心肌缺血再灌注.doc

大鼠心肌缺血/再灌注损伤【实验目的】 1.复制大鼠在体与离体心肌缺血/再灌注损伤模型；2.观察缺血/再灌注过程中心功能的变化【实验动物】 成年Wistar 大鼠（体重200－300g）【仪器药品】电子天平，肾形盘，动物呼吸机，BL-420F记录装置，眼科开睑器，微血管钳，组织镊，眼科镊，组织剪，眼科剪，眼科止血钳，止血钳，动脉夹，眼科缝合针，1号及00缝合线Langedroff灌流装置20%乌拉坦，1ml注射器，5ml 注射器，纱布块实验1 在体模型【实验步骤】1.实验采用体重200-300ｇ健康雄性Wistar大鼠，20%乌拉坦腹腔注射麻醉（0.5ml/100g）；2.颈胸部备皮及手术，分离气管及右侧颈总动脉3.气管插管连接呼吸机（呼吸肌参数：潮气量9ml，呼吸比=3:2，呼吸频率55~60）4.经右侧颈总动脉逆行插管至左心室, 再经BL-420F软件输入计算机,（一通道描记心电，（右上黄、右下黑、左下红）二通道描记心室内压，三通道描记微分）持续监测心脏左心室内压力及心电的变化情况5. 沿胸骨左侧剪开2，3肋骨，开睑器开胸暴露心脏；寻找冠状动脉左前降支，穿线备用;6.采用结扎5min后再放开5min两次,造成缺血预处置；采用结扎30mim再放开30min复制缺血/再灌注模型；思考题： 1. 如何判定缺血模型复制成功2. 如何判定有再灌注损伤发生实验2 离体模型【实验步骤】(1) 大鼠称重，腹腔注射20%乌拉坦（0.5ml/100g）麻醉，仰卧固定于鼠板，上腹部及前胸部剪毛。

2) 舌下/阴茎背静脉注入1%肝素（0.05ml/100g）后，切开胸腹部皮肤，用剪刀横行剪开腹腔，向上剪断隔膜，沿两侧肋骨向上平行剪开，翻起前胸壁，把心脏及胸膈周围的结缔组织拨到一侧，充分暴露心脏3) 用镊子提起心脏根部，暴露出主动脉和肺动脉，在距主动脉起始部0.5cm处用手术剪切断血管，迅速取出心脏至于4℃生理盐水平皿中使之停搏4) 经主动脉将心脏悬挂在灌流装置上，用丝线结扎固定，打开灌流液行逆向灌流，待心脏恢复自主跳动，小心减去心脏周围附着组织5)用眼科剪剪去左心耳，通过左心耳经房室瓣插入左心室一乳胶球囊，球囊连接一个内充生理盐水的导管，导管经三通管和换能器与BL-420F连接6) 在BL-420F仪的监测下，通过向球囊内注入一定量的生理盐水是左心室的舒张末压调整在0~10mmHg之间 (7)连接心电导线，心尖、右心耳和地线，一通道设置记录，(8) 预灌流10~20分钟，观察心率，二通道记录心室内压、三通道取微分记录dp/dtmax等心动指标，同时描记ECG，待上述各指标平衡后开始以下实验心肌缺血-再灌注损伤(1) 心脏用正常灌流液预灌流15分钟后完全停灌40分钟，然后恢复灌流20分钟，观察心脏在正常，停灌初期和再灌期的心功能变化。

2) 分别收集正常灌流时，再灌流后3分钟时的心脏冠脉流出液1ml，测定其中乳酸脱氢酶的活性思考题：1.如何判定缺血模型复制成功2.如何判定有再灌注损伤发生。