常用大肠杆菌感受态的区别.doc

常用大肠杆菌感受态JM109,DH5a,BL21等的区别1：DH5a菌株DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株E.coliDH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的一半乳糖苷酶氨基端实现一互补可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株基因型：F-,OdlacZM15(lacZ-SrgF)U169,deoR,recAl,endA1,hsdR17(rk-,mk+),phoA,supE44,-,thi-1,gyrA96,relA12：BL21(DE3)菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因T7噬菌体RNA聚合酶位于噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上该菌适合表达非毒性蛋白基因型：F-,ompT,hsdS(rBB-mB－),gal,dcm(DE3)3：BL21(DE3)pLysS菌株该菌株含有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性PLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白基因型：F-,ompThsdS(rBB-mB－),gal,dcm(DE3,pLysS,Camr4：JM109菌株该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13phage载体进行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacMl进行一互补，从而显示一半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株基因型：recAl,endAl,gyrA96,thi—1,hsdR17,supE44,relAl,(lac—proAB)/FtraD3proAB+,laclq,lacM155：TOP10菌株该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。

基因型：F-,mcrA(mrrhsdRMS-mcrBC),0lacM15&acX74,recAl,ara139(arteu)7697,galU,galK,rps,(Strr)endAl，nupG6：HBl0l菌株该菌株遗传性能稳定，使用方便，适用于各种基因重组实验基因型：supE44，hsdS20(rB-mB—)，recAl3，ara—l4，proA2，lacYl，galK2，rpsL20，xyl-5，mtl-l，leuB6，thi-l7：M110或SCS110大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶，前者可以在GATC序列中腺嘌吟N-6位上引入甲基，后者在CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶C-5位置上引入甲基常用的菌株都会产生dam,dcm，从而受到甲基化的影响.部分限制性内切酶对甲基化的DNA不能切割，如Fbal和MboI等，一般生物公司提供的内切酶说明中均有说明大多数酶切位点的甲基化不影响切割，而有些会影响，如XbaI,BclI等而且甲基化只发生在特定序列，以Xbal为例，只有在位点序列旁出现GA或TC,该XbaI位才会被甲基化而要解除这种限制修饰作用通常有两种方法：(1) 选用上述酶的同功酶，如Sau3AI,DNA识别切割位点与Mbol相同；但不受甲基化影响；(2) 利用甲基化酶缺失的受体细胞进行DNA的制备，如E・coliJM110和链霉菌等，前者Dam和Dcm甲基化酶已敲出，而后者细胞内本就没有甲基化酶，从这些细胞中抽提的DNA就能被上述酶切割。

8：E.coliJM110要排除dam,dcm甲基化的影响，需要用特定的dam-,dcm-的菌株，如JM110如果由JM110或SCS110等甲基化缺失的菌株产生的质粒，则不会被甲基化.各种感受态细胞的区别用途特征XI1-Blue菌株Tn10基因型：endA1gyrA96(naIR)thi-1recA1reIA1lacglnroAB+lacI(lac)M1hcJR*74(JK特点：具有卡那抗性、四环素抗性和氯霉素抗性用途：分子克隆和质粒提取BL21(DE3)菌株基因型：FompTgaldemIonhsdSB(rB-mB-)(DE3lacllacUV57gene1ind1sam7nin5])特点：该菌株用于以T7RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于噬菌体DE3区的lacUV5启动子，该区整合于BL21的染色体上该菌适合于非毒性蛋白的表达用途：蛋白质表达BL21(DE3)pIy菌株基因型：F-ompTgaldemIonhsdSB(rB-mB-)(DE3)pLysS(cmR特点：该菌株带有pLysS，具有氯霉素抗性此质粒还有表达T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达。

适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达用途：蛋白质表达D5菌株基因型：F-endA1glnV44thi-1recA1relA1gyrA96deoRnupGOdlacMl(laargF)U169,hsdR17(rK-,特点：一种常用于质粒克隆的菌株其OdlacM基因的表达产物与pUC载体编码的-半乳糖苷酶氨基端实现互补，可用于蓝白斑筛选recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达JMlO9菌株基因型：endAlglnV44thi-1relAlgyrA96recAlmcrB+(lacproAB)e14-FtraD36proAB+laclacMlhsiolK+7(rK特点：部分抗性缺陷，适合重复基因表达,可用于Ml3克隆序列测定和蓝白斑筛选(用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达(DHlOB菌株基因型：F-mcrA(mrrhsdRMS-mcrBC)OdlacMllac74endAlrecAldeoR(ara,leu)7697araDl39galUgalKnuprps-ThemostwidelyusedE.colistrainforBACcloningisDHlOB(hostforpUCandother-complementationvectors;pBR322usefulforgeneratinggenomiclibrariescontainingmethylatedcytosineoradenineresidues，usefulforplasmidrescueprocedures。

ELECTROMAXDH10BT1CELLS说明：DH10B细胞是高转化效率的E.coli,可以完美应用于大多数实验应用DH10B基因型具有以下特点：?lacM15用于重组克隆的蓝/白斑筛选?消除了mcrA、mcrBC、mrr和hsdRMS限制系统,允许构建更多具有代表性的基因组文库(1,2)?endA1突变,可以增加质粒产量和数量?高效率转化大小为150kb的质粒,用于产生cDNA或基因组文库DH10B?可以表达tonA的基因型，tonA能够提供对T1和T5噬菌体感染的抗性(DH10B?T1R)rpsLDH10B?的基因型：mcrA(-hsdRMS-mcrBC)0lacM15lacXrecAlendAlaraDl(ara,leu)galgal(StrR)nupGgalDH10B?T1R的基因型：mcrA(-hsdRMS-mcrBC)0lacM15lacXrecAlendAlaraDl(ara,leu)galrpsL(StrR)nupGtonA。