实验九、小麦萌发前后淀粉酶活力的比较.doc

实验九、小麦萌发前后淀粉酶活力的比较一、目 的 1．学习分光光度计的原理和使用方法 2．学习测定淀粉酶活力的方法 3．了解小麦萌发前后淀粉酶活力的变化二、原 理 种子中贮藏的碳水化合物主要以淀粉的形式存在淀粉酶能使淀粉分解为麦芽糖 2（C6H10O5）n＋H2O-------nC12H22O11 麦芽糖有还原性，能使3,5-二硝基水杨酸还原成棕色的3-氨基5-硝基水扬酸后者可用分光光度计法测定 休眠种子的淀粉酶活力很弱，种子吸胀萌动后，酶活力逐渐增强，并随着发芽天数的增长而增加 本实验观察小麦种子萌发前后淀粉酶活力的变化三、器 材 1．25毫升刻度试管 2．吸管 3．乳体 4．离心机和离心管 5．分光光度计 6．恒温水浴 7、容量瓶50ml8、电磁炉四、试 剂 1. 0.1％标准麦芽糖溶液 20毫升：精确称量100毫克麦芽糖，用少量水溶解后，移入100ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度 2．pH 6.9，0.02摩尔／L磷酸缓冲液 100毫升 3．l％淀粉溶液 100毫升：1克可溶性淀粉溶于100毫升 0.02摩尔／L磷酸缓冲液，其中含有 0.006摩尔／L氯化钠。

4．l％3,5-二硝基水杨酸试剂: 1g 3,5-二硝基水杨酸溶于20毫升2摩尔／L的氢氧化钠溶液和50毫升水中；再加人30克酒石酸钾钠，定客至100毫升若溶液混浊，可过滤 5．l％氯化钠溶液 300毫升 6．海砂 5克五、操作步骤 1．种子发芽：（如果是绿豆芽，则只需要24就可以） 小麦种子浸泡2.5小时后，放人25℃恒温箱内或在室温下发芽 2．酶液提取： 取发芽第三天或第四天的幼苗（芽长约1cm）15株，放人乳钵内，加海砂 200毫克，加 1％氯化钠溶液10毫升，用力磨碎将匀浆倒入离心管中，用5mL1%氯化钠溶液分次将残渣洗入离心管提取液在室温下放置提取15～20min，每隔数分钟搅1次，使其充分提取然后在3500-4000r/min转速下离心7-10min，将上清液倒入量筒中并记录上清液的体积进行酶活力测定时，将酶提取液稀释10倍（是否可取5ml→50ml稀释？） 取干燥种子或浸泡2.5小时后的种子15粒作为对照（提取步骤同上） 3．酶活力测定： （1）取25毫升刻度试管4支按下表要求加人各试剂（各试剂须25℃预热10分钟）。

将各管混匀，放在25℃，水浴中保温3分钟后，立即向各管中加人1％3,5-二硝基水杨酸溶液2毫升2）取出各试管，放人沸水浴中加热5分钟冷至室温，加水稀释至25毫升将各管充分混匀 （3）用空白管作对照；在500毫微米处测定各管的光吸收值，将读数填人上表 4．计算根据溶液的浓度与光吸收值成正比的关系，即：A标准／A未知＝C标准／C未知：则C（酶液管浓度）＝A酶×C标准／A标准 式中C代表浓度；A为光吸收值 六、讨论 大凡禾谷类植物都含有淀粉，有淀粉存在就应该有淀粉酶，只是含酶的多少而已，而淀粉酶活力的大小与萌发前后、时间的长短都有关系在取样上尽量让反应的时间缩短，以减少酶的损失七、小结通过对以上谷物发芽前后酶活力的测定和计算,可以看出谷物均含有酶都能将淀粉水解成单糖，发芽后的谷物酶活力明显比未发芽的高尤以小麦发芽后的活力最强，说明在啤酒生产中应该要用发芽的麦芽为主要原料；而其它的物质如谷子、玉米等应为辅料绿豆淀粉酶含量太低且成本太高，不宜作为生产啤酒的原料琼州学院实验项目卡生命科学 系 生化 实验室 开设日期____年___月___日实验项目小麦萌发前后淀粉酶活力的比较面向专业课程性质1、必修2、选修实验类型1、还未开设的新实验2、手段更新的实验3、已开设过的实验本实验学时数4实验分组概况所用主要仪器名 称型号规格数量名 称型号规格数量有刻度的试管25ml24试管及试管架若干乳钵6容量瓶各规格分光光度计6电磁炉1恒温水浴箱1量筒10ml6离心机2滴管若干所用主要药品名 称纯度级别数量名 称纯度级别数量麦芽糖0.1%10ml*N淀粉1%10ml*N0.02mol/L磷酸缓冲液 PH6.90.2N磷酸二氢钾10ml*N氯化钠1%20ml*N0.2N磷酸氢二钾10ml*N海砂5g*N二硝基水杨酸1%20ml*N氢氧化钠2mol/L200ml酒石酸钾钠粉末若干其他小麦（或稻谷）种子、塑料盆（种子发芽用）、搽镜纸实验情况记录实验教师签名______________________实验员（管理员）签名______________。