新试验一芦丁的提取、分离与鉴定.doc

实验一芦丁的提取、精制与鉴定一、实验目的与要求1、 以芦丁为例学习黄酮类化合物的提取方法；2、 掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮甘，首元和糖部分的鉴定方法0R=-glu-rha 芦丁撇皮素芦丁溶解度：冷水1： 8000热水1： 200冷乙醇L 300 热乙醇1： 30难溶于乙酸乙酯、内•酮，不溶于苯、氯仿、乙醍、及石油醍等溶剂撇皮素溶解度：冷乙醇L 650热乙醇L 60可溶于甲醇、冰醋峻、乙峻乙酯、丙酮、毗喘，不溶于石油醍、 乙醍、氯仿和水中二、 实验原理本实验是利用芦丁在热水中和冷水中溶解度相差较大的性质，用热水提取和 精制；芸香甘属于甘类化合物，可被稀峻水解成榔皮素（首无），葡萄糖和鼠李 糖芦丁和橄皮素通过化学反应，色谱法和光谱分析进行检识与鉴定三、 实验内容（-）提取分离和纯化1、 芦丁的提取：2、 精制（重结晶）：3、 芦丁的水解：流程图如卜:槐米（20g）研碎，于500ml烧杯中，加 350, 250ml 水煮沸 15min, lOmin棉花过滤提取液放置1-1. 5hu抽滤滤液（弃去）沉淀物（粗品芦丁）1/2粗品芦丁150ml, 1%H2SO4直火加热水解30min 放冷抽滤。

沉淀水洗至中性滤液 粗品棚皮素氢氧化钙调pH至中性、 水解 | 楠制1/2粗品芦丁80倍水|加热溶解，趁热抽滤不溶物（弃去）滤液放置p-1.5h,抽滤 精品芦丁滤渣（弃去） 水解液（水浴浓缩至2ml） （二）鉴定1、化学检识取芦丁和橄皮素少量，置2支试管中分别加乙醇8ml使溶解（1） 盐酸一镁粉反应：取芦丁和挪皮素乙醇液0. 5ml,置2支试管中分别加浓 盐酸5滴，再加少量镁粉，观察颜色变化2） Molish反应:取芦丁和棚皮素乙醇液0. 5ml,置2支试管中分别加10%a 一蔡酚0.5ml摇匀，倾斜试管，沿管壁缓缓滴加浓硫酸0. 5ml,静置，观察二层 溶液界面处颜色变化，并比较芦丁和榔皮素的区别3） FeCL,反应：取芦丁和橄皮素乙醇液0. 5ml,置2支试管中分别加1%三氯 化铁乙醇液几滴，观察颜色变化4） A1CL反应：取芦丁和棚皮素乙醇液0. 5mL置2支试管中分别加1%三氯化铝乙醇液几滴，先置可见光下观察后，置紫外灯下观察颜色变化5） Mg （Ac）2反应：取芦丁和橄皮素乙醇液0. 5ml,置2支试管中分别加1%乙 酸镁乙醇液几滴，观察颜色变化2、色谱鉴定（DW皮素和芦丁的纸色谱鉴定点样：取圆形滤纸，距圆心1厘米处用铅笔划一同心圆，为起始线，间隔1 厘米处点样品（a,b,c,d）。

将点好样品的滤纸置于培养皿中分别用展开剂①、② 径向展开a自制芦丁乙醇液b芦丁对照品乙醇液c自制懈皮素乙醇液 d棚皮素 对照品乙醇液展开剂：①正丁醇一醋酸一水（4： 1： 5,上层）②正丁醇一醋酸一水（4： 1： 5,下层）显色：①可见光下观察色斑②喷1 %A1CL乙醇液，再置紫外灯下观察荧光2）糖的纸层析鉴定点样：取圆形滤纸，同上法点样和展开（e, f, g）e水解液f葡萄糖对照品水溶液g鼠李糖对照品水溶液展开剂：正丁醇一醋酸一水（4： 1： 5,上层）显色：喷洒苯胺-邻苯二甲酸，电炉上加热烘烤至色斑出现四，分析讨论1, 芦丁酸水解时有何现象，如何解释？2, 橄皮素和芦丁纸色谱鉴定时，用BAW （4： 1： 5）上层和下层展开后，解释 两者的相对比移值大小关系？3, 葡萄糖和鼠李糖的纸层析鉴定时，用BAW （4： 1： 5）上层展开后，何者相 对比移值较大，为什么？芦丁，挪皮素鉴定（二）一，橄皮素衍生物的制备懈皮素五乙酰化物的制备：取懈皮素结晶200 mg,置于干燥三角锥形瓶中， 加5ml醋酎，用毛细管滴加农硫峻一小滴，振摇使完全溶解，水浴上加热30分 钟（注意应避免反应过程中引入水份），放冷后将反应液在搅拌下倾入100ml水 中，一•直搅拌至油滴消失，且有固体沉淀析出为止，抽滤沉淀并洗涤，干燥后以 95%乙醇重结晶，即得橄皮素五乙酰化物无色结晶。

二，芦丁的 UV, HPLC, IR 分析（一）芦丁的UV分析（实验地点，二号试验楼A栋411室）：（-）芦丁的HPLC分析（实验地点，二号试验楼A栋411室）：1，色谱条件与系统适应性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇一1 % 冰乙酸溶液（32： 68）为流动相，检测波长为257nm,理论塔板数按芦丁峰计算 不低于20002, 对照品溶液的制备：精密称取在120C干燥至恒重的芦丁对照品适量，加甲 醇制成每1ml含0. 1 mg的溶液，即得3, 供试品溶液的制备：取自制精制品约g,精密称定，置ml容量瓶中，加入甲 醇溶液ml,超声处理30分钟，放冷，用甲醇定容至刻度，摇匀，过0. 45 u m微 孔虑膜，即得4, 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20P1,注入液相色谱仪 中，测定，即得三）芦丁的IR分析（实验地点，二号试验楼A栋2室）:。