冬凌草提取物对大鼠长期毒性的实验研究.doc

1冬凌草提取物对大鼠长期毒性的实验研究作者：姚会枝，李吉学，郑海娜【摘要 】 目的观察连续灌胃给予冬凌草提取物对大鼠产生毒性反应方法冬凌草醇提物 40，20，10 g/kg 连续灌胃给药 12 周，观察给药期间大鼠的一般状况及可能出现的毒性反应，给药结束时测试大鼠血常规及凝血时间，血液生化指标，称脏器重量，计算脏器系数及病理组织变化结果 3 个给药组分别与对照组比较大鼠一般状况未见明显异常，各种血常规和血液生化指标、脏器系数及组织结构也均未见明显异常结论冬凌草提取物长期连续灌胃未见毒性反应，长期服用安全 【关键词】 冬凌草提取物； 长期毒性； 急性肝损伤； 大鼠冬凌草系唇形科香茶菜属植物的干燥叶及其地上部分，1991年收入部颁中药材标准冬凌草味甘苦、性微寒，具有清热解表、消炎止痛、健胃活血及抗肿瘤等作用［1］ 冬凌草及其主要活性成分的良好作用和它们在毒性实验中显示的无明显毒性，引起了国内外学者的广泛关注，近 30 年来国内外学者对冬凌草及其同属植物进行了多方面的研究［2］ 由于冬凌草与人类健康的关系密切，近年来日益受到人们的重视，被开发成多种保健食品，如冬凌草茶等，2但对其长期服用毒理学方面的报道较少。

为探讨冬凌草长期服用的安全性，我们对其进行了长期毒性实验研究1 器材1.1 药物冬凌草提取物的制备： 冬凌草于 2008-07 购自河南省济源市药材公司将冬凌草干燥叶及其地上部分 5 kg 粉碎成粗粉，用 95%的乙醇为溶剂进行冷浸提取，提取液合并减压浓缩至膏状，加 3 倍量的水溶解，滤过，弃去固体，滤饼合并干燥得绿色粉末取供试品粉末用 0.5%的 CMC-Na 配成所需浓度的受试药液1.2 动物 Wistar 大鼠（SPF 级） ，6～8 龄，实验开始时体质量为 80～110 g,雌雄各半由河南省实验动物中心提供1.3 仪器 Pentra-60 全自动血液细胞分析仪，法国 ABX 公司产品；UV-754 紫外可见分光光度计，上海科学精密仪器有限公司产品；电子天平，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司制造1.4 生化试剂 尿素氮（BUN） 、白蛋白（ALB） 、总蛋白（TP） 、胆固醇（T-CHO） 、血糖（GLU） 、丙氨酸氨基转移酶（ALT） 、天冬氨酸氨基转移酶（AST） 、碱性磷酸酶（ALP） 、肌酐（CREA） 、总胆红素（ TBIL）等试剂盒，以上试剂盒均购自南京建3成生物工程研究所，批号 20090324。

2 方法［3，4］动物给药前预饲养 1 周，然后将动物随机分为 4 组，每组20 只，雌雄各半，设空白对照组，冬凌草高剂量、中剂量和低剂量（40，20 ，10 mg/kg）组给药各组灌胃容量为 2 ml·(100 mg)-1,空白对照组给予等体积的 0.5%CMC-Na，1 次/d，连续 12 周每日观察动物饮水、进食、行为活动等情况，称重 1 次/ 周，及时调整用药剂量末次给药 24 h,采集血样于全自动血球分析仪上检测红细胞数（RBC） ，白细胞数（WBC） 、血红蛋白（HGB） 、血小板计数（PLT） 、淋巴细胞百分数（W-SCR） ，中性粒细胞百分数（W-LCR） 另取血样分离血清，用试剂盒测定血清血糖（GLU） 、丙氨酸氨基转移酶（ALT ） 、天冬氨酸氨基转移酶（AST） 、碱性磷酸酶（ALP ） 、尿素氮（BUN） 、白蛋白（ALB） 、总蛋白（TP） 、胆固醇（T-CHO） 、总胆红素（TBIL ）等生化指标解剖大鼠进行肉眼检查各器官情况，取心、肝、脾、肺、肾等称重并计算脏器指数然后将上述器官用 10%甲醛固定，进行病理学检查3 结果3.1 一般情况从给药开始至结束，各组大鼠外观正常、活泼、被毛光泽，眼、耳、鼻、口、生殖器无异常分泌物，大小便颜色形4状均正常。

各给药组动物也未见有系统毒性症状出现无大鼠死亡3.2 体质量及摄食量在连续用药 12 周期间，冬凌草提取物高、中、低各剂量组及雌、雄动物的体质量变化、摄食量变化与对照组相比无显著差别(P>0.05)，体质量变化见表 1～2，实验中无大鼠死亡表 1 灌胃给予冬凌草提取物对雄性大鼠体质量的影响，表 2 灌胃给予冬凌草对雌性大鼠体质量的影响（略） 3.3 血液学检查 各剂量组各项血液学指标与对照组比较均无明显差异，凝血时间检查与对照组间无显著性差异(P>0.05)结果见表 3表 3 冬凌草提取物对大鼠血液学指标的影响（略）3.4 血液生化学检查收集血液，分离血清，检查各项生化指标如下，胆固醇（T-CHO） ，尿素氮（BUN） ，血糖（GLU） ，总蛋白（ TP） ，血清白蛋白含量（ALB） ，总胆红素（TBIL） ，碱性磷酸酶（ ALP） ，血清天冬氨酸转移酶（AST） ，血清丙氨酸氨基转移酶（ALT） 均无明显性差异（P>0.05） 结果见表 4表 4 冬凌草提取物对雌性大鼠血液生化学指标的影响（略）53.5 尸检及病理组织学的检查在解剖过程中，各实验大鼠主要脏器及腺体形态、颜色均无明显改变，各给药组大鼠的脏器系数与对照组比较无显著性差异。

结果见表 5各组大鼠脏器的病理组织学检查均未见变化、坏死、炎症等与药物毒性有关的病变或损伤表 5 冬凌草提取物对大鼠脏器系数的影响（略）4 讨论本实验结果表明，大鼠经冬凌草提取物灌胃给药 12 周，给药期间各组动物的活动、毛色、饮水、摄食、粪便及体质量增长，常规血液学与生化指标检测均正常，与空白对照组比较无显著性差异给药 12 周后将动物处死，对各组动物的心、肝、脾、肺、肾进行肉眼观察，上述几种器官均未见异常，个别动物出现的肺部淤血可能系处死时窒息缺氧或操作不当，而非药物所致依据冬凌草提取物在大鼠长期毒性实验中未见毒性反应出现，可以认为该药是安全的，且安全范围广参考文献】［1］卢海英，梁敬钰，陈荣. 冬凌草的化学成分［J］.中国天然药物,2007,5 (4): 269.［2］郑晓珂，董三丽，冯卫生. 冬凌草的质量控制研究6［J］. 中国实验方剂学杂志，2005,11(2): 10.［3］中华人民卫生部药政局. 中药新药研究指南（药学，药理学，毒理学） ［M］ ．北京：人民卫生出版社， 1993：205.［4］徐叔云，卞如濂，陈修．药理实验方法学［M ］.北京：人民卫生出版社，1991：714.。