凯氏定氮法64252667.doc

一、凯氏（kjeldahl）定氮法优点： 用于标准蛋白质含量的准确测定；干扰少优点①可用于所有食品的蛋白质分析中;②操作相对比较简单;③实验费用较低;④结果准确,是一种测定蛋白质的经典方法;⑤用改进方法(微量凯氏定氮法凯氏定氮法)可测定样品中微量的蛋白质缺点①最终测定的是总有机氮,而不只是蛋白质氮;②实验时间太长(至少需要2h 才能完成);③精度差,精度低于双缩脲法;④所用试剂有腐蚀性.灵敏度低 适用于0.2-1.0mg 氮 干扰物质 ：非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离） ；费时太长二 Folin-酚试剂法优点：操作简便，灵敏度高，比双缩脲法灵敏得多，样品中蛋白质含量高于5μg 即可测得，是测定蛋白质含量应用得最广泛的方法之一缺点是费时间较长，要精确控制操作时间，标准曲线也不是严格的直线形式，且专一性较差，干扰物质较多对双缩脲反应发生干扰的离子，同样容易干扰 lowry 反应而且对后者的影响还要大得多酚类、柠檬酸、硫酸铵、tris 缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等均有干扰作用浓度较低的尿素（0.5%） ，硫酸纳（1%） ，硝酸纳（1%） ，三氯乙酸（0.5%） ，乙醇（5%） ，乙醚（5%） ，丙酮（0.5%）等溶液对显色无影响，但这些物质浓度高时，必须作校正曲线。

含硫酸铵的溶液，只须加浓碳酸钠—氢氧化钠溶液，即可显色测定若样品酸度较高，显色后会色浅，则必须提高碳酸钠—氢氧化钠溶液的浓度1～2倍此法也适用于酪氨酸和色氨酸的定量测定此法可检测的最低蛋白质量达5mg通常测定范围是20~250mg三、Bradford 法的突出优点是：（1）灵敏度高，据估计比 Lowry 法约高四倍，其最低蛋白质检测量可达1mg这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大，蛋白质－染料复合物有更高的消光系数，因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比 Lowry 法要大的多2）测定快速、简便，只需加一种试剂完成一个样品的测定，只需要5分钟左右由于染料与蛋白质结合的过程，大约只要2分钟即可完成，其颜色可以在1小时内保持稳定，且在5分钟至20分钟之间，颜色的稳定性最好因而完全不用像 Lowry 法那样费时和严格地控制时间3）干扰物质少如干扰 Lowry 法的 K 、Na 、Mg2 离子、Tris 缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA 等均不干扰此测定法此法的缺点是：（1）由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此 Bradford 法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差，在制作 标准曲线时通常选用 g—球蛋白为标准蛋白质，以减少这方面的偏差。

2）仍有一些物质干扰此法的测定，主要的干扰物质有：去污剂、 Triton X-100、十二烷基硫酸钠（SDS）和0.1N 的 NaOH （如同0.1N 的酸干扰 Lowary 法一样） 3）标准曲线也有轻微的非线性，因而不能用 Beer 定律进行计算，而只能用标准曲线来测定未知蛋白质的浓度四 紫外吸收法优点：简便、灵敏、快速，不消耗样品，测定后仍能回收使用低浓度的盐，例如生化制备中常用的（nh4）2so4等和大多数缓冲液不干扰测定特别适用于柱层析洗脱液的快速连续检测，因为此时只需测定蛋白质浓度的变化，而不需知道其绝对值缺点：测定蛋白质含量的准确度较差，干扰物质多，在用标准曲线法测定蛋白质含量时，对那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异大的蛋白质，有一定的误差故该法适于用测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质若样品中含有嘌呤、嘧啶及核酸等吸收紫外光的物质，会出现较大的干扰核酸的干扰可以通过查校正表，再进行计算的方法，加以适当的校正但是因为不同的蛋白质和核酸的紫外吸收是不相同的，虽然经过校正，测定的结果还是存在一定的误差五、 双缩脲法（Biuret 法）优点：较快速，干扰物质少，不同蛋白质显色相似缺点：不太灵敏时时彩平台,时时彩平台注册,时时彩平台测速,时时彩平台评测,时时彩网址导航 53wrrdS01z7b。