革兰氏染色液配制.doc

革兰氏染色液组成规格（10ml）规格（100ml）规格（500ml）结晶紫10ml100ml500ml碘液10ml100ml500ml95%酒精10ml100ml500ml蕃红10ml100ml500ml 保质期：2-8度一年.革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，媒染剂碘液进入菌体后与结晶紫结合，革兰氏阳性菌对碘与结晶紫摄取量多且牢固，不易被酒精脱色革兰氏阴性菌对碘与结晶紫摄取量少，不牢固，易被酒精脱色为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红进行复染阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色 操作步骤：1、标本处理：（1）.有菌部位的标本，如痰液、粪便、各种拭子、创面等可直接涂片2）.无菌部位的标本，如脑脊液、胸水、腹水、胆汁、尿液、关节液等，应取适量标本（最高可达5-7ml）,经3000rpm 离心10min.，取沉渣涂片染色2、涂片制作：菌液涂片时，用接种环沾取菌液点在载玻片上，标本可直接在玻片上涂布；菌落涂片时，先取生理盐水一滴，置玻片上，用接种针挑取菌落在盐水中涂布制作的涂片应自然干燥，并经火焰固定，固定的温度不宜过高，以玻片背面接触手背不烫为准，否则可能使细菌形态改变。

将固定后的涂片进行染色3、染色方法：革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌；而脱色不够时，阴性菌可被误染为阳性菌此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都可能会呈阴性反应1）.加上结晶紫后，染色1分钟，水洗2）.加上碘液后染色1分钟，水洗3）.加上95%酒精,摇动玻片,根据涂片厚度,脱色约30-60秒，水洗,吸去水分4）.加上蕃红后，染色1分钟，水洗5）.吸干或在空气中凉干后，油镜镜检4．结果观察：紫色为革兰氏阳性，红色为革兰氏阴性注意事项：1．标本涂片不能太厚，严格按操作要求进行2．玻片通过火焰温度不能太高3．若涂片较厚，应延长脱色时间，直至不再出现紫色为止4．碘液变透明，则不能使用5.水洗时动作要轻柔,沿载玻片对角线方向用洗瓶冲洗,以免把菌体冲掉  革兰氏染色液如果用量少，买现成的比较话算，如果用量大，自己配起来也溶液，就是试剂种类多了点其配制方法如下：(1)结晶紫(crystal violet)液：结晶紫乙醇饱和液(结晶紫2g溶于20mL95%乙醇中)20mL，1%草酸铵水溶液80mL 将两液混匀置24h后过滤即成。

2)卢戈(Lugol)氏碘液：碘0.33g，碘化钾0.66g，蒸馏水100mL先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，然后加入碘使之完全溶解，再加蒸馏水至100mL即成配成后贮于棕色瓶内备用，如变为黄色即不能使用3)95%乙醇：用于脱色，脱色后可选用以下(4)或(5)的其中一项复染即可4)番红溶液：番红O(safranine，又称沙黄O)2.5g, 95%乙醇100mL，溶解后可贮存于密闭的棕色瓶中，用时取20mL与80mL蒸馏水混匀即可。