作用，其 IC50为 0.209 mg/ml 5 AE-NX- EAB 对四氯化碳(CCl4)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用的研究本实验通过可见分光光度法测定小鼠血清中 ALT、AST 以及肝组织匀浆中的 SOD、MDA 和GSH 的含量，HE 染色观察小鼠肝脏组织的病理变化结果显示 AE-NX-EAB 给药组能降低 CCl4诱导的急性肝损伤小鼠血清中 ALT 和 AST 的水平, 与模型组相比，差异具有显著性（PASE-NX-EAB 供试品>正丁醇萃取物供试品>乙酸乙酯萃取物供试品>石油醚萃取物供试品。

从图 4-4 可以看出：正丁醇萃取后水液供试品，ASE-NX-EAB 供试品和正丁醇萃取物供试品在清除能力上差异不大，提示：ASE-NX-EAB 中清除 DPPH 的主要活性成分为极性大的成分，主要分布在水液中 表 4-3 ASE-NX-EAB 及其用不同溶剂萃取的萃取物对 DPPH 自由基的清除率 Tab.4-3 Scavenging rate of ASE-NX-EAB and the different extractions of ASE-NX-EAB on DPPH 原药材浓度(原药材 mg/ml) 0.4 0.8 1.2 1.6 2 ASE-NX-EAB 供试品（%） 23.94 39.77 61.00 74.71 84.94 石油醚萃取物供试品 (%) 5.63 9.94 12.76 17.82 20.83 乙酸乙酯萃取物供试品 (%) 5.91 12.50 18.51 24.33 28.72 正丁醇萃取物供试品 (%) 26.52 46.4 61.89 72.68 76.68 萃后水液供试品 (%) 32.46 62.31 73.61 77.04 81.18 宁夏医科大学硕士研究生学位论文 第四章 36图 4-4 ASE-NX-EAB 及其用不同溶剂萃取的萃取物对 DPPH 自由基的清除作用 Fig.4-4 Scavenging activityof ASE-NX-EAB and the different extractions of ASE-NX-EAB on DPPH. 4.1.6.3 宁夏沙枣花水煎液乙酸乙酯萃取物清除 DPPH 自由基结果 由图 4-5 可得：ASE-NX-EAB 乙酸乙酯萃取物供试品对 DPPH 自由基有良好的清除作用。

由表 4-4 可得：在相当于原药材浓度 4~20mg/ml 下，ASE-NX-EAB 乙酸乙酯萃取物供试品对 DPPH 自由基的清除率，在相当于原药材浓度 16mg/ml 时，清除率达到89.73%其 IC50为相当于药材 4.88mg/ml提示：ASE-NX-EAB 乙酸乙酯萃取物也含有清除 DPPH 自由基的活性成分，但该成分不是主要成分，该成分有待研究 图 4-5 ASE-NX-EAB 乙酸乙酯萃取物对 DPPH 自由基的清除作用 Fig.4-5 Scavenging activity of the acetidin extractions of ASE-NX-EAB on DPPH 表 4-4 ASE-NX-EAB 乙酸乙酯萃取物对 DPPH 自由基的清除率 01020304050607080901000510152025相当于原药材浓度相当于原药材浓度/（原药材（原药材mg/ml））Equivalent to that defined concentration of the NX-EAB contents/（（NX- EABcontentsmg/ml））DPPH自由基清除率自由基清除率/%Snvengingpercentage of DPPH/%乙酸乙酯萃取物供试品010203040506070809000.511.522.5相当于原药材浓度/（原药材mg/ml）Equivalent to that defined concentration of the NX-EABcontents/（NX-EABcontentsmg/ml）DPPH自由基清除率/% Snvenging percentage of DPPH/%相当于原药材浓度/（原药材mg/ml）Equivalent to that defined concentration of the NX-EABcontents/（NX-EABcontentsmg/ml）DPPH自由基清除率/% Snvenging percentage of DPPH/%正丁醇萃取物 供试品石油醚萃取物 供试品乙酸乙酯萃取 物供试品正丁醇萃取后 水液供试品沙枣花水煎液 供试品宁夏医科大学硕士研究生学位论文 第四章 37Tab.4-4 Scavenging rate of the acetidin extractions of ASE-NX-EAB on DPPH. 原药材浓度(原药材 mg/ml) 4 8 12 16 20 乙酸乙酯萃取物供试品(%) 36.05 67.05 82.36 89.73 88.76 表 4-5 ASE-NX-EAB 乙酸乙酯萃取物清除 DPPH 自由基的 IC50 Tab.4-5 The IC50 of the acetidin extractions of ASE-NX- EAB on DPPH. 供试品组分 相当于 1g/ml 原药材乙酸乙酯萃取物供试品 IC50 （原药材 mg/ml） 4.88 4.1.6.4 单体化合物清除 DPPH 自由基结果 由图 4-7 可得：单体 BIII 溶液对 DPPH 自由基有清除作用，由表 4-6 可得：在单体BIII 溶液浓度 0.08~0.4mg/ml 下，单体 BIII 对 DPPH 自由基的清除率，单体 BIII 溶液浓度在 0.4mg/ml 时，清除率达到 79.56%。

其 IC50为 0.209mg/ml提示：单体 BIII 具有清除 DPPH 自由基作用，浓度在 0.08~0.4mg/ml 时，具有明显的量效关系 表 4-6 单体 BIII 对 DPPH 自由基的清除率 Tab.4-6 Scavenging rate of the monomer BIII on DPPH. 单体 BIII 浓度（mg/ml） 0.08 0.16 0.24 0.32 0.40 单体 BIII（%） 22.67 41.33 59.78 75.78 79.56 表 4-7 单体 BIII 清除 DPPH 自由基的 IC50 Tab.4-7 The IC50 of the monomer BIII on DPPH. 供试品组分 单体 BIII IC50（mg/ml） 0.209 宁夏医科大学硕士研究生学位论文 第四章 38图 4-6 DPPH 吸光度-浓度标准曲线 Figure.4-6 Standard curve for absorbance and concentration of DPPH 图 4-7 单体 BIII 对 DPPH 自由基的清除作用 Fig.4-7 Scavenging activity of the monomer BIII on DPPH. 4.1.6.5 讨论 实验发现 ASE-NX-EAB 及其不同萃取物均对 DPPH 自由基具有清除作用，在相当于原药材浓度 0.4~2mg/ml 下，ASE-NX-EAB 正丁醇萃取后水液（极性最强）清除作用最强，清除率达到 81.18%，ASE-NX-EAB 石油醚萃取物(极性最弱)清除作用最弱，清010203040506070809000.10.20.30.40.5浓度（mg/ml）concentration(mg/ml)浓度（mg/ml）concentration(mg/ml)DPPH自由基清除率自由基清除率/% Snvenging percentage of DPPH/%单体BIIIy = 0.1502x - 0。