血清CK及其同工酶测定课件.ppt

血清血清CKCK及其同工酶测定及其同工酶测定检验系生化检验系生化一、概述n肌酸激酶（Creatine kinase，CK，EC2.7.3.2）全称腺苷三磷酸：肌酸N-磷酸转移酶，催化肌酸（Cr）和ATP或磷酸肌酸（CrP）和ADP之间磷酸转移的可逆反应肌酸+ATP 磷酸肌酸+ADP+H+CKn偏碱pH有利于顺向反应进行，中性pH倾向逆向反应，一般逆向反应较顺向反应快2~6倍；nMg2+是CK 的必需激活剂，但过量反而抑制；n样品宜用血清或肝素化血浆；n标本应避免严重溶血；n血清中CK较不稳定，室温4h或4℃12h可使酶失活二、CK测定方法n比色法n紫外分光光度法n荧光法比色法n利用顺向反应1、测磷法 CrP在酸液中易水解成Cr及无机磷酸ATP与ADP在酸性条件下较稳定）2、酶偶联-丙酮酸测定法 肌酸+ATP 磷酸肌酸+ADP ADP+磷酸烯醇式丙酮酸 丙酮酸+ATP 丙酮酸+2，4-二硝基苯肼 丙酮酸-2，4-二硝 基苯腙CK丙酮酸激酶☆顺向反应测定CK的底物较便宜；☆测磷法的试剂较易得而稳定；☆丙酮酸激酶价格较贵，不易获得；☆顺向反应速度较慢，灵敏度较低。

n利用逆向反应CrP+ADP Cr+ATPCr+双乙酰+α-萘酚 红色化合物红色化合物•Mg2+作激活剂；•半胱氨酸供给巯基；•氢氧化钡和硫酸锌沉淀蛋白并终止反应CKn逆向反应的速度较快，敏感性较高，成为目前国内推荐的主要方法n必须用中性或偏碱的蛋白沉淀剂以防止底物CrP在酸性蛋白沉淀剂中非酶性水解成Cr紫外分光光度法n多利用逆向反应，是国际最常用方法CrP+ADP Cr+ATPATP+Glu ADP+6-P-Glu6-P-Glu+NADP+ 6-P-GA+NADPH+H+ CK己糖激酶G-6-PDn全部反应最适pH为6.8~6.9；n主要干扰因素①谷光甘肽还原酶②腺苷酸激酶荧光法n利用逆向反应生成的Cr在强碱性溶液中与茚三酮反应产生荧光复合物，测其荧光强度，经与同样处理的Cr标准管比较，可计算CK活力优点：快速、敏感，巯基化合物不产生干 扰，试剂易得，操作条件易于掌握缺点：需精密荧光分光光度计，不适宜基 层单位使用。

酶偶联酶偶联-丙酮酸测定法步骤（顺向反应）丙酮酸测定法步骤（顺向反应）空白标准测定H2O0.1血清0.1标准0.1酶试剂0.50.50.537℃，10minDNP0.50.50.537℃，15min0.4N NaOH444室温5min，440nm比色n计算：Au/As×200U/L三、血清三、血清CKCK同工酶测定同工酶测定n方法：琼脂糖凝胶电泳法。