药物分析学：杂质分析.docx

第五章药物的杂质分析杂质第一节药物中的杂质与杂质限量 一、药物的杂质与纯度药品纯度・任何影响药品 纯度的物质均 称为杂质•药物的纯洁程 度，是反映药 品质量的一项 重要指标药物纯度的综合评定：外观性状、理化常数、杂质检查、含量测定令 药物的含量不可用100%•杂质含量％表示二、杂质的来源在原料药的合成过程中，起始物质 生产过程中 不纯或未反响完全、反响的中间体 引入的杂质与反响副产物在精制时未能完全除 去而引入杂质贮藏过程中引入的杂质♦在温度、湿度、日光、空气等外界条 件影响下，或因微生物的作用，引起 药物发生水解、氧化、分解、异构化、 晶型转变、聚合、潮解和发霉等变化, 使药物中产生有关的杂质1、原料药生产中引入的杂质例如：安乃近的生产4-氨基氨替比林96H5甲酸化“V xn-ch3 甲基化 「H8OH "(CH3)2SO4, NaOHOHC-HNch3FAA4-甲酰氨基氨替比林96H5 N 缩合 -V ^n-ch3NaHSO3, HCHOH3C—NCH3CH2SO3Na96H5 N 缩合 -V ^n-ch3NaHSO3, HCHOH3C—NCH3CH2SO3Na4 •甲氨基氨替比林c6h5°丫\一出水解， ohc-n^=

试剂、溶剂、还原剂等)（二）HPLC 法1、外标法测定法供试品溶液对照品溶液进样记录色谱图：A、和Ar计算例如：卡托普利及其片剂中卡托普利二硫化物的检查供试品溶液：0.5mg/ml对照品溶液：卡托普利二硫化物对照品，5 ug/ml混合溶液：卡托普利和卡托普利二硫化物对照品O.lmg/ml和15 |ig/ml适用性试验：用混合溶液R （卡托普利和卡托普利二硫化物）大于4.0以峰面积计算其含量，原料药中的二硫化物不得超过1.0%,片剂中的不得超过卡托普利标 示量的3.0%2、加校正因子的主成分自身对照测定法适用于杂质的控制用杂质对照品测定f杂质，f杂质和相对保存时间直接载入各品种质量标准中，在常规检验 时用相对保存时间定位，以f杂质校正该杂质的实测峰面积4? / Pr分子：杂质对照品的峰面积，分母：药物对照品的峰面积 一消除杂质与主成分的响应可能不同所引起的测定误差供试品溶液的制备 对照溶液的制备调节检测灵敏度：对照溶液主成分色谱峰的峰高约为满量程的10%〜25%进样：供试品溶液、对照溶液分析时间：主成分色谱峰、保存时间的2倍判断：供试品溶液中各杂质的峰面积分别乘以相应的校正因子后，与对照溶液中主成分的峰 面积比拟。

例如：红霉素A中红霉素B、C组分及有关 物质的检查供试品溶液：4mg/ml对照溶液：0.2mg/ml调节检测灵敏度：对照溶液主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%进样：供试品溶液、对照溶液分析时间：主成分色谱峰保存时间的4倍校正峰面积：f红霉素B0.7红霉素烯醇酸0.09杂质10.15结果判断：A红毒素B校正＜A红毒素A对照液A红毒素c校正v A红毒素a对照液A红毒素烯醇酸校正＜ 0・6A红毒素4对照液A杂质1校正＜ 86A红毒素袅对照液其他单个杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积3、不加校正因子的主成分自身对照法适用于没有杂质对照品的情况对照溶液：供试品的稀释液调节检测灵敏度进样：供试品溶液、对照溶液分析时间：供试品溶液（主成分色谱峰保存时间的2倍） 供试品溶液中各杂质的峰面积与对照溶液主成分的峰面积比拟N自身对照液供试品溶液供试品溶液A 杂总=A] + A? + A3例如：甲氨蝶吟中有关物质的检查供试品溶液：1 mg/ml、稀释对照溶液：5pg/ml进样：供试品溶液对照溶液分析时间：供试品溶液主成分色谱峰保存时间的4倍判断：单个杂质的峰面积不得大于对照溶液的主峰面积(0.5%),各杂质的峰面积的和不 得大于对照溶液的主峰面积的4倍(2.0%)4、面积归一化法适用于粗略测量供试品中杂质的含量。

计算各杂质峰面积及其总和占总峰面积(含药物的峰面积，而不含溶剂峰面积)的百分率 该法一般不宜用于微量杂质的检查V A£% = ——— x 100%X 4 + 4注意以下问题①检测器的选择：应根据对杂质结构的分析进行有目的的选择对于在紫外光区吸收较弱或 无吸收的杂质，可采用其他通用型检测器(如蒸发光散射检测器、质谱检测器等)二极管 阵列检测器(diode array detector , DAD)是杂质研究，特别是复方制剂中杂质研究的有效手 段通过该检测器可获得各杂质的光谱信息，有助于判断杂质检测波长选择的合理性，并可 进行峰纯度检查②检测波长的选择：应选用对各杂质均有较强吸收的波长作为检测波长，当一个测定波长无 法兼顾所有杂质时，可选用不同波长分别测定例如在氯喳那多(chlorquinaldol)及有关物质的HPLC分析中，用DAD检测器选择测定波 长，氯喳那多在251 nm和360 nm处有最大吸收，有关物质的最大吸收分别在251, 253, 254 nm处，为了兼顾氯喳那多的含量测定，选择测定波长在251nm处三)气相色谱法主要用于药物中挥发性杂质的检查方法：方法同HPLC标准溶液加入法> 标准溶液加入法杂质对照品液+供试液杂质对照品液+供试液外标法或内标法测定总量总量一加入的杂质对照品的量=杂质的量采用以下公式计算：4s = Px +、Px4 Px= \pxPx "（念/4）-1L=Cx/C 样义100%px供试品中组分X的浓度；Ax供试品中组分X的色谱峰面积；Apx加入的浓度的待 测组分对照品的浓度；Ais加入对照品后组分X的色谱峰面积例如：异氟烷中的有关物质的检查供试品溶液：0.1% （v/v）系统适用性试验：理论板数按异氟烷峰计算不低于15000异氟烷峰与相邻杂质峰的别离度应符合要求。

进样：供试品溶液判断：各杂质峰面积的和不得大于总峰面积的0.5%四）毛细管电泳法检查方法与高效液相色谱法相同例如：盐酸头抱吐月亏中N-甲基毗咯烷的检查电泳条件：弹性石英毛细管（内径75口 m,有效长度56cm）,柱温25℃,操作缓冲溶液为 pH4.7咪嗖-醋酸缓冲溶液，检测波长214nm,操作电压30kV,压力进样系统适用性试验：迁移顺序：乙胺和N-甲基咄咯烷，N-甲基毗咯烷峰与乙胺峰的别离度应 大于2进样数次，RSD不得过5.0%供试品溶液：20mg/ml ,内标物 0.1mg/ml对照品溶液：N-甲基叱咯烷对照品，0.1 mg/ml进样：供试品溶液对照品溶液按内标法以峰面积计算，不得过0.3%四、热分析法（一）热重分析法（thermogravimetric analysis, TGA）在程序升温下，测量物质的质量与温度的关系，研究物质在加热同时失重的情况下，所发生 的质的变化应用：药物稳定性的研究；贵重和易氧化药物的干燥失重测定；药物结晶水和吸附水的区别以及结晶水含量的测定方法：将样品置热天平中，按一定速度升温，记录样品重量随温度的变化，即热重曲线吸附水失去为渐进过程；结晶水失去在特定温度发生突跃，可以区分。

4010020030040-80℃： CuSO4- 5H2O->CuSO4- 3H2O+2H2O 80~120℃ ： CuSO4-3H2O^CuSO4-H2O+2H2O 200~250℃： CuSO4・H2C11SO4+H2O（二）差示热分析（differential thermal analysis, DTA）是在程序升温下，测量被测物质和参比物之间的温差与温度关系的一种技术参比物是一种 惰性物质，在加热过程中不发生相变和化学变化因此温差（AT）只与被测物质的变化有关 △T=0被测物未发生吸热或放热反响；△T=-为吸热峰（负峰）；△T=+为放热峰（正峰）典型的差热曲线DTA在药物分析中的应用测定药物的熔点药物的定性分析：尖峰为物理变化、宽峰为化学变化、估测药物的纯度 例如：草酸钙在加热过程中的变化134〜226℃： CaC2O4-H2O^CaC2O4+ H20398〜478℃： CaC2O4^CaCO3+COT635〜838℃： CaCO3->CaO+CO2T失h2oDTA曲线分解出co?（三）差示扫描热分析（differential scanning calorimetry, DSC ）在程序升温下，维持样品和参比物的温度相同，测量输给待测物质和参比物的能量差与温度 （或时间）关系。

DSC与DTA的区别：记录方式不同，DSC记录系统供给的能量；吸热供给能量，放热减少 供给的能量DSC-TG常联合用五、药物中杂质检查例如以药物中的无机杂质和残留溶剂的检查为例进行讨论一）氯化物的检查法1、原理Cl +Ag+稀硝酸• AgCl （白色浑浊）2、方法：比拟浊度标准氯化钠溶液：以50ml中含50〜80 u g的C1为宜 酸度以50ml供试溶液中含稀硝酸10ml为宜S：供试品溶液R：标准溶液3、干扰的排除（1）供试品有色采用内消色法，按ChP附录规定的方法处理AgNO3 放置lOmiii 反复过滤澄清溶液标准NaCl溶液对 ，、、、 溶 液暗处放置5min后比浊（二）硫酸盐检查法1、原理：SO42 + Ba2+ HC1 - BaSO4 （白色浑浊）2、方法酸度：稀盐酸2ml/50mlfSO42-l O.lmg〜0.5mg/50mL即相当于标准硫酸钾溶液1〜5ml比拟浊度3、干扰的排除有色供试品采用内消色法排除干扰三）铁盐检查法1、原理HC1Fe3++6SCN——— [Fe（SCN）6]3-（红色）2、方法标准铁溶液：以硫酸铁镂配制加入硫酸，防止跳盐水解50ml溶液中含Fe3+为5〜90陷时， 溶液的吸收度与浓度呈良好线性关系。

盐酸酸性：防止Fe 3+的水解3、干扰的排除（1）当有Fe2+存在时，加氧化剂过硫酸镂将Fe2+氧化成Fe3+HNO, +SCN+H+ f NOSCN + HQ（红色）（2）当供试溶液管与标准溶液管色调不一致时，或所呈硫氟酸铁颜色较浅不便比拟时，可 分别移入分液漏斗，各加正丁醇或异戊醇提取，分别取提取液比色四、重金属检查法重金属：在规定实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质，如银、铅、汞、 铜、镉、锡、睇、钿等在药品生产过程中遇到铅的机会较多，铅在体内又易积蓄中毒，故 检查时以铅为代表ChP2010收载三种检查方法第一法硫代乙酰胺法第二法炽灼后的硫代乙酰胺法第三法硫化钠法第一法：硫代乙酰胺法适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物，是最常用的方法1、原理ch3csnh2+ h2o —ch3conh2 + h2spH3.5IH2S + Pb2+• PbS 1+ 2H+2、方法[Pb2"]=10pg〜20|jg/25ml,相当于标准铅溶液1〜2ml酸度：pH3.0〜3.5当丙管中显出的颜色不浅于甲管时，乙管中显出的颜色与甲管比拟，不得更深如丙管中显 出的颜色浅于甲管，应取样按第二法重新检查。

3、干扰的排除（1）供试品有色：可采。