2020年整理实验一 还原糖和总糖含量的测定.doc
3页
实验一 还原糖和总糖含量的测定（3,5-二硝基水杨酸比色法）一．目的1.掌握还原糖定量测定的基本原理；2.学习比色定糖法的基本操作；3.熟悉分光光度计的使用方法二．原理 在碱性的条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨酸共热，3,5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质）,还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的消光值，查对标准曲线并计算，便可分别样品中还原糖和总糖的含量三．仪器.试剂和材料1.仪器：（1）25ml刻度试管 （2）玻璃漏斗 （3）三角瓶 （4）100ml容量瓶3个 （5）刻度吸管（1ml,2ml,3ml） （6）恒温水浴 （7）沸水浴 （8）电子天平 （9）分光光度计2.试剂；（1）1mg/ml葡萄糖标准液 （2）3,5-二硝基水杨酸试剂 （3）碘碘化钾溶液 （4）酚酞指示剂 （5）6ml/L HCI （6）6ml/L NaOH3.材料：食用面粉四．操作步骤1.制作葡萄糖标准曲线：取7支25ml刻度试管，编号，按如下操作操作项目 管 号0 1 2 3 4 5 6葡萄糖标准液（ml）0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2蒸馏水（ml）2 1.8 1.6 1.4 1.2 1 0.8 3,5-二硝基水杨酸（ml）1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5吸光度（A540）0.000 0.081 0.217 0.331 0.467 0.575 0.648 将各管摇匀，在沸水中加热5min，取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温，再以蒸馏水定容至25min，用试管塞塞住试管口，颠倒混匀。
在540nm波长下，用0号试管调零，分别读取1~6号管的吸光度以吸光度为纵坐标，葡萄样毫克数为横坐标，绘制标准曲线2.样品中还原糖和总糖含量的测定（1）样品中还原糖的提取：准确称取3g使用面粉，放在100ml三角瓶中，先以少量蒸馏水调成糊状，然后加50ml蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水中保温20min，使还原糖浸出过滤，用20ml蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液2）样品中总糖的水解和提取：准确称取1g使用面粉放在100ml的三角瓶中，加入10ml 6mol/L HCI及15ml蒸馏水，置于水浴中加热水解30min待三角瓶中水解液冷却后，加入1滴酚酞指示剂以6mol/LNaOH中和至微红色，过滤，再用少量蒸馏水冲洗三角瓶及滤纸，将滤纸全部收集砸100ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀精确吸取10ml定容过的水解液，移入另一100ml的容量瓶中，以水稀释定容，混匀，作为总糖待测液3）显色和比色，取4支25ml刻度试管，编号，按下表的量操作操作项目 还原糖测定管号总糖测定管号ⅠⅡ还原糖待测液（ml）1100总糖待测液（ml）0011蒸馏水（ml）00113,5-二硝基水杨酸（ml）1.51.51.51.5吸光度（A540）0.3030.2980.4100.414吸光度（A540）平均值0.301 0.421五、注意事项：标准曲线制作与样品含糖量测定应同时进行，一起显色和比色。
六、结果处理（1）由管、吸光度平均值在葡萄糖标准曲线查出相应的还原糖毫克数为：0.167mg由管Ⅰ、Ⅱ吸光度平均值在葡萄糖标准曲线查出相应的还原糖毫克数为：0.235mg（2）计算样品中还原糖和总糖的百分含量如下： 还原糖℅=0.557℅ 总糖℅=0.235℅七、问题讨论 1.面粉中主要含有何种糖？ 答：淀粉 2.糖含量定量测定的方法还有哪些？ 答：①高效液相色谱法（HPLC） ②苯酚-硫酸法 ③蒽酮法 ④双折射现象幻想 著3。
