蒽酮法测还原糖.docx

总糖的含量的测定（蒽酮法）一、 实验目的掌握蒽酮比色法测定糖的原理与方法二、 实验原理蒽酮比色法是一个快速而简便的测定糖方法蒽酮可以和游离的己糖或多糖中的己糖基、戊醛糖及己糖醛酸起反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620 nm处有最大吸收蒽酮可与其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同当样品中存有含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈红色对于以上特定的糖类反应较稳定三、 实验器材1. 吸管2. 试管3. 分光光度计4. 水浴锅5. 电炉6. 电子分析天平四、 实验试剂1． 蒽酮试剂：取2 g蒽酮溶于1000 ml体积分数为80 %的硫酸中，当时配制使用2． 标准葡萄糖溶液（0.1 mg/ml）：100 mg葡萄糖溶于蒸馏水并稀释至1000 ml（可滴加几滴甲苯作防腐剂）3． 6 mol/l HCl溶液4． 10 % NaOH溶液：称取10 g NaOH固体，溶于蒸馏水并稀释至100 ml五、 实验操作1. 制作标准曲线取干净试管7支，按下表进行操作表 蒽酮比色法测定糖含量的标准曲线制作管号步骤 0123456标准葡萄糖溶液/ml00.10.20.30.40.50.6蒸馏水/ml1.00.90.80.70.60.50.4置冷水中5 min蒽酮试剂/ml4.04.04.04.04.04.04.0沸水浴中准确煮沸10 min，取出，用自来水冷却，室温放置10 min，在620 min比色。

A620nm2. 样品的处理（见实验四）取上述实验四的水解液，冷却后用10 % NaOH溶液中和至pH呈中性，然后用蒸馏水定容至100 ml，过滤，取滤液10 ml，用蒸馏水定容于100 ml成稀释1000倍的总糖水解液，用于糖含量的测定测定时取1 ml总糖水解液测定还原糖的含量（同标准曲线）样品中糖含量的计算：×100%CVｗ＝ｍw—糖的质量分数（%）；C—从标准曲线上查出的糖质量浓度(mg/ml)；V—样品稀释后的体积（ml）；m—样品的质量（mg）。