纤维素酶的二步分离纯化新工艺.pdf

收稿日期：! “ “ ! # “ ! # “ $ 作者简介： 时祥柱， 男，% “ “ % “ “ “ (）9纤维素酶的二步分离纯化新工艺时祥柱， 郭春腾， 周建武， 王中来， 饶平凡（福州大学生物工程研究所，福建 福州) ( “ “ “ !）摘要： 以普通定性滤纸为底物， 经碱处理后， 研究其对纤维素酶的亲和吸附作用结果表明， 普通定性滤纸对纤维素酶具有比较强的特异性吸附作用， 能够从粗酶液中分离出纤维素酶， 再经 = ?! “ @ A阴离子交换柱纯化后即可得到电泳纯的纤维素酶该法大大简化了传统的纤维素酶纯化工艺， 所得的纤维素酶活力极高， 比活达) ( “B／- C以上， 滤纸一步吸附后纤维素酶的纯化倍数为 3 6 K # N O K C，P @ = BQ / . K # R 6，SH T MP 3 8 K C # 0 . /，> H = = ?! “ @ A9 U 3 O : O 0 0 6 0 . 2 OF 6 V / 5 / O WR . 2 / W O K N / #5 / O W . 2.K O RO K W 8 C 0 6 : . K . 2 ON 3 . N3 . WV O 0 . N / Y O 0 73 / C 3O K W 6 V . K : ON 8F @. K WN O - F O V . N 6 V O 9 I N 2V O 0 . N / Y O- 8 0 O : 6 0 . V- . 2 2R . 2 O 2 N / - . N O W N 84 O + “ “ “ “4 7 2 8 W / 6 -W 8 W O : 7 0 2 6 0 5 . N O # F 8 0 7 . : V 7 0 . - / W O C O 0 O 0 O : N V 8 F 3 8 V O #2 / 2 9 U 3 / 2 O K L 7 - O O 1 3 / 4 / N O W Y O V 73 / C 3 . : N / Y / N 7 N 8 R . V W 2 : . V 4 8 1 7 - O N 3 7 0 : O 0 0 6 0 8 2 O（; X ;）R / N 3 2 F O : / 5 / : . : #N / Y / N 78 5 ) ( “B·- C_ %. K WN 3 O V O : 8 Y O V 78 5 . : N / Y / N 78 5 @ I T , ? ,Q = B > T H ]= ^; @ > =XH U = M > H 黑曲霉发酵粉溶于) 醋酸钠缓冲液 （，@ ’A + 的氢氧化钠溶液中处理F @ ’A + @ ’A + 氯化钠 的平衡缓冲液洗脱， 收集高盐洗脱液。

吸附及洗脱过程中平衡缓冲液流速均为) + ／* . E洗脱液经浓缩， 并用% @ ’A + ,醋酸钠缓冲液透析FC !AC后， 上样于用@ ’A + ,醋酸钠缓冲液平衡好的! “ # “ $% 氯化钠溶液线性梯度洗脱 （2 ／* . E收集活力峰 “ # “ $酶活力测定羧甲基纤维素 （5 G 5） 酶活力测定： 取适当浓度的酶液， 加入) + ,* ;,>／;羧甲基纤维素钠 （5 G 5 : H 葡萄糖为一个酶活力单位水杨素:葡萄糖苷酶活力测定： 用@ ’, + 的水杨素溶液， 从中取， 再加入已纯化的酶溶液， 于, @ ’, + 的微晶纤维素溶液， 离心后取上清液， 加入已纯化的酶溶液，F ／;， 浓缩胶的质量浓度为A A>／;， 电压) % 硝酸银染色 I # I ’ @ ’和温度适应性 最适@ ’值在不同缓冲液 （，@ ’% + , ! 2 + 的柠檬酸缓冲液中测定， 温度范围为% N C：% 2 H ? > +# @ A B纯化将洗脱液再用! “ # “ $% 2 7 % ?/ 3 . 0 . - @ 5 0 5 6 6 - 6 1 7 5 7 3 6 - 2 * 3 4， 5 6 - 1 4 2 3 /A 5 A 8 . 1 4 5 1 4 @“ # $ # %! 2 7 ? 4@ 5 % - 1［! 6］# $ % 36 A # $ ’ ( % $ 2 B 0 5 % - 5 ( % * / 0 5 % -! A C 5 % B 4 ’ * ) 5 * 0 $ / 0 5 % -! A D # E F6）! A . 3 ; $ % G 3 / 2 / 0 5 0 ’ / ; B ( % $ 2 0 5 % - 2，! “# $5 6 0 ’ * 1 7 18 9 6 0 : 9 : 2 ? 0 @，C D D !，C I（I） ：F E I贾凌云，杨利，邹汉法，等5色谱，C D D !，C I（I） ：F E I ［C B］/ , H 4J 9 * > ( : 2 ? 0 @，C D D !，C I（K） ：C D L周冬梅，邹汉法，杨利，等5色谱，C D D !，C I（K） ：C D L ［C C］G 9 M : @H ,，N 9 7 1 O : 9 Q 1 ’ [ ’ * >. 9 : (，P 4N 9 * >，J # . % “ 1 * ( 0 2 *，! “# $58 9 6 0 ’ * 1 7 1$ * 7 = ’ = P 9 9 S+ V ’ 1 * V 12 * S_ 1 V 0 (* 9 ) 9 > @，A B B A，A（C） ：C A郭春腾，傅蓉，邓文汉，等5中国食品学报，A B B A，A（C） ：!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!““““C A北京明尼克分析仪器设备中心北京明尼克分析仪器设备中心是从事实验室色谱仪器及配件、 化学标准品销售的专业 公司。

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