保健食品功效成分检测方法.pdf

分光光度法分光光度法分光光度法分光光度法 测定保健食品功效成分 仓公敖仓公敖仓公敖仓公敖 YOUR SITE HEREYOUR SITE HEREYOUR SITE HEREYOUR SITE HERE LOGOLOGOLOGOLOGO 1. 1. 1. 1. 保健食品的原料保健食品的原料与与功效成分功效成分 2. 2. 2. 2. 保健食品的功效成分保健食品的功效成分与与保健功能保健功能 3. 3. 3. 3. 保健食品功效成分的保健食品功效成分的检测检测 4. 4. 4. 4. 检测检测方法的技方法的技术术要求及要求及数数据据处处理理 内内 容容 YOUR SITE HEREYOUR SITE HEREYOUR SITE HEREYOUR SITE HERE LOGOLOGOLOGOLOGO 1. 1. 1. 1. 多糖的多糖的检测检测方法方法 多多 糖糖 保健功效成分来源与保健功能保健功效成分来源与保健功能 功效成分功效成分 灵芝多糖 香菇多糖 硫酸软骨素 保健功能保健功能 缓解体力疲劳 增强免疫力 辅助降血糖 辅助降血脂 辅助降血脂 增强免疫力 保护骨关节 参与制造骨骼 主要来源主要来源 灵芝、香菇、枸杞、银耳、 灰树花、人参、西洋参、 昆布、木耳、山药、黄芪、 茯苓、猪苓、黄精、苦瓜 动物的软骨 YOUR SITE HEREYOUR SITE HEREYOUR SITE HEREYOUR SITE HERE LOGOLOGOLOGOLOGO 1. 1. 1. 1. 多糖的多糖的检测检测方法方法 多多 糖糖 一、粗多糖的苯酚、粗多糖的苯酚————硫酸分光光度测定法硫酸分光光度测定法 • 测定原理测定原理 - - - - 多糖经乙醇沉淀分离后，去除其他可溶性糖及杂质的干多糖经乙醇沉淀分离后，去除其他可溶性糖及杂质的干 扰，再与苯酚扰，再与苯酚——硫酸作用成橙红色化合物，其呈色度与溶硫酸作用成橙红色化合物，其呈色度与溶 液中的糖的浓度成正比，在液中的糖的浓度成正比，在485nm485nm波长下比色定量波长下比色定量 YOUR SITE HEREYOUR SITE HEREYOUR SITE HEREYOUR SITE HERE LOGOLOGOLOGOLOGO 1. 1. 1. 1. 多糖的多糖的检测检测方法方法 多多 糖糖 一、粗多糖的苯酚、粗多糖的苯酚————硫酸分光光度测定法硫酸分光光度测定法 • 样品处理样品处理 由于不少保健品添加了淀粉、糊精，一定要做相应的处由于不少保健品添加了淀粉、糊精，一定要做相应的处 理，否则结果偏高。

添加淀粉的样品需加理，否则结果偏高添加淀粉的样品需加αα- -淀粉酶及糖化淀粉酶及糖化 酶（如葡萄糖苷酶）处理添加糊精的样品需加糖化酶酶（如葡萄糖苷酶）处理添加糊精的样品需加糖化酶 （如葡萄糖苷酶）处理如葡萄糖苷酶）处理 处理的原则是将这类非活性多糖的碳水化合物全部酶解处理的原则是将这类非活性多糖的碳水化合物全部酶解 成单糖或低聚糖，再用乙醇沉淀所需的活性多糖以达到分成单糖或低聚糖，再用乙醇沉淀所需的活性多糖以达到分 离的目的离的目的 YOUR SITE HEREYOUR SITE HEREYOUR SITE HEREYOUR SITE HERE LOGOLOGOLOGOLOGO 1. 1. 1. 1. 多糖的多糖的检测检测方法方法 多多 糖糖 一、粗多糖的苯酚、粗多糖的苯酚————硫酸分光光度测定法硫酸分光光度测定法 • 样品测定样品测定 定量准确移取样品溶液于定量准确移取样品溶液于25mL25mL比色管中，补加水至比色管中，补加水至 2.0mL,2.0mL,加入加入5%5%苯酚溶液苯酚溶液1.0mL,1.0mL,在旋涡混合器上混匀，小心在旋涡混合器上混匀，小心 加入浓硫酸加入浓硫酸10mL,10mL,在旋涡混合器上小心混匀，至沸水浴中在旋涡混合器上小心混匀，至沸水浴中 2min2min，冷却至室温，用分光光度计在，冷却至室温，用分光光度计在485nm485nm波长处以试剂空波长处以试剂空 白为参比，白为参比，1cm1cm比色皿测定吸光度值。

比色皿测定吸光度值 YOUR SITE HEREYOUR SITE HEREYOUR SITE HEREYOUR SITE HERE LOGOLOGOLOGOLOGO 1. 1. 1. 1. 多糖的多糖的检测检测方法方法 多多 糖糖 二、葡聚糖的分光光度测定法二、葡聚糖的分光光度测定法 • 注意事项注意事项 �测定样品中多糖时，提取时间以1小时为宜，以免因提取时间过长引起 糖结构变化甚至使碳键断裂而导致所测多糖含量偏低 �本法灵敏度高，出现测定结果平行性偏差较大,实际操作时每个样品要 多做几个平行样 �由于保健食品组方的复杂性，不同分子量得多糖所用的乙醇浓度沉淀效 果是不同的 �酶的活性对酶解的效果影响较大 �粗多糖测定最终报告结果要标示以葡萄糖计或葡聚糖计，因两者测定值 相差很大 一、粗多糖的苯酚、粗多糖的苯酚————硫酸分光光度测定法硫酸分光光度测定法 YOUR SITE HEREYOUR SITE HEREYOUR SITE HEREYOUR SITE HERE LOGOLOGOLOGOLOGO 1. 1. 1. 1. 多糖的多糖的检测检测方法方法 多多 糖糖 二、葡聚糖的分光光度测定法二、葡聚糖的分光光度测定法 • 测定原理测定原理 - - - - 食品中相对分子质量大于食品中相对分子质量大于1 1* *104104的高分子物质在的高分子物质在80%80%乙醇溶乙醇溶 液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜 试剂选择性地从其他高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的试剂选择性地从其他高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的 多糖，用苯酚多糖，用苯酚——硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含 量，其显色强度与粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计量，其显色强度与粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计 算食品中粗多糖的含量。

算食品中粗多糖的含量 YOUR SITE HEREYOUR SITE HEREYOUR SITE HEREYOUR SITE HERE LOGOLOGOLOGOLOGO 1. 1. 1. 1. 多糖的多糖的检测检测方法方法 多多 糖糖 二、葡聚糖的分光光度测定法二、葡聚糖的分光光度测定法 • 样品处理样品处理 1 1）样品提取）样品提取 2 2）沉淀粗多糖）沉淀粗多糖 3 3）沉淀葡聚糖）沉淀葡聚糖 YOUR SITE HEREYOUR SITE HEREYOUR SITE HEREYOUR SITE HERE LOGOLOGOLOGOLOGO 1. 1. 1. 1. 多糖的多糖的检测检测方法方法 多多 糖糖 二、葡聚糖的分光光度测定法二、葡聚糖的分光光度测定法 • 样品处理样品处理 • 样样品提取品提取 称取混合均匀的固体样品称取混合均匀的固体样品2.0g,2.0g,置于置于100ml100ml，加水，加水80ml80ml左左 右，于沸水浴上加热右，于沸水浴上加热2 2小时、冷却至室温后补加水至刻小时、冷却至室温后补加水至刻 度，混匀后过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供沉淀多糖度，混匀后过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供沉淀多糖 YOUR SITE HEREYOUR SITE HEREYOUR SITE HEREYOUR SITE HERE LOGOLOGOLOGOLOGO 1. 1. 1. 1. 多糖的多糖的检测检测方法方法 多多 糖糖 二、葡聚糖的分光光度测定法二、葡聚糖的分光光度测定法 • 样品处理样品处理 • 沉淀粗多糖沉淀粗多糖 准确吸取样品提取中终滤液准确吸取样品提取中终滤液5.0ml5.0ml或液体样品或液体样品5.0ml5.0ml，置，置 于于50ml50ml离心管中，加入无水乙醇离心管中，加入无水乙醇20ml20ml，混匀，混匀5min5min后，以后，以 3000r/min3000r/min离心离心5min5min，弃去上清液。

残渣用，弃去上清液残渣用80%(80%(体积分数）体积分数） 乙醇溶液数毫升洗涤，离心后弃上清液，反复操作乙醇溶液数毫升洗涤，离心后弃上清液，反复操作3-43-4次 残渣用水溶解并定容至残渣用水溶解并定容至5.0ml5.0ml，混匀后供沉淀葡聚糖混匀后供沉淀葡聚糖 YOUR SITE HEREYOUR SITE HEREYOUR SITE HEREYOUR SITE HERE LOGOLOGOLOGOLOGO 1. 1. 1. 1. 多糖的多糖的检测检测方法方法 多多 糖糖 二、葡聚糖的分光光度测定法二、葡聚糖的分光光度测定法 • 样品处理样品处理 • 沉淀葡聚糖沉淀葡聚糖 准确吸取沉淀粗多糖后的终溶液准确吸取沉淀粗多糖后的终溶液2ml2ml，置于，置于20ml20ml离心管离心管 中，加入中，加入100g/l100g/l氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液2.0ml2.0ml、铜试剂溶液、铜试剂溶液2.0ml2.0ml，， 沸水浴中煮沸沸水浴中煮沸2min2min，冷却，以，冷却，以3000r/min3000r/min离心离心5min,5min,弃去上弃去上 清液残渣用洗涤液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反清液。

残渣用洗涤液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反 复操作复操作3 3次，残渣用次，残渣用10%10%（体积分数）硫酸溶液（体积分数）硫酸溶液2.0ml2.0ml溶解溶解 并转移至并转移至50ml50ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀此溶液容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀此溶液 为样品测定液为样品测定液 YOUR SITE HEREYOUR SITE HEREYOUR SITE HEREYOUR SITE HERE LOGOLOGOLOGOLOGO 1. 1. 1. 1. 多糖的多糖的检测检测方法方法 多多 糖糖 二、葡聚糖的分光光度测定法二、葡聚糖的分光光度测定法 • 样品测定样品测定 准确吸取样品测定液准确吸取样品测定液2.0mL2.0mL，置于，置于25mL25mL比色管中，加入比色管中，加入 50g/L50g/L苯酚溶液苯酚溶液1.0mL,1.0mL,在旋涡混合器上混匀，小心加入浓硫在旋涡混合器上混匀，小心加入浓硫 酸酸10.0mL,10.0mL,在旋涡混合器上小心混匀，至沸水浴中在旋涡混合器上小心混匀，至沸水浴中2min2min，冷，冷 却至室温，用分光光度计在却至室温，用分光光度计在485nm485nm波长处以试剂空白为参波长处以试剂空白为参 比，比，1cm1cm比色皿测定吸光度值。

比色皿测定吸光度值 YOUR SITE HEREYOUR SITE HEREYOUR SITE HEREYOUR SITE HERE LOGOLOGOLOGOLOGO 1. 1. 1. 1. 多糖的多糖的检测检测方法方法 多多 糖糖 二、葡聚糖的分光光度测定法二、葡聚糖的分光光度测定法 • 注意事项注意事项 �本方法测定的水溶性多糖含有10个以上单糖残基 �在测定过程中应避免糖和其他碳水化合物的污染，因为苯酚—硫酸与糖 和碳水化合物起反应 �某些保健食品中功效成分为醇溶性多糖，可参照本方法进行测定，但样 品预处理时将乙醇改为丙酮即可 �洗涤粗多糖沉淀时，一定要将离心管壁上玷污的其他糖分和碳水化合物 用80%乙醇洗净，否则结果偏高 �此法适用于测定高分子量的糖类物质（10000Da） YOUR SITE HEREYOUR SITE HEREYOUR SITE HEREYOUR SITE HERE LOGOLOGOLOGOLOGO 1. 1. 1. 1. 多糖的多糖的检测检测方法方法 多多 糖糖 三、硫酸软骨素的分光光度测定法三、硫酸软骨素的分光光度测定法 • 测定原理测定原理 - - - - 结晶紫是一种阳离子染料，在酸性条件下带正电荷，易与结。