邻二氮菲分光光度法测定水中微量铁.docx

邻二氮菲分光光度法测定微量铁一、 实验目的1、 学会吸收曲线及标准曲线的绘制，了解分光光度法的基本原理2、 掌握用邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理3、 学会721型分光光度计的正确使用，了解其工作原理4、 学会数据处理的基本方法5、 掌握比色皿的正确使用二、 实验原理根据朗伯-比耳定律：A=sbc，当入射光波长九及光程b 一定时，在一定浓度 范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比只要绘出以吸光度A 为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线 查得对应的浓度值，即未知样的含量同时，还可应用相关的回归分析软件，将 数据输入计算机，得到相应的分析结果用分光光度法测定试样中的微量铁，可选用显色剂邻二氮菲(又称邻菲罗 啉)，邻二氮菲分光光度法是化工产品中测定微量铁的通用方法，在pH值为2-9 的溶液中，邻二氮菲和二价铁离子结合生成红色配合物：此配合物的lgK =21.3，摩尔吸光系数£510= 1.1x104 L・mol-i・cm-i,而Fe3+稳 510能与邻二氮菲生成3 : 1配合物，呈淡蓝色，lgK =14.1所以在加入显色剂之前,稳应用盐酸羟胺(NH2OH・HCl)将Fe3+还原为Fe2+，其反应式如下：2Fe3+ + 2NH OH・HC1 f 2Fe2+ + N + H O + 4H+ + 2C1-2 2 2测定时酸度高，反应进行较慢；酸度太低，则离子易水解。

本实验采用 HAc-NaAc缓冲溶液控制溶液pH-5.0，使显色反应进行完全为判断待测溶液中铁元素含量，需首先绘制标准曲线，根据标准曲线中不同 浓度铁离子引起的吸光度的变化，对应实测样品引起的吸光度，计算样品中铁离 子浓度本方法的选择性很高，相当于含铁量40倍的Sn2+、A13+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、 SiO32-； 20 倍的 Cr3+、Mn2+、VO3-、PO43-； 5 倍的 C02+、Ni2+、Cu2+-等离子不干 扰测定但Bi3+、Cd2+、Hg2+、Zn2+、Ag+等离子与邻二氮菲作用生成沉淀干扰 测定三、 实验仪器与试剂：721型分光光度计、酸度计、50ml比色管、吸量管（ImL、2mL、5mL、10 mL）、 比色皿、洗耳球l.lxl0-3mol・L-i铁标准溶液、100ug・ml-i铁标准溶液、盐酸、盐酸羟胺、醋 酸钠、0.15%邻二氮菲水溶液四、 实验步骤（一） 准备工作打开仪器电源开关，预热，调解仪器二） 测量工作（以通过空白溶液的透射光强度为10,通过待测液的透射光 强度为I,由仪器给出透射比T,再由T值算出吸光度A值）1、吸收曲线的绘制和测量波长的选择用吸量管吸取2.00 mL1.0X10-3mol.L-i标准溶液，注入50 mL比色管中，加 入1.00 mL 10%盐酸羟胺溶液，摇匀，加入2.00 mL0.15%邻二氮菲溶液，5.0 mL NaAc溶液，以水稀释至刻度。

在光度计上用1 cm比色皿，采用试剂溶液为参比 溶液，在440-560 nm间，每隔10 nm测量一次吸光度，以波长为横坐标，吸光 度为纵坐标，绘制吸收曲线，选择测量的适宜波长一般选用最大吸收波长久 max 为测定波长2、 显色剂条件的选择（显色剂用量）在6支比色管中，各加入2.00mL 1.0X 10-3mol L-1铁标准溶液和1.00mL 10% 盐酸羟胺溶液，摇匀分别加入0.10，0.50, 1.00，2.00，3.00及4.00mL 0.15% 邻二氮菲溶液，5.0 mL NaAc溶液，以水稀释至刻度，摇匀在光度计上用1cm 比色皿，采用试剂溶液为参比溶液，测吸光度以邻二氮菲体积为横坐标，吸光 度为纵坐标，绘制吸光度-试剂用量曲线，从而确定最佳显色剂用量3、 溶液pH的确定取8支50 mL比色管，各加入2mL 1.00 X 10-3mol/L-i的标准铁溶液和1 mL 10%的盐酸羟胺溶液，摇匀放置2 min,再加入特定体积（2中探究出的最适量） 0.15% L 邻二氮菲，摇匀，分别加入 0.0、0.20、0.50、1.00、1.50、2.00、3.0 0 mL 0.15%的NaAc溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。

在光度计上，用1cm的比色皿，选择适宜（由“1”所决定的）波长，以蒸 馏水为参比，分别测其吸光度在坐标纸上以加入的NaAc溶液体积数为横坐标， 相应的吸光度为纵坐标，绘制A—pH曲线，确定测定过程中pH范围4、 显色时间及有色溶液的稳定性用吸量管吸取2mL 1.00X10-3mol/L-1的标准铁溶液于50 mL比色管中，加 入1 mL 10%的盐酸羟胺溶液，摇匀（原则上每加入一种试剂后都要摇匀）再 加入2 mL邻二氮菲溶液，加入特定体积的（3中探究出的）NaAc溶液，以水稀 释至刻度，摇匀在光度计上，用1 mL的比色皿，以蒸馏水为参比溶液，放置， 每两分钟测一次，在510nm之间测定吸光度以时间为横坐标，吸光度为纵坐 标，绘制A-t吸收曲线，选择测量的最适时间5、 标准曲线的制作在6个50 mL的容量瓶中，用10 mL吸量管分别加入0.00、0.20、0.40、0.60、 0.80、1.00 mL 100m g・mL-1铁标准溶液，各加入1 mL 10%盐酸羟胺，摇匀（原 则上每加入一种试剂都要摇匀）再加入2 mL 0.15%的邻二氮菲溶液和特定体积 1mol・ L-1NaAc溶液，以蒸馏水稀释至刻度，摇匀。

放置一段时间（4中探究出 的时间）以试剂空白为参比，在510nm或所波长下，用1cm的比色皿，测定各 溶液的吸光度绘制标准曲线6、 试液含铁量的测定准确吸取适量试液（如水样或工业盐酸、石灰石样品制备液等）代替标准溶 液，其他步骤同上，平行三次测定其吸光度记录计算机显示的含铁量，计算试 液中铁的含量（以mg • L-1表示）五、数据处理1、邻二氮菲-Fe2+吸收曲线的绘制(1)数据纪录不同波长吸光度波长 入/nm440445450455460465470475480吸光 度A0.3400.3530.3640.3770.3950.4150.4330.4470.454波长 入/nm485490495500505510515520525吸光 度A0.4570.4600.4670.4770.4900.4970.4910.4680.428波长 入/nm530535540545550555560吸光 度A0.3740.3100.2460.1880.1400.1040.077(2)作吸收曲线图由图可知，最大吸收波长久=510nmmax2、显色剂用量的测定(1)显色剂用量与吸光度的关系邻二氮菲用量曲线：（店510 nm）邻二氮菲的体积（ml）0.100.501.002.003.004.00吸光度A0.0480.2820.4970.5000.4910.485KaAc用量曲线（2）溶液pH与吸光度的关系浓度[ug/ml]Abs00.0060.20.060.50.23110.421.50.40620.4022.50.395据上面数据，作得标准曲线图如下:—7^ * * *//71 2 3NaAc 体积(ml)由图可知，NaAc最佳用量为1.00 mL。

3）显色时间及有色溶液的稳定性t min03691215A0.4800.4770.4780.4790.4800.479f显色时间与吸光度关系图时间t结论：放置12分钟后铁离子与邻二氮菲基本完全结合2、工业盐酸中铁含量的测定（1）标准曲线的制作试液中铁含量与吸光度的关系Vv 100ug/mL mL0.000.600.801.001.201.40A0.000.2180.2890.3550.4300.494亠系列1—线性（系列1）y = 0. 3537x+0. 00终/|^***^***^|^ 1 1 1 1 1 10 0. 2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6试液含铁量的测定测试次数123吸光度A0.4820.4830.483铁的浓度/ug/mL1.35451.35741.3574铁水样浓度的平均值/ug/mL1.3564相对偏差0.095%0.05%0.05%数据分析：本次测量的结果的偏离平均值较小，实验测量结果的可信度高六、 实验注意事项1、 不能颠倒各种试剂的加入顺序2、 读数据时要注意A和T所对应的数据透射比与吸光度的关系为:A=log(£/I)= log(1/T测定条件指：测定波长和参比溶液的选择。

3、 最佳波长选择好后不要再改变4、 每次测定前要注意调满刻度七、 思考题1、 邻二氮菲分光光度法测定微量铁时为何要加入盐酸羟胺溶液？答：工业盐酸中含有Fe2+和Fe3+，其中Fe2+与邻二氮菲(phen)能生成稳定的 桔红色配合物［FeShen)”此配合物的1邸稳=21・3,摩尔吸光系数^5io=1-1x 104L «mol-1 «cm-1,而Fe3+能与邻二氮菲生成3 : 1配合物，呈淡蓝色，lgK稳=14.1 所以在加入显色剂之前，应用盐酸羟胺(NH2OH・HC l)将Fe3+还原为Fe2+，然后， 进行铁的总量的测定2、 参比溶液的作用是什么？在本实验中可否用蒸馏水作参比？答：参比溶液的作用是扣除背景干扰，不能用蒸馏水作参比，因为蒸馏水成分与试液成分相差太远，只有参比和试液成分尽可能相近，测量的误差才会越小3、 邻二氮菲与铁的显色反应，其主要条件有哪些？答：邻二氮菲与铁的显色反应，其主要条件有：酸度一般(pH=5~6)、温度、 邻二氮菲的用量，显色时间等八、实验总结通过本实验，学习了确定实验条件的方法，再次熟悉了可见分光光度法的测 量原理和实验操作步骤,掌握了邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理以及 掌握721型分光光度计的使用方法。