CELL基本培养方法实用教案.ppt

二、培养操作中注意：动作准确敏捷有序；培养用液开口后应45度倾斜，不再重复使用的应立即封口；一个吸管只能吸一种液体；不能面向操作台讲话(jiǎng huà)或咳嗽第1页/共38页第一页，共39页基本(jīběn)的培养方法悬滴培养方法：第2页/共38页第二页，共39页悬滴培养(péiyǎng)用的凹载玻片 单位：mm第3页/共38页第三页，共39页（一）单盖玻片培养(péiyǎng)方法第4页/共38页第四页，共39页左图；凹载玻片支架(zhījià)右图：单盖玻片培养法操作图解 1、胚胎浸出液2、血浆3、心肌块 4、混合待凝固5、涂凡士林6、扣压7热溶石蜡(shí là)密封 a为正确操作 b错误操作第5页/共38页第五页，共39页•8、将密封好的凹玻片放到凹玻片支架上，放到培养箱内培养•9、培养7-8个小时，组织块向外生长，培养24小时在组织块外周形成生长晕（一圈薄而透明的细胞(xìbāo)圈），48小时候生长减慢甚至停止需要重新加入鸡胚浸出液第6页/共38页第六页，共39页盖玻片法再培养 1、2、眼科刀切除生长(shēngzhǎng)晕 3 方型培养物切为两到四片 4、5培养物漂洗 6、7、再培养第7页/共38页第七页，共39页。

•（二）双盖玻片悬滴培养(péiyǎng)法第8页/共38页第八页，共39页 双盖玻片图解：1、载体(zàitǐ)盖玻片 2、带培养物盖玻片 第9页/共38页第九页，共39页•与单盖玻片不同之处：•1、载体盖玻片加一滴消毒纯水贴到带有组织块的另一面•2、再培养时：直接取下带培养物的盖玻片漂洗，换一张新的载体盖玻片,可减少(jiǎnshǎo)污染第10页/共38页第十页，共39页•二、培养瓶培养方法•20世纪50年代(niándài)Carrel设计了卡氏瓶•Earle设计了T-培养瓶第11页/共38页第十一页，共39页•用血浆固定(gùdìng)组织块的培养方法第12页/共38页第十二页，共39页 图:卡氏瓶培养组织块 1.消毒卡氏瓶 2.火焰略烧瓶口 3.取少量血浆(xuèjiāng)加入瓶底 4.再加等量胚胎浸出液 5.接种组织块 7.上盖 8.消毒 9加入培养液 10.通气第13页/共38页第十三页，共39页•用透明纸固定组织(zǔzhī)块的培养方法第14页/共38页第十四页，共39页图:内放有孔透明纸的培养瓶培养 a. 一个(yī ɡè)T培养瓶内放有有孔透明纸b.卡氏瓶接种后图解 1.有孔透明纸 2.组织块 3.培养液第15页/共38页第十五页，共39页。

•旋转管培养法：•与前两种培养方法不同之处：细胞或组织块交替(jiāotì)与培养液和空气直接接触，有利于细胞的生长第16页/共38页第十六页，共39页旋转管培养方法用具(yòngjù) a.简易旋转鼓，可放入培养箱内 b.带旋转鼓装置的培养箱 c.培养用的旋转管 1.示血浆的高度 2.示接种组织间间距 3.示加培养液 4.示可放旋转鼓内培养 d.放旋转管的支架.(1.接种组织块时用 2.观察时用)第17页/共38页第十七页，共39页•四.灌注(guànzhù)小室培养法•优点•1.连续观察活细胞的动态变化•2.研究理化性质对培养细胞的影响和作用•3.活细胞的反应.第18页/共38页第十八页，共39页不锈钢培养小室图 A 中央(zhōngyāng)切面图 B侧面图(mm)第19页/共38页第十九页，共39页灌注小室及灌注系统示意图 A.排液瓶 B.受液瓶 C.不锈钢灌注小室 D.扁锥型小孔道 E、F、J .2号注射针头 G、H.塑料导管(dǎoguǎn) I玻璃导管(dǎoguǎn) K、L.14号注射针头(塞以棉花)第20页/共38页第二十页，共39页•五.培养(péiyǎng)板培养(péiyǎng)方法第21页/共38页第二十一页，共39页。

第22页/共38页第二十二页，共39页培养培养(péiyǎng)过程：过程：•1、取材并制备拟用于培养的细胞悬液•2、接种细胞，取下培养板的盖子，用吸管吸取一定量的细胞悬液，加到培养板的各孔内•3、给培养板各孔补加足够的培养液•4、加盖，放入CO2培养箱中培养贴壁能力弱的细胞在接种后放置于CO2￿培养箱中培养3-5小时，使细胞黏附牢靠后再补加充足的营养液，继续培养）•5、每隔2-3天换液，换液时先将旧的培养液吸出，加入平衡(pínghéng)盐溶液洗涤，吸出平衡(pínghéng)盐溶液，再加入新的培养液盖上盖子继续培养第23页/共38页第二十三页，共39页•六、转瓶培养(péiyǎng)第24页/共38页第二十四页，共39页第25页/共38页第二十五页，共39页第26页/共38页第二十六页，共39页第27页/共38页第二十七页，共39页第28页/共38页第二十八页，共39页第29页/共38页第二十九页，共39页第30页/共38页第三十页，共39页第31页/共38页第三十一页，共39页•生物(shēngwù)观测台第32页/共38页第三十二页，共39页第33页/共38页第三十三页，共39页。

第34页/共38页第三十四页，共39页第35页/共38页第三十五页，共39页第36页/共38页第三十六页，共39页第37页/共38页第三十七页，共39页感谢您的观赏(guānshǎng)！第38页/共38页第三十八页，共39页内容(nèiróng)总结二、培养操作(cāozuò)中注意：第1页/共38页第2页/共38页8、将密封好的凹玻片放到凹玻片支架上，放到培养箱内培养2、再培养时：直接取下带培养物的盖玻片漂洗，换一张新的载体盖玻片,可减少污染二、培养瓶培养方法与前两种培养方法不同之处：细胞或组织块交替与培养液和空气直接接触，有利于细胞的生长3.活细胞的反应.五.培养板培养方法第37页/共38页感谢您的观赏第三十九页，共39页。