正典球虫卵囊简易监测法.doc

正典球虫卵囊简易监测法一、 正典球虫卵囊简易监测法及工具盒简介正典球虫卵囊简易监测法是广东省佛山市正典生物技术有限公司是根据寄生虫病诊断中常用的饱和盐水浮卵法加以改良而成的，专用于检测鸡粪中球虫卵囊本法可测定每克粪便中鸡球虫卵囊的数量，克服了饱和盐水浮卵法只能定性，不能定量的缺点，准确性虽较麦氏克粪便虫卵计数法稍差，但其操作和对设备的要求大为简化，仅需1台可放大100倍的显微镜，少量饱和食盐水和1套正典球虫卵囊简易监测工具盒，即可在十多分钟内完成对一群鸡的球虫病或疫苗免疫效果的快速监测正典球虫卵囊简易监测工具盒中包括：1本正典球虫卵囊简易监测法操作说明书、1块双凹载波片、1个100ml量杯、1个标准取液环和1把小汤匙二、 鸡球虫病基本知识鸡球虫病的发生机理与危害a. 球虫在鸡体内进行的是一种有限数量的发育与繁殖b. 鸡要感染一定数量有致病力的球虫，亦即食入足够数量的孢子化卵囊，才会在感染后的第4~5天引致发病c. 球虫病对养鸡生产造成的危害是综合性和多方面的1. 柔嫩艾美耳球虫（引致盲肠球虫病）高发时间：地面平养：3~4周龄网上或笼养：3~20多周龄不等致病特征：下鲜红色血痢，盲肠肿大和粘膜严重坏死出血，是鸡的7 种球虫中致病力最强的一种。

寄生部位：盲肠上皮细胞和粘膜下层卵囊形态：呈宽卵圆形，大小约22×19微米2. 毒害艾美耳球虫（引致急性小肠球虫病）高发时间：主要发生于6周龄以上的中大鸡致病特征：血粪呈酱油色，小肠中段严重肿胀几乎为正常直径的两倍，肠壁增厚，有明显的淡白色斑点，粘膜上有出血点肠道受破坏特别严重，病程较长，常与肠道梭菌并发感染寄生部位：主要寄生在小肠中段在严重感染的病例，病变可能扩展到肠道的整个范围卵囊形态：呈椭圆形或长卵圆形，大小约20×17微米3. 巨型艾美耳球虫（引起亚临床球虫病）致病特征：眼观无明显特征，常引起小肠中段肠壁增厚，有轻度出血，粪便含水量增高，不成形，内含较多未消化饲料，主要影响饲料消化和营养吸收，容易误诊为其它肠道疾病寄生部位：主要寄生在小肠中段在严重感染的病例，病变可能扩展到整个小肠范围卵囊形态：较其它种类球虫卵囊明显要大，呈卵圆形，大小约31×21微米4. 堆型艾美耳球虫（引起亚临床球虫病）致病特征：轻度感染时眼观无明显特征，严重感染时十二指肠粘膜上可见梯状横向排列的白斑十二指肠粘膜增厚，有轻度出血，粪便含水量增高，不成形，内含较多未消化饲料，主要影响饲料消化和营养吸收，易与其它肠道疾病混淆。

寄生部位：主要寄生在十二指肠卵囊形态：较柔嫩、毒害艾美耳球虫卵囊要小，呈偏圆形，大小约18×15微米5. 布氏艾美耳球虫（目前国内不常见）致病特征：致病力较柔嫩、毒害艾美耳球虫稍弱，但国内罕有病例寄生部位：主要寄生于卵黄蒂至盲肠连接处卵囊形态：大小与柔嫩艾美耳球虫相似，呈卵圆形，大小约25×19微米6. 早熟艾美耳球虫致病特征：致病作用不明显，引起的病变肉眼不可见，在长期饲养的鸡群中可观测到轻微影响寄生部位：主要寄生在十二指肠卵囊形态：大小与毒害艾美耳球虫相似，呈卵圆形，大小约21×17微米7. 和缓艾美耳球虫致病特征：目前认为该种类几乎无致病力，仅有对增重和其它疾病的潜在影响寄生部位：主要寄生于小肠下段，即卵黄蒂至盲肠连接处卵囊形态：较堆型艾美耳球虫小，呈圆形，大小约15×14微米三、 正典球虫卵囊简易监测法操作说明1. 准备工作a.材料可放大100倍的显微镜1台、饱和食盐水适量、正典球虫卵囊简易监测工具盒1套、收集鸡粪用胶袋或容器适量b.饱和盐水配制方法在一定量水中（最好用沸水），边搅拌边加入纯食盐，直至有少量食盐不再溶解为止，待冷却后使用c.粪样采集从鸡舍地面的多个位置采集新鲜粪便样品，小肠粪约20堆，盲肠粪约5堆，装入收集鸡粪用胶袋或容器中。

同一栋鸡舍或同一群鸡的粪样为1个样品2. 检测步骤：a. 将所采集到的1个粪样充分搅拌均匀b. 用正典球虫卵囊简易监测工具盒中的小汤匙取半匙（约3~5克），装入100ml量杯中，加入10ml饱和食盐水，用小汤匙不断搅拌至粪样彻底分散均匀后，再加入约50ml饱和食盐水，搅拌均匀后静置10分钟以上c. 用取液环轻轻蘸取最上层液面，抖落到双凹载玻片上的圆坑中，在液面不同位置处如此操作3次，形成1个与圆坑面积大小相同的液滴d. 将双凹玻片置于显微镜下观察（倍数10×10），观察液面的中部位置，计算卵囊最密集位置1个视野中的卵囊和种类数量3. 根据鸡球虫卵囊的形态判别种类堆型艾美耳球虫卵囊巨型艾美耳球虫卵囊柔嫩、毒害艾美耳球虫卵囊4. 结果判定视野中每个卵囊代表所取每克粪样中含该种类卵囊约1000个四、 正典球虫卵囊简易监测法在鸡亚临床球虫病诊断中的应用毒害、巨型和堆型艾美耳球虫寄生在鸡的小肠，当其为亚临床感染时极少引起鸡只大量死亡和典型病状，故易被养鸡生产者忽略或误诊因其寄生部位为营养吸收的主要部位，其在肠粘膜寄生和破坏的过程常造成饲料营养消化吸收不良，又为其它病原突破肠道防卫系统大量繁殖创造极为有利的条件。

对养鸡生产所造成的损失甚至大于急性球虫病因其无明显眼观特征病变或症状，故确诊需检查发病鸡的粪便中是否含有卵囊取有异常的粪样按正典球虫卵囊简易监测法进行检查，即可确诊五、 正典球虫卵囊简易监测法在正典球苗免疫监测中的应用正典球苗因使用了首创的免疫前不需停水的5小时饮水接种法，鸡群免疫极为均匀，首免后产生的子代卵囊集中于免疫后的6~8天排出，孙代卵囊集中于免疫后13~15天排出，且每堆粪便中的卵囊数量差异不大，故可通过正典球虫卵囊简易监测法检测少量粪样反应整个鸡群的免疫状况具体指标如下：监测时间免疫后足6~8天（检测其中2~3天，每天1次）免疫后足13~15天（检测其中2~3天，每天1次）100倍放大镜视野中可见卵囊形态种类3种规格大小3种规格大小100倍放大镜1个视野中可见3种形态卵囊数量10~6050~200检测异常原因分析某些卵囊种类偏少或缺失1、受某些药物干扰；2、粪样采集不当，如采集盲肠粪过少；3、疫苗保存不当，如曾冰冻；4、采样时间是否在卵囊排出期卵囊数量偏少1、可能此次免疫受到外界因素干扰，包括接种疫苗后的用药干扰；2、用的是非饱和食盐水；3、检测操作时静置漂浮时间不够卵囊数量偏多1、早期野毒感染；2、采集的小肠粪与盲肠粪比例是否符合4：1；3、勺取的粪样是否偏多。