微生物常见生化培养基.doc

硝酸盐培养基硝酸钾 0.2g蛋白 5g蒸馏水 1000mlPH 7.4制法：溶解，校正PH，分装试管，每管约5ml,121℃高压灭菌15min硝酸盐还原试剂甲液：将对氨基苯磺酸0.8g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中乙液：将甲萘胺0.5g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中试验方法　　接种后在36±1℃培养1～4d， 加入甲液和乙液各一滴，观察结果硝酸盐还原为亚硝酸盐时于立刻或数分钟内显红色 　　注：本试验阴性的原因有三：细菌不能还原硝酸盐；亚硝酸盐继续分解，生成氨和氮；培养基不适于细菌的生长如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解，可再加入锌粉少许，可使硝酸盐还原为亚硝酸盐而呈现红色氧化酶1%盐酸二甲基对苯二胺溶液：少量新鲜配制，干燥冰箱内避光保存1%α—萘酚—乙醇溶液试验方法取白色洁净滤纸沾取菌落加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴，阳性者呈现粉红色，并逐渐加深；再加α-萘酚溶液一滴，阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色阴性于两分钟内不变色　　 以毛细吸管吸取试剂，直接滴加于菌落上，其显色反应与以上相同淀粉水解（生化试验培养基，用于产乳酸的链球箘的鉴定）蛋白胨 10gNaCl 5g牛肉膏 5g可溶性淀粉 2g蒸馏水 1000mL琼脂 15~20g121℃灭菌20min(PH7.6肉浸汤琼脂 90mL羊血清5mL3%淀粉溶液 10mL普通肉汤 100mL葡萄糖 0.2gPH值7.5~7.7用法：将肉汤液琼脂121℃高压灭菌15分钟，冷至50℃时，以无菌操作加入灭菌的淀粉溶液及无菌羊血清混合后，倾注灭菌平板备用。

明胶培养基（蛋白胨和牛肉膏提供氮源、维生素、矿物质；某些含明胶的细菌水解明胶，使其液化而降低明胶的胶凝作用）蛋白胨 5g牛肉膏 3g明胶 120g蒸馏水 1000mL制法：将上述成分混合，置流动蒸汽灭菌器内，加热溶解，校正PH至7.2~7.4，用绒布过滤分装试管，121℃灭菌15min，备用）用法：1.用接种针穿刺接种 2.将试管置于35~37℃培养24h 3将接种物放于2~8℃约10~30min，待降温后取出观察，如仍呈溶解状时即为明胶液化试验阳性，如凝固不溶者为阴性尿素琼脂（蛋白胨提供氮源，满足细菌生长需要，氯化钠维持稳定的渗透压，葡萄糖为可发酵糖，磷酸二氢钾作为缓冲剂，酚红是指示剂，琼脂为凝固剂用于细菌脲酶检测）蛋白胨 1g氯化钠 5g葡萄糖 1g磷酸二氢钾 2g0.4%酚红溶液 3mL（酚红 0.012g）琼脂 20g蒸馏水 1000mL20%尿素溶液 100mL（尿素 20g）pH6.6~7.0制法: 在蒸馏水或去离子水100mL中，加入上述所有成分（琼脂除外），混合均匀，过滤灭菌。

将琼脂加入900mL蒸馏水或去离子水中，121℃灭菌15min，冷却至50℃，加入灭菌好的基本培养基，混匀后，分装于灭菌试管内,放成斜面备用.试验方法:挑取琼脂培养物接种,在36±1℃培养24h,观察结果.尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色三糖铁琼脂(TSI)（适合于肠杆菌科的鉴定原理：用于观察细菌对糖的利用和硫化氢（变黑）的产生该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色　　而发酵乳糖的细菌(e.coli)，则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色　　如培养基接种后产生黑色沉淀，是因为某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀蛋白胨 20g牛肉膏 5g乳糖 10g蔗糖 10g葡萄糖 1g氯化钠 5g硫酸亚铁铵〔Fe(NH4)2(SO4)2·6H2O〕 0.2g硫代硫酸钠 0.2g琼脂 12g酚红 0.025g蒸馏水 1000mLpH7.4制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH.加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂.加入0.2%酚红水溶液12.5mL,摇匀.分装试管,装量宜多些,以便得到较高的底层.121℃高压灭菌15min.放置高层斜面备用.。

触媒(又称过氧化氢酶，具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢成为水和原子态氧，继而形成氧气分子，出现气泡用于链球菌即革兰氏阳性球菌初步分群)用法：（1）玻片法：取18~24h培养物，置于清洁玻片上，家一滴3%过氧化氢溶液，如产生大量气泡为阳性2）试管法：取琼脂斜面（不含血液的）18~24h培养物，接种于试管内，加入3%过氧化氢溶液1mL,如产生大量气泡为阳性注意事项：①3%过氧化氢溶液要新鲜配制 ②不宜用血琼脂平板上生长的菌落，因红细胞含有触媒，可致假阳性反应 ③取对数生长期的细菌Hugh-Leifson培养基(O/F试验用)蛋白胨 2g氯化钠 5g磷酸氢二钾 0.3g琼脂 4g葡萄糖 10g0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12mL蒸馏水 1000mLpH7.2制法:将蛋白胨和盐类加水溶解后,校正pH至7.2.加入葡萄糖,琼脂煮沸,溶化琼脂,然后加入指示剂.混匀后,分装试管,121℃高压灭菌15min,直立凝固备用.试验方法:从斜面上挑取小量培养物作穿刺接种,同时接种两支培养基,其中一支于接种后滴加溶化的1%琼脂液于表面,高度约1cm,于36±1℃培养.蛋白胨水(靛基质试验用)蛋白胨(或胰蛋白胨) 20g氯化钠 5g蒸馏水 1000mLpH7.4制法:按上述成分配制,分装小试管,121℃高压灭菌15min.靛基质试剂柯凡克试剂:将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中.然后缓慢加入浓盐酸25mL.欧-波试剂:将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇内.然后缓慢加入浓盐酸20mL.试验方法:挑取小量培养物接种,在36±1℃培养1～2d,必要时可培养4～5d.加入柯凡克试剂约0.5mL,轻摇试管,阳性者于试剂层呈深红色;或加入欧-波试剂约0.5mL,沿管壁流下,覆盖于培养液表面,阳性者于液面接触处呈玫瑰红色.注:蛋白胨中应含有丰富的色氨酸.每批蛋白胨买来后,应先用已知菌种鉴定后方可使用.β—半乳糖苷酶试验（ONPG）（用于迟缓发酵乳糖的细菌的快速鉴定）原理：有β—半乳糖苷酶的细菌，可以分解邻硝基酚β—半乳糖苷（ONPG），而释放黄色的邻硝基酚。

方法：取新鲜细菌一环，加入到0.25mL的无菌生理盐水中，加甲苯一滴充分振动，37℃，5min，再加入无色ONPG溶液0.25mL置于37℃水浴，悬液变黄则为阳性七叶苷水解试验（主要用于D群链球菌与其他链球菌的鉴别）原理：七叶苷可以被细菌分解为葡萄糖和七叶素，七叶素与培养基中的二价铁反应，形成黑色化合物，使培养基变黑方法：将待检测菌接种于七叶苷培养基上，培养后观察结果鼠李糖培养基蛋白胨 2.7g氯化钠 5.0g磷酸氢二钾 0.3g1%溴麝香草酚蓝水溶液 3.0mL琼脂 5.0g蒸馏水 1000mL制法：（1）除指示剂外将上述成分混于蒸馏水，并加热融化琼脂调PH7.0后，加入指示剂，做成基础培养基 （2）按0.5~1%量称取不同的糖（醇），每种分别加入15mL蒸馏水，调PH至7.0 （3）根据制作培养基的量，加如上述基础培养基，最后分装小试管，20分钟灭菌，置斜面注意事项： 苦杏仁甙按0.2～0.3%量加入。

阿拉伯糖需间歇三次灭菌，或过滤除菌。