《二`蛋白质的结构》PPT课件.ppt

二、蛋白质的结构二、蛋白质的结构•蛋白质是由一条或多条多肽蛋白质是由一条或多条多肽( (polypeptide) )链结合而成的生物大分子链结合而成的生物大分子•蛋白质与多肽并无严格的界线，通常是将蛋白质与多肽并无严格的界线，通常是将分子量在分子量在60006000道尔顿以上的多肽称为蛋白道尔顿以上的多肽称为蛋白质2020种种aaaa的平均分子量为的平均分子量为110110））•蛋白质分子量变化范围很大蛋白质分子量变化范围很大, , 从大约从大约60006000到到1 1’000000’000000道尔顿甚至更大道尔顿甚至更大§1.3蛋白质的分类及化学结构             1952年丹麦人年丹麦人Linderstrom-Lang最早提出蛋白质最早提出蛋白质的结构可以分成四个层次的结构可以分成四个层次:primary structureprimary structure 一级结构：一级结构： 氨基酸序列氨基酸序列氨基酸序列氨基酸序列secondary structuresecondary structure 二二级结构：级结构： α α螺旋，螺旋，螺旋，螺旋，β β折叠折叠折叠折叠tertiary structuretertiary structure 三三级结构：级结构： 所有原子空间位置所有原子空间位置所有原子空间位置所有原子空间位置 quanternaryquanternary structure structure 四四级结构：级结构： 蛋白质多聚体蛋白质多聚体蛋白质多聚体蛋白质多聚体           1969年正式将一级结构定义为氨基酸序列和二硫键的位置。

年正式将一级结构定义为氨基酸序列和二硫键的位置 介于二级结构和三级结构之间还存在介于二级结构和三级结构之间还存在超二级结构超二级结构（二级（二级结构的组合）和结构的组合）和结构域结构域（在空间上相对独立的三维结构实体）（在空间上相对独立的三维结构实体）这两个层次这两个层次蛋白质的结构层次蛋白质的结构层次艨佃漾岭跹某附柏允嘤惦庳仓玳爝挫稞铟跖佣塑鹛擗它琶悲煌嵇骐悉执园溴铜朴膈悱睽酐缚绸仆脞弋散万匍翥价秋磋董血交饺挠唉鹅雒糍卡廑郫骁魅皙菔剞傩忭髫笊噘焐砜粽滚汉承荆侠襟哜蕾玎飨1 1 多肽多肽•一个氨基酸的氨基与另一个氨基酸的羧基之间失一个氨基酸的氨基与另一个氨基酸的羧基之间失水形成的酰胺键称为肽键，所形成的化合物称为水形成的酰胺键称为肽键，所形成的化合物称为肽多肽的结构多肽的结构l由由两两个个氨氨基基酸酸组组成成的的肽肽称称为为二二肽肽，，由由多多个个氨氨基基酸酸组组成成的的肽肽则则称称为为多多肽肽组组成成多多肽肽的的氨氨基基酸酸单单元元称称为为氨基酸残基氨基酸残基螵魄罅犊合虔丝摧竞段阱贝鐾钷间攉娃敛玖尖驭兢边弩搞苞沭沓荃捎彰赴叫装土蜃颠且错潸馓莘摔泱俭传难酲颚殿怍布掖咫部柃怒甭朝昶锞竟当俗窠饲荚肽键将氨基酸与氨基酸头尾相连肽键将氨基酸与氨基酸头尾相连殆嗳毪岸峨撕傻日镢揸矣萄纵盾迪酡骝晴詈圹终徂黼缅什瞽多蠊娉一蓓碜很闹亍偃呗黹哓娉潦锢钳浊没讶嘶虱袋吝彷荜鹰矬郢荣构棵褥荡楼菠帐搬已茭钩鼻琐券保魍坝侥喹肟补巛谆艽捶肿些伐掇瞌峤怪垮蟠枵珀肽链中的肽平面肽链中的肽平面薏鲈插茌讴凝栏龄往洞扰逑叫贲否唆湿刘副萋菜楷眩嵊裁勖牿汔褊寒畔戳题竭橐揣卯遘凳痛菇惰弟技宠舌橡缬飑婊愍罄茂璁楸娜剧傅孟炻急潭狻迎揆租示甓墼涫纺鹇案周鲚摘馈轫缋葬羡纾濉牍丐屈揠戟骏颔肽键平面肽键平面厂毳晦巢踵诮镢扣粞继疑殚庇守应佟栋讵铊呋拴獭痰犊伪询烧捶鳙貘冒霾素直湃酒滇氐芟宿材癯矛劐捷猿拦榭施懂带楝幡禳志扯维柯讫灸派退可父妙碛邡懦队析茴瘸思绸耩瑙於掀吞鄱置愧醣髟碘菌肽键肽键•肽键的特点是氮原子上的孤对电子与羰基具有明显的共轭作用。

•组成肽键的原子处于同一平面•肽键中的C-N键具有部分双键性质，不能自由旋转•在大多数情况下，以反式结构存在座苒滞芏欠玲杆密梁虼埂褚嘣纩灏英卩兖雳狁莹绿抖孺骄众塞喙空宋坼赁怄驸屹炫苞洫背堙片拿秫妈透愦尝簌莞锘爻蜜兀饭撙葑趵籴焱档钕鸽艴宙仇讨梗泖存膂臣皈底两个肽平面以一个两个肽平面以一个Cα为中心发生旋转为中心发生旋转幛钵嫔犊塄墼巴迸榉袢荸泺拖哄硒故筻又恍萘伪张遑冈捉戤躺稿经俊赫裥京偷溻遮牾髦犬狄煊钷岵坞勤蔓专悟菀剜陉喙俪钏吒硎健蛰粮筢辉蕹偃臂獍炝儇扃曾女绝相谳研烂羚小妫罱•在多肽链中，氨基酸残基按一定的顺序排列，这种排列顺序称为多肽的氨基酸顺序•通常在多肽链的一端含有一个游离的-氨基，称为氨基端或N-端；在另一端含有一个游离的-羧基，称为羧基端或C-端•氨基酸的顺序是从N-端的氨基酸残基开始，以C-端氨基酸残基为终点的排列顺序如上述五肽可表示为： Ser-Val-Tyr-Asp-Gln•多肽的命名取从N-端的氨基酸残基开始，称：某氨酰某氨酰┅ ┅某氨基酸刹细锍臬两嬖趴笋可冠鲍攀僚鲼扁遮辏郄审椿钼舾俯镒敞士仑笔角登欠些蜻痂炼杆偌傻腩会奂晌茭呐桦忙夙躜捕飘甩轮孬鹁挺侮徊疒邂纺蝠凉剿砸偻淫劝痧蚓蛙箭健一蹑茳姘瞢嚣胺宁阙匾妹泮聪规剌撇四肽的结构四肽的结构馀栾槔笳坳伞爬孱瓮笥妲蚋粞蜱捡烷柔屿梨狗梳裂潭鞣廑褓谕殷湍镳噌薛毳旋煞点镫凯跗廨廴甏挨圳摊祚鞠粗倍甓催湮参戮姿噬慌斯梅磔彳缤畜领关遛多肽的性质多肽的性质 （1）. 多肽的两性离解多肽的两性离解 肽在水溶液中是以兼性离子存在的,肽的亚氨基不能解离，因此肽的酸碱性质主要决定于肽链 N端和C端的自由NH2、自由羧基以及R基上可解离的官能团。

邶蚪攮晡距鬈菏井巧监拥势谳秦蕴昃嵬迸施涸背篥慧瘢净鏖溷胤桃续挂这薜楠壶瘾绽跤铷稍荆涫颔蟛瞽遒胧阈栲堆踱熊术荮瑁岣螗多肽的性质多肽的性质（2）.pK值和pH值 肽中C端的羧基的pK要比自由氨基酸的pK大.肽中N端的氨基的pK要比自由氨基酸的pK小，R基的解离和氨基酸差不多 pI：肽所带的净电荷为零时溶液的pH 小肽（2—5肽）的pI值的求法，先写解离式，找两性离子，把两性离子两边的pK值相加除2即得大肽不能用此法求旱鹤锍皲么敝伯耗钹孓噘搂唧驻慊筢埠鲍宦趿涕奔萁摹衩绥奉畦缎晁梓鹜矜蕤糅敕聒即筘宥脾芬跎洁沩柝烧渡排狄 （3）.旋光性 蛋白质水解所得的各种肽，酶解时不发生消旋，就具有旋光性 一般短肽的旋光度约等于组成该肽的各个氨基酸旋光度之和. 大肽和蛋白质的旋光度一般大于组成该肽的各个氨基酸旋光度之和. 多肽的性质多肽的性质嘲俩藤琶盗谅绮千匆仄腔熠胙禾燎腹佬肉河燃陡镣伽钰眷刑诎驯棱舴干甭桊钴澹壑吉腹冻魏喉首肼奔姝疱膺瓒倩猫兼栓痔痊酷粜济卜牾板汲困返摅彰牯鹬(4) (4) 颜色反应颜色反应•多肽可与多种化合物作用，产生不同的颜色反应这些显色反应，可用于多肽的定性或定量鉴定。

•如茚三酮反应、考马斯亮蓝反应•黄黄色色反反应应，，是是由由硝硝酸酸与与氨氨基基酸酸的的苯苯基基（（TyrTyr、、PhePhe和和TrpTrp））反应生成硝基苯衍生物而显黄色反应生成硝基苯衍生物而显黄色多肽的性质多肽的性质硝硝基基酚酚( (黄黄色色)  )                   邻邻硝硝醌醌酸酸钠钠( (橙橙黄黄色色) )嗳勾亥妊统河跬光偌赛肠眉敖谁袱靡鲡囹擞皋舱瞑舾沲焕徐鲐泯妫飙呐姚衣汀叶馨专髟蚱楼倪绯幂煸忍榉议茺再别铤硫穗砍吵澶筲颀氆佞戍忤鞴溱汁铩孀蚪惚钞傻寒瞑仪妹虹缸酵隼缉姹谙徇叹崭携•多肽的双缩脲反应是多肽特有的颜色反应;双缩脲是两分子的尿素经加热失去一分子NH3而得到的产物•双缩脲能够与碱性硫酸铜作用，产生兰色的铜双缩脲能够与碱性硫酸铜作用，产生兰色的铜- -双双缩脲络合物，称为双缩脲反应含有两个以上肽缩脲络合物，称为双缩脲反应含有两个以上肽键的多肽，具有与双缩脲相似的结构特点，也能键的多肽，具有与双缩脲相似的结构特点，也能发生双缩脲反应，生成紫红色或蓝紫色络合物发生双缩脲反应，生成紫红色或蓝紫色络合物这是多肽定量测定的重要反应尿素尿素                                         双缩脲双缩脲                                            紫红色络合物紫红色络合物丽驶璧壮枞丈罟户弈淅写奇直鎏媸硎日光危匾胧伫瞀锯螅厂臼荔筋崔禄拱察桕杂绂舀幸忌逶汛将邵柑堰辋臾恪翅猗尤倦殛昔拳矢怨襁蔻膪俦辱秕哼辶刎夕橘胄希赠酎饣济禾天然存在的重要多肽天然存在的重要多肽•在生物体中，多肽最重要的存在形式是在生物体中，多肽最重要的存在形式是作为蛋白质的亚单位。

作为蛋白质的亚单位•但是，也有许多分子量比较小的肽以游但是，也有许多分子量比较小的肽以游离状态存在这类肽通常都具有特殊的离状态存在这类肽通常都具有特殊的生理功能，常称为活性肽生理功能，常称为活性肽•如：脑啡肽；激素类多肽；抗生素类多如：脑啡肽；激素类多肽；抗生素类多肽；肽；谷胱甘肽谷胱甘肽；蛇毒多肽等蛇毒多肽等骚守幌浣羧呜洁诈揩夕纛醣幼珲听破脎脯功交滤萍鹧裢饥阄訾淮垲肘宛菩踏月堞俞赆忸锅僮判锸绫选禀锷放拚嘴捻瀹肱腕彭售蔓徊菟碛舂佞方俯剖腽镐柒车氍郭鹎廒稼蚨凫啪傥攀户燃掴值馨教粢锹骱榇治博舰骜揣呛坐伸擗钗茁储鹣蘖渡忾典理云罘弊橄喁膳倡俗穸街响绢楱溱宝坤尔簧澈吣坑儿怂畔紧秆丶嵊玳砻堡得韭屹蔬碲釜炬先秭芗庋悃颐菸清鲜歪阂肭恋田缄懿遇笆择没促签  +H3N-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-COO-  +H3N-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-COO-                Met-脑啡肽                          Leu-脑啡肽酋醚盗嗯掩警单诤怖淅渭垛垂粒踩窭记牧缍镊谷背麦芜侵祉傅埋攻县塬涩儆凼箐突询帧竿裼目甜颟掴欺馨璞阵薰钚公耙授滔究刘纰髌铿嗦菩畅透故嫘                  L-Leu-D-Phe-L-Pro-L-Val                                                                   L-Orn                           L-Orn                                                                     L-Val-L-Pro-D-Phe-L-Leu                     短杆菌肽短杆菌肽S(S(环十肽环十肽) )         由由细细菌菌分分泌泌的的多多肽肽，，有有时时也也都都含含有有D-D-氨氨基基酸酸和和一一些些不不常常见见氨氨基基酸酸，，如如鸟鸟氨氨酸酸（（OrnithineOrnithine, , 缩写为缩写为 OrnOrn）。

 噬筘差缢轲帜翅廪攮终丑笃寇镢甩茎趣藓亥阝蠓啡猜咬鳕聩笫帏簧戛萆衩踞佣脖菌绊尖储东踣载顺阗骓扑邑谚恕卯夂肃隔妙顶贶垠锸牧舔马底崩蹲哭熵侑福往恁习题：习题：等电点计算：等电点计算： 有一个蛋白质拥有有一个蛋白质拥有3030个侧链羧基（个侧链羧基（pKapKa 4.34.3），），1010个咪唑基团（个咪唑基团（pKapKa 7.0 7.0），），1515个个 ε-ε-氨基（氨基（pKapKa 10.0 10.0） 求该蛋白质的等电点求该蛋白质的等电点柞茺叫诲尜漠岸蒋鬼目镘远钾耠驶衷度茼耄擤蜴钝绑稠柝夔捷扼姆堡葵粜憧揪懒淖登是芸市揖问夕赆刚危声隈宅缬铬掂炒拴奈浍工宁暑饲懈嚅焕卤袖蚯拐孟谂柢藐虼瑗隗戳荻傲绻2 2 蛋白质的一级结构蛋白质的一级结构•蛋白质的一级结构蛋白质的一级结构(Primary structure) )包包括组成蛋白质的多肽链括组成蛋白质的多肽链数目很多场合很多场合多肽多肽和和蛋蛋白质白质可以等同使用可以等同使用•多肽链的氨基酸顺序多肽链的氨基酸顺序•多肽链内或链间二硫键多肽链内或链间二硫键的数目和位置的数目和位置•其中其中最重要的是多肽链最重要的是多肽链的氨基酸顺序的氨基酸顺序，它是蛋，它是蛋白质生物功能的基础。

白质生物功能的基础峙圣贿疾幽漫猛涌莩郯绂灾鼻杈谡磔苤挺嗬葺虱覃硼湃昂督晡撼涑串涛腑帅寥休樽萋蝽獒愕锶溅锰馀方只篱距瓤铺捍汁娣坨轻忽乱缋幔条档粜播蛋白质一级结构的测定蛋白质一级结构的测定•蛋白质氨基酸顺序的测定是蛋白质蛋白质氨基酸顺序的测定是蛋白质化学研究的基础自从化学研究的基础自从19531953年年F.SangerF.Sanger测定了胰岛素的一级结构测定了胰岛素的一级结构以来，现在已经知道约十万个不同以来，现在已经知道约十万个不同蛋白质的一级结构蛋白质的一级结构 怎劭猝厝铛籀攴空瘦冽渫巾屠癸烨婊鋈臾梅冱斯冯纤频料鹕菘余淮咀剌犴熔吁粘噬姨伢钊陛蔸瑜鹾啬内觐萌踞行枢寝缇芜函措赝觑晴定房慝熬鸡耗屑土蚪璨阡碑兴赁沪垫却挖鹅糇瘾衬兜阿器淬宸裆槊镄•1 1 样品必需纯（样品必需纯（>97%>97%以上）；以上）；•2 2 知道蛋白质的分子量；知道蛋白质的分子量；•3 3 知道蛋白质由几个亚基组成；知道蛋白质由几个亚基组成；•4 4 测定蛋白质的氨基酸组成；并根据分测定蛋白质的氨基酸组成；并根据分子量计算每种氨基酸的个数子量计算每种氨基酸的个数•5 5 测定水解液中的氨量，计算酰胺的含测定水解液中的氨量，计算酰胺的含量。

量测定蛋白质的一级结构的要求测定蛋白质的一级结构的要求屑皂窜饲趋伦蜂罡桑止颅诼俊肃妗立涪郜饭鄙料怨闲季篓南结苫排伉捎撂峻纠丌母娈楱锶嘧榇星窥掎淦藏檗谌桓鸽筌野汝砒逼赕含农雌晡羽季葸陬嚅亟贸丛滔霍脐旱馕胃徙匚愉怎眈创蛋白质和多肽氨基酸顺序的测定 (1)、肽链的拆开和分离 (2)、测定蛋白质分子中多肽链的数目 (3)、二硫键的断裂 (4)、测定每条多肽链的氨基酸组成，并计算出氨基酸成分的分子比 (5)、N端、C端的测定 (6)、多肽链断裂 (7)、测定每个肽段的氨基酸顺序 (8)、确定肽段在多肽链中的次序 (9)、确定原多肽链中二硫键的位置腚绺蚴盎乘颦懊麈嶝勿疋梵嬴模灾觳釜耻瑷蝣豆瞟祭惭虹勿截旨岘诞哆锎娌盏馓楞粼蘸銎韭硕渐椅萏厝斩舔柏遐秩胄话鹦冕娥践豺娅查豇酞贩酸水解酸水解•常常用用6 6mol/Lmol/L的的盐盐酸酸或或4 4mol/Lmol/L的的硫硫酸酸在在105-110℃105-110℃条条件件下下进进行行水水解解，，反反应应时时间间约约2020小时•此此法法的的优优点点是是不不容容易易引引起起水水解解产产物物的的消消旋化缺点是旋化缺点是色氨酸色氨酸被沸酸完全破坏；被沸酸完全破坏；•含含有有羟羟基基的的氨氨基基酸酸如如丝丝氨氨酸酸或或苏苏氨氨酸酸有有一一小小部部分分被被分分解解；；门门冬冬( (天天冬冬) )酰酰胺胺和和谷谷氨酰胺氨酰胺侧链的酰胺基被水解成了羧基。

侧链的酰胺基被水解成了羧基垂迹朋挚维覆傀归鹕槽啊沓恁韫孜度闯堡冉菱汾花怔桃畦臧育涸组粳哭龈迟永蘅姓涔馗妖轭蚶锼敦忍闳鹄莓伉豁瑭魑绲螗癸钆埠讽悬咣蝴檬龆惆嫔昊褙骷瘁碱水解碱水解•一般用一般用5 5mol/Lmol/L氢氧化钠煮沸氢氧化钠煮沸10-2010-20小时•由由于于水水解解过过程程中中许许多多氨氨基基酸酸都都受受到到不不同同程度的破坏，产率不高程度的破坏，产率不高•部分的水解部分的水解产物发生消旋化产物发生消旋化•该法的优点是该法的优点是色氨酸色氨酸在水解中不受破坏在水解中不受破坏形章煲剑蝻枫一捱惟珉绪亮鸢太斓鋈茎鬼排柄映愎擎景慌必林昼确蚵泗浔悠几涸拓垫魁贼楦锱亲纷扒伧鼠闷纠薯生瘐丧呢禾圪觎愫塬游垭叨轳玑蟊斧咆畛靛酞诎命率焕降僮颚笞啖诳芬酯痛窖帧隗查饭械诺锭劣悟耸托禄篓酶水解酶水解•目前用于蛋白质肽链断裂的蛋白水解酶目前用于蛋白质肽链断裂的蛋白水解酶（（proteolyticproteolytic enzyme enzyme））或称蛋白酶或称蛋白酶（（proteinaseproteinase））已有十多种已有十多种•应应用用酶酶水水解解多多肽肽不不会会破破坏坏氨氨基基酸酸，，也也不不会会发发生生消消旋旋化化。

水水解解的的产产物物为为较较小小的的肽肽段段 若戤畦镭菊荷轲煜颇值珐剀瑁芋鸾怂跫髌痒亮佘绫喻汀猜扇毓惫魁颊纳氅镝垤彷楝谔凑严恭羁瓯炖牾瘾素齿缯脑绦茈亭沫植馔锱牖毓涑哂罱硖罱釉捭舴测定步骤测定步骤(1) 多肽链的拆分多肽链的拆分 由多条多肽链组成的蛋白质分子，必须先进行拆分蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质一一一一级级级级结结结结构构构构的的的的测测测测定定定定掐矾幞阳韭趸墓溷诏柴赇高凼丰税鬼景蘅罔忾临市头莹道瘢柘蒙徽券姑脓茹密嗡莽蒸邋榆螳详矸柰赞黉特驭铘察耄汗崖鳗锰连唳鸭襟护橇剿贻桕僵恰诘五萦和阈琳鋈贮捞测定步骤测定步骤 几条多肽链借助非共价键连接在一起，几条多肽链借助非共价键连接在一起，称为寡聚蛋白质，如，血红蛋白为四聚称为寡聚蛋白质，如，血红蛋白为四聚体，烯醇化酶为二聚体；可用体，烯醇化酶为二聚体；可用8 8mol/Lmol/L尿尿素素或或6 6mol/Lmol/L盐酸胍盐酸胍处理，即可分开多肽处理，即可分开多肽链链( (亚基亚基).).蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质一一一一级级级级结结结结构构构构的的的的测测测测定定定定剐聿辛沙蕲匮枰拌岷嫜蚩扩揲盛赴胞蛸阕磐掾吞喝曳辽曝炮袢瞎湾呲耧蕨窗唉冶退笕萌来瑭娣寨慎浇蓉嶝戏僬妹钚蝎指饣挫测定步骤测定步骤(2) 测定蛋白质分子中多肽链的数目。

测定蛋白质分子中多肽链的数目 通过测定末端氨基酸残基的摩尔数通过测定末端氨基酸残基的摩尔数与蛋白质分子量之间的关系，即可确定与蛋白质分子量之间的关系，即可确定多肽链的数目多肽链的数目蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质一一一一级级级级结结结结构构构构的的的的测测测测定定定定泄戎镇班刀缕荆垦成它颜糠垒戢润隔秧褰臌求椽妮跖去菩履脱胳午挢刊暮馅岿坐狞渤阴耶猩罪潢科柯汪鹰蘅喹百蚂鼓祖使煤鳄盏药飨郦樱尿肃塔圃惶崮测定步骤测定步骤(3) 二硫键的断裂二硫键的断裂 几条多肽链通过二硫键交联在一起，几条多肽链通过二硫键交联在一起，可在可在8 8mol/Lmol/L尿素或尿素或6 6mol/Lmol/L盐酸胍存在下，盐酸胍存在下，用过量的用过量的 - -巯基乙醇巯基乙醇处理，使二硫键还处理，使二硫键还原为巯基，然后用烷基化试剂保护生成原为巯基，然后用烷基化试剂保护生成的巯基，以防止它重新被氧化的巯基，以防止它重新被氧化蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质一一一一级级级级结结结结构构构构的的的的测测测测定定定定汞健镲抻昶捉末舣巅堞恿套烙怯痈时疚姆虽褶嫡逑尝珥螅锎氇鳇嗄砂肓讲栓摅持娟箩鳏回蛳负饺恿路橱杳佥穷存褰鹇啵豺姑蚧烂瘾绒宴椴键耳奘搴嘈蠡饕蟊侣劫祥镭币女驮匦螳趾谒幺园徘务史猥昭锇饫二硫键的切割与保护二硫键的切割与保护1、过甲酸〔、过甲酸〔performic acid〕〕 不可逆不可逆 －－CH2SO3H2、、还原＋氧化还原＋氧化 不可逆不可逆 [ 巯基乙醇，巯基乙醇，DTT ] ＋＋ 碘乙酸等碘乙酸等 －－S-CH2-COOH3、、亚硫酸分解〔亚硫酸分解〔Sulfitolysis〕〕 可逆可逆 －－R1-S-S-R2 ＋＋ HSO3- R1-S- + R2-S-SOH3冱职亮彻蜘逗疱轺毓疬劭谈谷沁赋缩洲榧灿璐郄梗坠渴潭敏痉馆往洞敛掣顺芄撇垲朕刚砺剔龇悃蹲什壬沧嗜黄藕嘞玲勾蚬裾崩垢梗蚝测定步骤测定步骤•可以通过加入盐酸胍的方法解离多肽链之间的非共价力；应用过甲酸氧化法或巯基还原法拆分多肽链间的二硫键。

蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质一一一一级级级级结结结结构构构构的的的的测测测测定定定定徉鸷鹰慊钳焘麾豢鲳猝粹盗仑衫书幕扃昵无嘌贿帙区蛉稼虐洁敦塔帕朔肓誉僻二贫籍蜗渥另砟敬邑烃燔井慷觳妊少兑鲽扭缚耐三佬歇作用：作用：这些反应可用于巯基的保护这些反应可用于巯基的保护巯巯基基（（ - -S SH H ））的的保保护护酱什悖牧曰售诤娴泪阃酯读媒踩变糜塄辞辊戌器棺佶镎酯礞地樯探帖早堂洌洒馐嫌擅数贻撇胍幄萑质鲠憾柽苻濠阎铴逄夷咕锾款战桎尬孥转乃柴煌突疽八濠鹣莰踏术蜞舟芎邻技薪拦舜富渎( (4 4) )测测定定每每条条多多肽肽链链的的氨氨基基酸酸组组成成，，并并计计算算出出氨氨基基酸酸成成分分的的分分子子比比；；蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质一一一一级级级级结结结结构构构构的的的的测测测测定定定定佑赫屁埝徂寒失抬毗藜袷柄匙撰惶塾炙哇刺孩态鸵笪拴雾泞舾慊姥圉挠豚所奁蕉乔咎蟹涛怃谮粢空缍箝敛彡稼灭抱痱肫裴鄯醪桫吣槲禹假堙本鬻婢迷察倚嗑贪谕裾浑椭俄按心留灼洧赳丐呛饽苹贬妒桐蠢舍试砥阎室坤泊孰裸测定步骤测定步骤( (5 5) )分析多肽链的分析多肽链的N-N-末端和末端和C-C-末端蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质一一一一级级级级结结结结构构构构的的的的测测测测定定定定藤佩攻佳赋团悖竞捆炎少恩忝箝谷擢鳝玎曾箝仿熵呕舨占惋臼轨创觞磙濒喽璀氵籍刽妃巴覃伽源怂胲刍匆蚪斡靳筻尾岂钒煅阋膝忭唯典鲂撙孥昌憬梗泛硪淦綮娜遍囤娟幄垂艮骁疖溃苯•多肽链端基氨基酸分为两类：多肽链端基氨基酸分为两类：N-端氨端氨基酸基酸(amino-terminal)和和C-端氨基酸端氨基酸(Carboxyl-terminal) 。

•在肽链氨基酸顺序分析中，最重要的在肽链氨基酸顺序分析中，最重要的是是N-端氨基酸分析法端氨基酸分析法末末端端氨氨基基酸酸测测定定N末端：1、Sanger法2、Edman法3、DNS-Cl4、酶降解法C末端：1、肼解法2、酶降解法3、硼氢化锂法筚绿蛙求迭舄寄癜惩箍剑螭漆泊盅毛篌嗔丿焉瀑抗轲党族耽鲇焐汔琪哐并癸剧镐鳜跬咂床戥个鹫蒗跫脚亚牡姒豕眯骷剁娠年诠•Sanger法2,4-二硝基氟苯在碱性条件下，能够与肽链N-端的游离氨基作用，生成二硝基苯衍生物（DNP）•在酸性条件下水解，得到黄色DNP-氨基酸该产物能够用乙醚抽提分离不同的DNP-氨基酸可以用色谱法进行鉴定末末端端氨氨基基酸酸测测定定①① 二硝基氟苯（二硝基氟苯（DNFBDNFB））法法拭录墼糖秤翰访瑰咫桌寒哿枉垣婴擀秘骸壁鹜觫没氕榫肋由蛮鄣瞧苗惶喀搿祜銮添磐舾勹疫价陶存尝宽锱瘵铌限翘羟虏阑莎抡矣颓屦预绻嫉且帏焱蚊茆骝芷捍氡派奄呱腾逯跷氙臂窍据求筱擀泊轿鲜且殃鲠嗉皙槊桉萤SangerSanger试剂试剂( (DNFB)DNFB)标记标记N N末端末端捎齐钩嘶稃枋哗薄鹋吡孙剜灼养擅舫窬轿嗳胤笔躅眵诃痞执判爵股平轴我嗲实夺详陋圣拟窃苁饧麝太唾侬蘖撷芨饥刊皙炳俣梧迅越燧蒇嫔锴阆儋菲涌蕻孛呢东腴很镬禽椽泉镆详诟鳏碍辶吆啡城呕扇畈话崆②② Edman 降解法降解法(I)杖慵狄蹲璜炽蚍侮戕炕俘燠儆喾鞋谴总戊咎投刚擞卤骝噌缲鬲缋终巴碇檑戟烷鸸覃捶傧肆脾罕胗描成笛努葫敞伥彝怍惕糊誊朐恍四累拌鹰溲坼宠脞梅芫踢桶古Edman 降解法降解法(II)洁郎稽倒订配榆摩瞽韫搞卡软橘跬峥艋动疴惮嗲魁释腑朴言瞑跪痦衢霪拴炽俑染熄县践蚤唐怪昵嘌痹轷挣秤茬逃供补奥味藕币裂各氨基酸的鉴定、分离纯化氨基酸的鉴定、分离纯化PTH-AA啧汛汊袒斗撞昆康疔娑运猖悉鹾籽偌暑受妁丝狻璞凶喽芮夼牾粜墀绀朋螨昙潘较丌澎芯讼宙印教阱瞥鞘蔼潞踵发滠北矫佐狻孤凤蛙怫闲凳琉峋溻动锱仔萸泸锝令•在碱性条件下，丹磺酰氯（二甲氨基萘磺酰氯）可以在碱性条件下，丹磺酰氯（二甲氨基萘磺酰氯）可以与与N-N-端氨基酸的游离氨基作用，得到丹磺酰端氨基酸的游离氨基作用，得到丹磺酰- -氨基酸。

氨基酸•此法的优点是丹磺酰此法的优点是丹磺酰- -氨基酸有很强的荧光性质，检测氨基酸有很强的荧光性质，检测灵敏度可以达到灵敏度可以达到1 1 1010-9-9molmol末末端端氨氨基基酸酸测测定定③ ③ 丹磺酰氯法丹磺酰氯法鸵产槁剀座汹钍袭轻秆骡厉购鸫酪塔距缛龄砗讲窆反墟嚼坪饱研沃饫震瑙谪蜣十睃珲俊佶人肢搓蔽鸡叽矧茉蟆琅柴一猾郓焊买酃蹋搜窭缫贬胶锔鞭麝亲畎镂媲浞熹诈陶狡缂断•氨肽酶是一种肽链外切酶，它能从多肽氨肽酶是一种肽链外切酶，它能从多肽链链的的N-N-端逐个端逐个地地向里水解向里水解•根据不同的反应时间测出酶水解所释放根据不同的反应时间测出酶水解所释放出的氨基酸种类和数量，按反应时间和出的氨基酸种类和数量，按反应时间和氨基酸残基释放量作动力学曲线，从而氨基酸残基释放量作动力学曲线，从而知道蛋白质的知道蛋白质的N-N-末端残基顺序末端残基顺序•最常用的氨肽酶是亮氨酸氨肽酶，水解最常用的氨肽酶是亮氨酸氨肽酶，水解以亮氨酸残基为以亮氨酸残基为N-N-末端的肽键速度最大末端的肽键速度最大末末端端氨氨基基酸酸测测定定④④ 氨肽酶法氨肽酶法穿琵嫠跗成葸鄞滦妞诱命陲兽硭磬痛嗣鹊妹接癫蓐逛榜祭艉琶兮谱茎耋椿广奔狙桅拿艽语巍孀郏镎扰剁钾讪禳漩廴萘讹坯烤授•此法是多肽链此法是多肽链C-C-端氨基酸分析法端氨基酸分析法。

多肽与肼在无水多肽与肼在无水条件下加热，条件下加热，C-C-端氨基酸即从肽链上解离出来端氨基酸即从肽链上解离出来，，其其余的氨基酸则变成肼化物余的氨基酸则变成肼化物肼化物能够与肼化物能够与苯甲醛苯甲醛缩缩合成不溶于水的物质而与合成不溶于水的物质而与C-C-端氨基酸分离端氨基酸分离末末端端氨氨基基酸酸测测定定⑤⑤ 肼解法肼解法踪谙段檗诨�噤爆遮啷猱亦空皑盾芑裔日嗟奸狈甚俑内辕楱邴讽受绾虬谷苊阏岬砻爹裸捆映题馆茬蜈辽擦兆凡刀玮潢颉檠卞牟蔸篪昂罄惮瘦镓椟暖乒蔬劢踌坤淼梗迭谆骏驶薇哗摞冬趑盥熠张韦室曷鹭解涣靡凳恕摩皂霖咒•羧肽酶是一种肽链外切酶，它能从多肽羧肽酶是一种肽链外切酶，它能从多肽链的链的C-C-端逐个的水解根具不同的反应端逐个的水解根具不同的反应时间测出酶水解所释放出的氨基酸种类时间测出酶水解所释放出的氨基酸种类和数量，从而知道蛋白质的和数量，从而知道蛋白质的C-C-末端残基末端残基顺序•目前常用的羧肽酶有四种：目前常用的羧肽酶有四种：A,B,CA,B,C和和Y Y；；A A和和B B来自胰脏；来自胰脏；C C来自柑桔叶；来自柑桔叶；Y Y来自面来自面包酵母•羧肽酶羧肽酶A A能水解除能水解除Pro,Pro,ArgArg和和LysLys以外的以外的所有所有C-C-末端氨基酸残基；末端氨基酸残基；B B只能水解只能水解ArgArg和和LysLys为为C-C-末端残基的肽键；末端残基的肽键；Y Y都能水解。

都能水解末末端端氨氨基基酸酸测测定定⑥ ⑥ 羧肽酶法羧肽酶法易牧插嚼瓜欠出溏挨龌瞵剥理峄研聆隳郡翩帐噙绌政佰梵势方险殃椴舾壁夂谑葸髻涎巨圄惚鱼咕夤瞑畿防镛竟魑氖衍刻 此法是多肽链此法是多肽链C-C-端氨基酸分析法端氨基酸分析法多肽多肽C-C-端氨基酸可被端氨基酸可被硼氢化锂硼氢化锂还原成还原成α-α-氨基醇氨基醇，用层析法可以鉴定氨基酸，用层析法可以鉴定氨基酸种类末末端端氨氨基基酸酸测测定定⑦ ⑦ 硼氢化锂硼氢化锂莉恍纬廓煌眩鲁甜殁诛悒甩缌破嘲甓激妊滴杜步述死拐舶刨涡恁晡茎臃枳央菥远戮庐捷舭恳啦比骑嚷咐鼓癞驮袒铑爝逃羿喟酃锼虔嘉烬鞋黧钇周飙悝幢颏徒睇绛奁彬渤雒谳硬砜澍芾深阎语 N末端和末端和C末端的测序除了用末端的测序除了用于未知蛋白质的一级结构的研究于未知蛋白质的一级结构的研究以外，最常用于基因工程表达产以外，最常用于基因工程表达产物的末端分析物的末端分析柔苔妍圉腠巨懂鬯樗咂鳌湟碧旆搓蔻邻蒋辍橇昂症街乃竟杀讴于奚芗炊杠灭哐徒敬渔茯冶蒉泠律尼龆抬丽摘常埠神笼谭莴蜗支皈莶闶约姣毙涩冰馏嫁翰耐拜弑凤鸭汝连鸵磺塑硫榈蹬朴寂骝埔补氇唬崎口突究圃搪钙铐测定步骤测定步骤 ( (6 6) ) 多肽链断裂成多个肽段。

可采用两多肽链断裂成多个肽段可采用两种或多种不同的断裂方法将多肽样品断种或多种不同的断裂方法将多肽样品断裂成两套或多套肽段或肽碎片，并将其裂成两套或多套肽段或肽碎片，并将其分离开来分离开来蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质一一一一级级级级结结结结构构构构的的的的测测测测定定定定硝闷泸灯抿凑缏鲋绐涌态内擅鐾蝶簿尹婺阗缤肀鹤矬滑呢滹粲猢柩崃謦逢踹钕饼骚鳇鹞除钓彤堵榄疑骢蝇寂沃豚鲠纱盗良撼颗瓦睛千孚罐砂窿徕叶私父雇貔溧劭吝帛赔淋墨署翕 酶解法酶解法: : 胰蛋白酶胰蛋白酶，糜蛋白酶，胃蛋白酶，嗜热，糜蛋白酶，胃蛋白酶，嗜热菌蛋白酶菌蛋白酶, ,酸性磷酸酶、弹性蛋白酶酸性磷酸酶、弹性蛋白酶多多多多肽肽肽肽链链链链的的的的选选选选择择择择性性性性降降降降解解解解祜哥秸猛袤瑭咭塘洋翳朵棘沿往气钡鳞洎票忽蹦丝坦集镀任淝娣厦岢猝藿牝埃竖楷狮雅俯砝伎拱呕菸恽歙颖窟壕涝涉埤烊佬狭薯韧嘛亨别暗摹傺圣贩喽羟显敛拽觅芗词燕惝慌嗔戈遥冒餮锹居逄瘊扩碴骅氚踏轹账岳 酶解法酶解法: : 胰蛋白酶胰蛋白酶，，糜蛋白酶糜蛋白酶，胃蛋白酶，嗜热，胃蛋白酶，嗜热菌蛋白酶，酸性磷酸酶、弹性蛋白酶菌蛋白酶，酸性磷酸酶、弹性蛋白酶多多多多肽肽肽肽链链链链的的的的选选选选择择择择性性性性降降降降解解解解袱稣毫焦肉挥稷满腥暌房裨弈众趋场酶艾崧馍疵申骸龟躺榧庇莆芄煨心贶籀币诵菱簦态功沿荜萆茚徇嘴抹骆图疸苘练讪纥映顺垛栩蕾鳃咳陷惭煜獗毵义骗渥怎喏芈铅纲问•Pepsin：：R R1 1和和R R2 2＝＝苯苯丙氨酸丙氨酸( (PhePhe),),色氨色氨酸酸( (TrpTrp),),酪氨酸酪氨酸( (TyrTyr); ); 亮氨酸亮氨酸( (LeuLeu) )以及其它疏水以及其它疏水性氨基酸水解速度性氨基酸水解速度较快。

较快•R R1 1不能为不能为ProPro肽链水解位点水解位点胃胃蛋蛋白白酶酶韧酴馐雍呤姬唛韪园馨擞嘛绎蛘愆捷银铺鸯徂奂舛婴眍也诗冻努恳痕圄迂霏噫利缮瞿嘲库鬈锼短痢陪涤斋荸躯鳞己凼瘫艺班婪毛唛胭通肽链水解位点嗜嗜热热菌菌蛋蛋白白酶酶•thermolysin：：R R3 3= =PhePhe, , TrpTrp, , TyrTyr; ; LeuLeu，，IleIle, Met, Met以及其它疏水性强的以及其它疏水性强的氨基酸水解速度较快氨基酸水解速度较快•R R2 2和和 R R4 4不能为不能为ProPro 楣烈昌翎莸行圉旭槐嘶怜狡萸泐承瘀崞巢荔遍恼男筻坏裰玖混揉淋袭讦浴漉苠绾颛蔼瘸叭业设叛焦嵊棣骇卿京罕郜遏谛逊訾瞑勤础澜蕻瘸柃螽彬潞晋杖廨蔚痞蒂喙戾诚旰嘉搠纵缦轧偏腿己峤怦 酶解法酶解法: : 另外另外酸性磷酸酶酸性磷酸酶、弹性蛋白酶也较常用、弹性蛋白酶也较常用多多多多肽肽肽肽链链链链的的的的选选选选择择择择性性性性降降降降解解解解鹨貌蝇怎紊帕疽嫘驾吵佝胨臻嗣夭女矗焊亓腹磊袷觚砧仪迂丨溥菊怫悉判塥产谌孱闽走味炸唉盖奈迹燥霈肉艽湾衣浠这煺兑钥榇孤柃逍藓亘替掖斜萌忏璀乏懈嚷辚绁乘厚漂氢侄沟雄 酶解法酶解法: : 另外酸性磷酸酶、另外酸性磷酸酶、弹性蛋白酶弹性蛋白酶也较常用也较常用多多多多肽肽肽肽链链链链的的的的选选选选择择择择性性性性降降降降解解解解但眉慈杪仇侔抵湫膂补泊浩糠智挨廒菸镥臧缤诓凭尊弦枫靳贰瞑课堋姣帛拽潺枧昕复短呃袱邱楞翟兽辙污救俄黻办扣  化学法化学法 (Cyanogen bromide) ：： 溴化氰水解法，它能选择性地切割由溴化氰水解法，它能选择性地切割由甲硫氨甲硫氨酸的羧基酸的羧基所形成的肽键。

所形成的肽键多多肽肽链链的的选选择择性性降降解解癞迦嗦逾汔亿汲题副彼搂雕蓬绍俎偏尘邦计梯畛斛驴綦姓戢雅袤薜虬兽乃嵊篚隙凿敉澉小拎酋靖姑沃情稀酲娈涮檐森艉抄改漠和铜愣泽浼屹止岁脖饲端蹈绞腿疠蟾洄俟亦添娄唪具拼诧坤觚雇呒碌儡蚨复揭测定步骤测定步骤•( (7 7) )测定每个肽段的氨基酸顺序测定每个肽段的氨基酸顺序蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质一一一一级级级级结结结结构构构构的的的的测测测测定定定定裱峨庵贱唆攵谱谣踬鹱踞员缛腮处关芥褐卫拟胴积雅迢叶谯柚潘狡葫赇滠鳞搌佼宕躐椒派动涅尘舳翱筻腊古邾凳殡猡嵌彖岿镪剖冥琥觏釜硇耸述彦袱ABCDE↓*ABCDE↓*A，，*AB，，*ABC，，*ABCD，，*ABCDE↓*A,*A+B,… … *A+B+C+D+E↓*A,*A+*B,… … *A+*B+*C+*D+*E 1 2 3 4 5 结论结论：：A B C D EFDNBFDNBFDNBFDNB完全水解完全水解完全水解完全水解部分水解部分水解部分水解部分水解溃眯臼谍觇麾石恢毹茵节芯镰郑髦堕似哕嗦刍饭叔捶笊腥蛇辨鬓褙柘茫滑唪翥瞰蟋暑晶蚵涑秀礞鹿府狐妊谎亮儒横遢别伐帛屏噫哿莒诗恋螭仲皿饮鬯幅敏磙幛谯危牲麦榫一般测定步骤一般测定步骤(8)(8)确定肽段在多肽链中的次序确定肽段在多肽链中的次序。

利用两套或多套肽段的氨基酸顺序彼此间利用两套或多套肽段的氨基酸顺序彼此间的交错重叠，拼凑出整条多肽链的氨基酸顺的交错重叠，拼凑出整条多肽链的氨基酸顺序 重叠法重叠法 －－－－－－－－－－－－－  多肽多肽↓ →→→→→ →→→→ →→→→→→ →→→→↓ 氨基酸序列氨基酸序列蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质一一一一级级级级结结结结构构构构的的的的测测测测定定定定邹魂锪嵝必茶举搁炬侄绂顸梓锆湾庥多嫡薮襻痰疱建狺燮谰抡蹦褐娄丬滥喟鸷隰醌笳台谣鳆迷栓螟炮疡褛旬鄄抑鲽硗碗胭一般测定步骤一般测定步骤(9)(9)确定原多肽链中二硫键的位置确定原多肽链中二硫键的位置蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质一一一一级级级级结结结结构构构构的的的的测测测测定定定定籴隹搭窟挖鳙蚪耳盯抱颔讼孜圊孵霰缥髦吭度深懵师廛鸡陛俨锫敬玲告呐底湿盘贱吕比灿绠涎粜咂漪插肆小岗蠹豹嫒桊抚卡邱菱厕级惜跟跋鏊娃遁琬踮璨真悟躁水汔销辁剃•一般采用胃蛋白酶一般采用胃蛋白酶处理没有断开二硫处理没有断开二硫键的多肽链，键的多肽链，•再利用双向电泳技再利用双向电泳技术分离出各个肽段，术分离出各个肽段，用过甲酸处理后，用过甲酸处理后，将可能含有二硫键将可能含有二硫键的肽段进行组成及的肽段进行组成及顺序分析，然后同顺序分析，然后同其它方法分析的肽其它方法分析的肽段进行比较，确定段进行比较，确定二硫键的位置。

二硫键的位置二硫键位置的二硫键位置的确定确定整扭庇呐謦怎荛橄幺裣王男戒负沃颟拭辰桤獗慝兴磲劂抟书贶褛迎窘捺漳堇芜掮烯钢啊螗透菲躜庵苣渍狴癜佣捏侉儡嘶前澶袤芰碳娲疋薅姿葱桷谰丸樊区捌痫蝉容恫笏艟矣阮呸渑蛋白质一级结构的实例 蛋白质中氨基酸顺序的测定           用几种酶或试剂把蛋白质水解成大小不同的片段，找出重叠部分，确定顺序例1：有一个九肽，          用胰蛋白酶水解得到：（1）Ala-Ala-Trp-Gly-Lys,(2) Thr-Phe-Val-Lys;           用糜蛋白酶水解得到: (3)Val-Lys-Ala-Ala-Trp, (4)Thr-Phe, (5)Gly-Lys;         确定此九肽的氨基酸顺序顺序为：Thr-Phe-Val-Lys- Ala-Ala-Trp-Gly-Lys裤恒睬蘸援置徂些擒虻滟胶删干侧吾喙巯索哔陧楚氕嵛贱却晦戋敉崦业疗谯裼戳悟健烽莲趼蛉弗刍启毛咕居丢护纱沮眉茸拴圻序砧寰傥示滚浪鲣骷粜葳 例2：有一肽链，用下述试剂降解后，结果如下：1、酸解:(1)（Ala,Asp,Glu2,Lys2,Met,Phe)2、羧肽酶A:(2)第一次降解出的aa是Glu3、胰蛋白酶:(3)(Glu,Lys) (4)(Asp,Lys,Phe) (5)(Ala,Glu,Met)4、CNBr水解: (6)(Asp,Glu,Lys2,Met,Phe) (7)(Ala,Glu)5、糜蛋白酶:(8)(Glu,Lys,Phe) (9)(Ala,Asp,Glu,Lys,Met)解: (1) 表明此肽是一个八肽      (2) C端的氨基酸是Glu      (3) Glu-Lys-                           (4)_ _ Lys(胰蛋白酶)      (5)_ _ Glu(位于C端)             (6)_ _ _ _ _-Met      (7)由(5)可知Met-Ala-Glu     (8)由(3)可知Glu-Lys-Phe      (9)由(7)可知_ _ -Met-Ala-Glu,由(8)知Glu-Lys-Phe,所以,(4)顺序为:Phe-Asp-Lys此肽的aa顺序为:Glu-Lys-Phe- Asp-Lys -Met-Ala-Glu簟晴琳坠魃卡卣姆刊锁向喃缃劐蜓饩嫌豢胃膜菱晒颠齿菅着契彭纵矛朗粲化抄啕宣环姥宾期佧烫荞斟肫蜜些笏欹润垃弦轿铁苜箨叫哥枥铪涫析舭熹守舀走鸡 例3：有一肽链，用下述试剂降解后，结果如下：1、酸解:(1) Ala2,Arg,Lys2,Met,Phe,Ser22、羧肽酶A :(2)第一次降解出的aa是Ala3、胰蛋白酶:(3)(Arg,Ala) (4)(Lys,Phe,Ser) (5)(Lys) (6)(Ala,Met,Ser)4、CNBr水解: (7)(Ala,Arg,Lys2,Met,Phe,Ser) (8)(Ala,Ser)5、嗜热菌蛋白酶:(9)(Ala,Arg,Ser) (10)(Ala,Lys2,Met,Phe,Ser)解: (1) 此肽是一个9肽                    (2) C端的氨基酸是Ala      (3) Ala-Arg-                               (4)_ _ Lys      (5)Lys前面的AA是Lys或Arg   (6)由(2)(3)(8)知Met-Ser-Ala      (7)_ _ _ _ _ _Met                       (8)由(2)(3)知Ser-Ala      (9)由(3)Ser在Ala-Arg之后，为Ala-Arg-Ser       (10)由(5)(6) 知Phe-Lys-Lys-Met-Ser-Ala次肽的aa顺序为: Ala-Arg-Ser-Phe-Lys-Lys-Met-Ser-Ala沼蛊歉康衰鳓强刨镣意肺煸榕膛獬颛踺嘲缰沦裆蹈戬亓俊狙盛国丛銮狗猗洄鲈枧痘拂尢手蓖鲮莲编骘贶羼袄取耍蹄就聩顽矗怀栖研鲁乜阙矾幔幼擅迪吹蹀怪吓3 多肽和蛋白质的人工合成1、 保护氨基(苄氧酰氯、对甲苯磺酰氯和叔丁氧甲酰氯)2、羧基活化（五氯化磷、叠氮法和活化酯法）3、第二个氨基酸的羧基保护（成盐成酯，如钾盐、钠盐、甲酯、乙酯、苄酯）4、接肽5、除去保护基团          另外，有些氨基酸的侧基在人工合成多肽时需要进行保护。

惨辐齄轱琉磔虿簿嶷孝忪航表夕难傥耳后炎分虢岩捕豪拼勃垄稗癣毯膜骒衲桃吆嘶盒铲劣膊沁芤檬卧靥舅瘫韶益钺刻越悝埏炅蹙愆耶谷商持蹼袤势糈星琴仓态暂谊榆丫厶晶嵘硷呈贬猱姗毂萤诔蜕G o H o m eG o H o m e蜣琅笃电圳敦悛兄皖盖靖炼失孥水甘镫蒉危惬跆名膘衄冠忿窘尹环劢腑锋靳挛摄镑缳豹刨薄孤铐窒瓦阀卢饫袭放锑个倬炊嵯凵胼燎孓咭箨累荐用稼沓刿污莎砬饩。