② 蛙心灌流实验报告.docx

本文格式为Word版，下载可任意编辑②蛙心灌流实验报告蛙心灌流实验实验目的 学习离体蛙心灌流的实验方法 观察Na、K、Ca三种离子及肾上腺素、乙酰胆碱等因素对心脏活动的影响 实验准备 实验对象：蟾蜍 实验器材：BL420生物信号采集系统、张力换能器、蛙类手术器械1套、蛙心插管、蛙心夹、试管夹、双凹夹、滴管、小烧杯4个、任氏液3. 实验药品：0. 65％氯化钠、3％氯化钙、1％氯化钾、1：10 000肾上腺素、1：10 000乙酰胆碱等三、 实验步骤1. 离体蛙心的制备：破坏脑和脊髓，仰卧固定于蛙板上由剑突处向两锁骨肩峰端呈三角形剪开皮肤、胸壁，打开心包，暴露心脏在两个主动脉干下各穿一根细线，并打一活结备用用连有细线的蛙心夹在心舒期夹住心尖部，将心脏上翻，辨认心房，静脉窦，腔静脉，然后结扎腔静脉，用眼科剪在左侧主动脉距分叉部3mm处剪一切口将盛有少量任氏液的蛙心套管(用拇指将套管堵住) 插入动脉球底部，稍后撤套管，再将蛙心管尖端转向蟾蜍的背侧及左下方，于心缩期插入心室；将预置线的活结扎紧，并固定于插管壁的小钩上小心提起套管和心脏，剪断主动脉左右分支，将心脏连同静脉窦一起剪下用任氏液反复冲洗心室。

2. 实验装置：将蛙心插管用试管夹固定于支架上，蛙心夹的连线连接在机械换能器上 记录心脏收缩曲线3. 处理因素(1) 记录仅有任氏液时的收缩曲线，观察心率及收缩幅度，作为正常对照2) 换以等量0.65％Nacl，观察心跳的变化3) 任氏液换洗，待心跳恢复后，加入3％Cacl 1—2滴，观察心跳变化4) 任氏液换洗，待心跳恢复后，加入l％Kcl 1～2滴，观察心跳变化5) 任氏液换洗，待心跳恢复后，加入1：l0 000肾上腺素1～2滴，观察心跳变化6) 任氏液换洗，待心跳恢复后，加入l：10 000乙酰胆碱1～2滴，观察心跳变化 一、实验结果1、正常心搏曲线2、滴加0.65%NaCl溶液3、滴加2%CaCl2溶液2滴4、滴加1%KCl溶液5、滴加0.01%Adr溶液6、滴加0.01%Ach溶液7、加2滴0.01%阿托品和0.01%Ach二、分析与讨论1、正常心搏曲线从图中可以看出本组牛蛙心跳比较微弱，再结合本组牛蛙心脏外表上有不规则小黑斑这一点，可推断出这只牛蛙可能患有心脏疾病2、滴加0.65%NaCl溶液滴加0.65%NaCl溶液后，心跳减弱，这是由于用0.65%NaCl溶液灌注蛙心时，灌注液中缺乏Ca2+，以致心肌细胞动作电位2期内流Ca2+减少，细胞质Ca2+浓度减少，心肌的收缩活动也随之减弱。

3、滴加2%CaCl2溶液2滴加入CaCl2后，心跳略微增强细胞外Ca2＋在细胞膜上对Na＋内流有竞争性抑制作用，称为膜屏障作用Ca2＋浓度增高时，Na＋内流受抑制，细胞0期除极速度与幅度减小，使兴奋性及传导性均降低Ca2＋浓度增高使Ca2＋内流增多，心肌收缩能力增强4、滴加1%KCl溶液滴加1％KCl后，曲线的频率逐渐减小，愈来愈疏，幅度也逐渐下降这是因为当细胞K+浓度增高时，K+与Ca2+有竞争性拮抗作用，K+抑制细胞膜对Ca2+的转运，使进入细胞内Ca2+减少，心肌的兴奋—收缩偶联过程减弱，心肌收缩力降低所以心搏曲线振幅减小5、滴加0.01%Adr溶液滴加肾上腺素后，蛙心收缩增强，心脏舒张完全，描记的心搏曲线幅度明显增大其作用机理是，肾上腺素可与心肌细胞膜上的B受体结合，提高心肌细胞和肌浆网膜Ca2+通透性，导致肌浆中Ca2+浓度增高，使心肌收缩增强另外，肾上腺素还有降低肌钙蛋白与Ca2+亲和力，促使肌钙蛋白对Ca2+的释放速率增加，提高肌浆网膜摄取Ca2+的速度，刺激Na+与Ca2+交换，使复极期向细胞外排出Ca2+的作用加速，这样，将使心肌舒张速度增快，整个舒张过程明显增强6、滴加0.01%Ach溶液滴加乙酰胆碱后，蛙心收缩减弱，心率减慢。

其机理为：乙酰胆碱与心肌细胞膜M受体结合，一方面提高心肌细胞膜K+通道的通透性，促使K+外流，将引起：（1）窦房强细胞复极时K+外流增多，最大复极电位绝对值增大；Ik衰减过程减弱，自动除极速度减慢这两方面因素导致窦房自律性降低，心率减慢2）复极过程中K+外流增加，动作电位2、3期缩短，Ca2+进入细胞内减少，使心肌收缩减弱；另一方面乙酰胆碱可直接抑制Ca2+通道，减少Ca2+内流，进而使心肌收缩减弱7、加2滴0.01%阿托品和0.01%Ach与只加乙酰胆碱相比，加了阿托品后再加乙酰胆碱的牛蛙心脏跳动无明显变化因为阿托品能与心肌细胞膜的M胆碱受体结合，妨碍乙酰胆碱与其结合，从而起抗胆碱作用，但由于心脏本身的缘故使每次收缩的时间增加了且在整个实验过程中，该牛蛙的心脏时不时的会停止跳动，影响实验结果三、结论本次实验首先要制备离体蛙心，制备好后，蛙心插管内的液体应随蛙心室的收缩和舒张活动而上下移动其实质是：在心室收缩时，心室容积减少，室内压升高，将心室内的液体压入插管内，管内液面上升；在心室舒张的时候，心室容积增大，心室内压减少，将插管内液体吸入心室，管内液面下降但是有时候蛙心插管内液面波动不明显，其主要原因有：(1)插管内尖端出现血凝块。

此时应用接有针筒的长吸管将血凝块吸出，并将新鲜的任氏液注入，直至血液颜色变浅；(2)插管尖端不在心室腔内，而是在心房或者脉间结缔组织等地方解决方法为将插管重新插入心室；(3)插管进入心室腔内过深，以致尖端抵住了心室壁解决方法为将插管稍稍外提，使插管口正好处于心室腔内，且开口正对着液体喷射方向实验过程中，必须保持蛙心插管内液面高度的恒定，若蛙心插管内液面高度发生变化，心脏收缩曲线也会相应发生变化所以，在实验中保持最适的液面高度，是取得较好实验结果的前提实验探究了几种不同溶液对蛙心跳动的影响，证实了Na+、K+、Ca2+、肾上腺素、乙酰胆碱等均对心脏收缩活动具有一定影响Na+使心肌的收缩活动减弱，Ca2+使心肌收缩能力增强，K+使心肌收缩力降低，心搏曲线振幅减小，阿托品则能很好地抑制乙酰胆碱的作用但因为实验操作技术有限以及实验材料可能出现问题（这只牛蛙可能有心脏病），导致实验结果与理论情况不是很相符第 5 页 共 5 页。