当归注射液对缺血再灌注损伤心肌细胞组织化学变化的影响.doc

当归注射液对缺血再灌注损悲伤肌细胞构造化学变革的影响　　【关键词】当归注射液；,,缺血再灌注；,,心肌；,,构造化学　　摘要：目的：探究当归抗心肌缺血再灌注损伤庇护作用的机理要领:将45只SD大鼠随机分成3组(每组n=15):假手术组(Ⅰ组)，缺血再灌注组(Ⅱ组)，当归治疗组(Ⅲ组),创立在体心肌缺血再灌注动物模子实行完毕后，将各组动物心肌构造做构造化学染色，不雅察各组动物心肌细胞内琥珀酸脱氢酶(SDH)活性使用HPIAS2000图像阐发体系测定SDH在以上3组中表达的均匀光密度宁静均阳性面积率效果：当归治疗组心肌细胞中SDH反响物呈颗粒状,匀称漫衍于肌膜下或肌丝区之间,颗粒呈深紫色,表现酶活性很强；假手术组酶反响物呈浅紫色微小颗粒状，肌膜下或肌丝区之间可见少量的紫色颗粒，漫衍较希罕，表现酶活性较弱；缺血再灌注损伤组SDH反响物极弱，险些未见酶活性表达图像阐发效果表现当归治疗组与假手术组和缺血再灌注损伤组之间均匀光密度及阳性面积率的差异有明显性意义(P0.01)；假手术组与缺血再灌注损伤组之间均匀光密度及阳性面积率的差异无明显性意义(P005)结论：当归注射液对大鼠缺血再灌注损悲伤肌细胞有紧张的庇护作用。

　　关键词：当归注射液；缺血再灌注；心肌；构造化学　　自1977年Hearse初次提出缺血再灌注损伤观点以来，已渐渐引起医学界的高度器重大量动物实行表现，氧自由基、钙超载、心肌纤维能量代谢停滞、血管内皮细胞、一氧化氮、中性粒细胞、细胞黏附分子和细胞凋亡等均大概到场再灌注损伤的发病历程缺血再灌注损伤对心肌构造的布局和成效的影响不停是研究的重点之一当归的药用代价早已为人们所熟悉,从当归的乙醇提取物中分散到6种化合物别离为:(E)藁本内酯,(Z)藁本内酯,(Z)正丁基呋内酯,棕榈酸,B2谷甾醇,阿魏酸别的还含有蔗糖、多种氨基酸及微量金属元素、烟酸、丁二酸、腺嘌呤、尿嘧啶、胆碱等身分当归的药理作用重要是：①促进机体免疫；②对呼吸体系的作用；③对血液循环体系的作用，有文献报道［1］当归对冠心病患者应用当归注射液治疗能平衡和按捺血小板聚拢的作用，因此能显着改进胸痛、胸闷等临床病症和心电图缺血性STT的变革,是治疗冠心病的有用药物［2］当归具有钙通道停滞作用,拮抗钙超载,对心肌缺血再灌注所致心肌损伤有庇护作用在缺血及再灌注状态下,心脏顺应性及射血成效得到精良的庇护,使反响心肌损伤程度的PK活性和氧自由基损伤历程产生的过氧化脂质剖析产物DA的浓度大大低落［3］。

但当归对缺血再灌注损悲伤肌细胞布局的影响，如今国表里未见报道本研究接纳构造化学要领，并使用HPIAS2000图像阐发体系测定SDH在以上3组中表达的均匀光密度宁静均阳性面积率，探究当归抗心肌缺血再灌注损伤庇护作用的机理　　1质料与要领　　11动物模子制备及分组康健雄性SD大鼠〔SPF级〕45只,体重250～300g摆布，由武汉大学医学院动物试验中心提供腹腔注射戊巴比妥钠4.5g・(100g)-1,麻醉动物后行气管切开接微型呼吸机人工呼吸［呼吸频率60次・in-1,潮宇量2l・(100g)-1,微型呼吸机由第二军医大门消费］,沿胸骨左缘第4肋骨开胸在左心室、右心室与左心房接壤处结扎/开放左冠状动脉前落支创立心肌缺血再灌注模子将动物随机分成3组(每组n=15):假手术组(Ⅰ组),丝线穿过冠状动脉前落支但不结扎；缺血再灌注组(Ⅱ组),缺血再灌注前5in腹腔注射生理盐水0.8l・(100g)；当归治疗组(Ⅲ组),缺血再灌注前5in腹腔注射当归注射液0.8l・(100g)-1每组5只动物缺血30in再灌注40in,10只动物缺血30in再灌注120in在缺血再灌注开始前,经舌静脉注射伊文氏蓝,缺血40in后心尖无蓝色且呈乌红部门为缺血区,再灌注120in后心肌经TT处置惩罚后心尖为白色部门为梗死区。

　　12重要试剂25%当归注射液由武汉大学中南病院制药厂提供,批号为970118　　13标本制作及不雅察用Nahlas硝基四氮唑蓝法表现琥珀酸脱氢酶(SDH)活性以上各组动物实行完毕后,将各组动物从心底部剪取心脏,切下心室奇怪构造恒冷式切片，片厚10μ①入孵育液中，370，15~60分钟孵育液配法：0.2磷酸缓冲液〔pH7.6〕1份0.2的琥珀酸溶液1份NitrBT水溶液2份②生理盐水稍洗；③10%甲醛盐水结实10分钟；④15%酒精稍洗1分钟；⑤生理盐水稍洗；⑥甘油明胶封片　　14图像阐发接纳HPLAS2000高清楚度彩色病理图文陈诉办理体系对酶活性表达举行定量阐发,每张切片随机拔取5个高倍镜视野(×400),测定SDH每个视野下阳性反响的均匀光密度、阳性反响面积和全部细胞总面积,盘算阳性面积率以每例5个视野的均匀光密度、阳性面积率的均匀值作为该例的丈量值　　15统计学处置惩罚用SPSS11.5软件对各组构造化学反响阳性颗粒的均匀光密度、阳性面积率做单因素方差阐发和ＳＮＫ(q)查验,查验水准α为0.05　　2效果　　21光镜不雅察假手术组可见心肌细胞呈短圆柱状，有分支，但可见部门胞浆溶解。

缺血再灌注损伤组见心肌细胞呈短圆柱状，有分支，胞浆溶解呈空泡或网状，细胞边界模糊，可见心肌细胞断裂当归治疗组可见心肌细胞呈短圆柱状，有分支，细胞核呈椭圆形位于中心，胞浆内可见平行摆列的肌原纤维，细胞外表清楚　　22构造化学不雅察琥珀酸脱氢酶(SDH)活性当归治疗组心肌细胞中SDH反响物呈颗粒状,匀称漫衍于肌膜下或胞浆内,颗粒呈深紫色,表现酶活性很强假手术组肌酶反响物呈浅紫色微小颗粒状，可见少量的紫色颗粒，漫衍较希罕，表现酶活性较弱缺血再灌注损伤组SDH反响物极弱，险些未见酶活性表达，表现无酶活性表达经单因素方差阐发,各组间的差异有明显性意义(P0.05)，见表1　　表1当归注射液对大鼠缺血/再灌注损悲伤肌细胞内SDH活性影响的均匀光密度和阳性面积率(略)经SNK(ｑ)查验,当归治疗组与假手术组和缺血再灌注损伤组之间SDH活性的均匀光密度及阳性面积率别离为：当归治疗组均匀光密度0.4625±0.0875；假手术组均匀光密度0.2684±0.0076；缺血再灌注损伤组均匀光密度0.2471±0.0021当归治疗组阳性面积率0.4448±0.0918；假手术组阳性面积率0.1963±0.0824；缺血再灌注损伤组阳性面积率0.1841±0.0679。

当归治疗组与假手术组比力均匀光密度及阳性面积率的差异有明显性意义(P0.01)；当归治疗组与缺血再灌注损伤组比力均匀光密度及阳性面积率的差异有明显性意义(P0.01)；假手术组与缺血再灌注损伤组之间比力均匀光密度及阳性面积率的差异无明显性意义(P005)　　3讨论　　局部构造或器官缺血将导致构造或器官的损害，但随着血供规复，在随后的一按时间内构造或器官的损伤不但不会减轻，反而渐渐加重，此即所谓的缺血再灌注损伤〔isheireperfusininjury,IRI〕自1977年Hearse初次提出缺血再灌注损伤观点以来，已渐渐引起医学界的高度器重大量动物实行表现，氧自由基、钙超载、心肌纤维能量代谢停滞、血管内皮细胞、一氧化氮、中性粒细胞、细胞黏附分子和细胞凋亡等均大概到场再灌注损伤的发病历程如今固然对缺血或缺血再灌注损伤简直切机制还不非常清楚,但已经知道损伤的临床了局重要就是细胞殒命细胞殒命有两种情势:一种是坏死,另一种是凋亡凋亡(apptsis)是细胞在基因调控下的自动性殒命,不引起炎症反响一连缺血和缺血再灌注时心肌构造都可产生细胞凋亡已经证明,人类心肌梗死除细胞坏死外,细胞凋亡也到场了梗死的病理历程,细胞凋亡不但影响梗死面积,而且促成心脏布局的重构,心肌梗死的早期和晚期均存在凋亡征象［4］。

再灌注损伤引起的细胞凋亡多漫衍于短暂缺血后血管再通的相干部位和梗死灶的紧缩带地区有资料表现,心肌梗死急性期的存活心肌其Bl2表达增长,而慢性期Bax表达增长,说明刺激因子由Bl2和Bax基因产物来按捺或诱导存活的心肌细胞凋亡［5］细胞凋亡的基因调控是一个非常庞大的题目,尤其是相干基因的彼此干系尚不非常清楚缺血再灌注损伤对心肌构造的布局和成效的影响不停是研究的重点之一当归为伞形科植物当归Angeliasinennsis(liv.)Diels的枯燥根，味甘、辛,性温当归能明显延缓肌肉萎缩,增长肌肉构造SD的含量,其机理大概与当归促进肌肉血液循环、改进代谢有关研究创造,应用当归注射液对更年期大鼠举行静脉一连给药20天后,血SD活性显着增高,脂质过氧化物(LP)程度落落,说明当归注射液可扫除氧自由基,抗脂质过氧化物反响,对更年期大鼠心血管体系有紧张的庇护作用［6，7］本实行通过结扎/松解左冠状动脉前落支复制心肌缺血再灌注模子，并用当归注射液预处置惩罚，效果表现当归治疗组心肌布局正常，未受到粉碎和影响，且心肌酶的活性很强心肌细胞内线粒体含量富厚，组成细胞容积的35%~40%，含有大量催化三羧酸〔TA〕、氨基酸代谢、脂肪酸剖析、电子通报以及能量转换的酶和辅酶，LDH、SDH那么是此中的两种酶。

心肌脱氢酶学改变是心肌损害的早期成心义的指征，缺血心肌脱氢酶的缺失是不成逆性心肌损害的明白指标［8］我们的实行也已证明白这一点因此通过实行表白：当归注射液预处置惩罚进步了心肌酶的活性并维持了细胞超微布局的完备性，对缺血再灌注心肌细胞有庇护作用从以上的实行效果和讨论来阐发当归注射液为防治缺血再灌注损伤的应用具有紧张的研究意义，而且为增强心肌庇护作用提供紧张的理论根据　　参考文献　　3livettiG,AbbiR,QuainiF，etalApptsisinthefailinghuanheart.NEngJed,1997,336:1131。