比色法测定可溶性糖、果胶、半纤维素、纤维素含量.docx

比色法测定可溶性糖、果胶、半纤维素、纤维素含量比色法测定可溶性糖、果胶、半纤维素、纤维素含量标准液配制1、 1.00mg/mL葡萄糖标准液：秤取干燥至恒重的葡萄糖100mg , 加水溶解定容至100mL，混匀2、 1.00mg/mL木糖标准液：秤取干燥至恒重的木糖100mg，加 水溶解定容至100mL，混匀3、 1.00mg/mL 半乳糖醛酸标准液：秤取干燥至恒重的半乳糖醛 酸100mg，加水溶解定容至100mL，混匀试剂配制：1、 0.5M 磷酸 buffer(pH7):7.01g K2HPO4・3H2O、2.61g KH2PO4溶于100mL蒸馏水2、 0.2%蔥酮试剂：0.2g蔥酮溶于100mL浓硫酸3、 A试剂：6g苔黑酚(6.87g C7H8O2・H2O )溶于100mL无 水乙醇B 试剂：0.1g FeCI3 (0.17g FeCI3・6H2O )溶于 100mL 37% 浓 盐酸4 、 四 硼 酸 钠 / 硫 酸 溶 液 ： 0.5g Na2B4O7 溶 ( 0.95g Na2B4O7・1OH2O)于 100mL 浓硫酸5、 1.5mg/mL间羟基联苯溶液：0.15g间羟基联苯(3- phenyIphenol)溶于 100mL 5mg/mL NaOH。

6、 氯仿-甲醇(1:1,v/v)7、 DMSO-H2O(9：1，v/v)操作步骤样品65°C烘干3天，打碎1、磷酸buffer提取可溶性糖(研磨)(1)将已过 40 目筛的样品在 50°C 条件下烘干混匀，平行称 取6份O.IOOOg (左右)干重样品于15 ml离心管中2 )加入 5 ml pH=7 的 0.5M 磷酸 buffer ,50°C 摇 2 h, 2100 g 离心 10 min,3 )收集上清于50 ml离心管中沉淀再用5 ml buffer洗2次， 5 ml蒸馏水洗2次收集所有上清于50 ml离心管中，定容测定C5、 C62、 氯仿-甲醇(Chloroform-methanol)提取脂类(1) 于沉淀中加入5 ml氯仿-甲醇(1:1 v/v),用封口膜密封， 在摇床中40°C( 150转)振荡1 h,o(2) 离心(4000rpm 10min),去掉上清液于沉淀中加入5 ml 甲醇洗1次.，再用5 ml丙酮洗1次，再用5 ml蒸馏水洗1次，去掉 上清液3、 DMSO提取淀粉(1) 于沉淀中加入5 ml DMSO-H2O (9:1 v/v),用封口膜密 封，vortexing 3 min,在摇床中(100转)轻轻振荡过夜。

2) 离心( 4000rpm 10min), 去掉上清液，沉淀用 5 ml DMSO-H2O洗2次，再用5 ml蒸馏水洗3次4、 草酸铵提取果胶质(1)于沉淀中加入5 ml 0.5%草酸铵，在沸水中加热1h,每隔10 min摇匀，以免溶液表面的堆集2 )沉淀(4000rpm 10min )再用5 ml 0.5%草酸铵洗1次,5 ml蒸馏水洗2次，收集所有上清，定容，测定C5、C6o5、 4M KOH提取半纤维素(1)于沉淀中加入5 ml 4M KOH (内含1 mg/ml的NaHB4 ), 在室温下提取1 h,在这期间每隔10 min轻轻摇动2 )离心(4000rpm 10min ),沉淀再用 5 ml 4M KOH 洗 1 次， 5 ml蒸馏水洗2次，收集所有上清，定容，测定C5、C6o6、 乙酸-硝酸-水提取半纤维素于沉淀中加入5mL乙酸-硝酸-水(8:1:2 , v/v/v )，沸水浴1h (每10min涡旋一次)，离心(4000rpm 5min )，沉淀再用5mL ddH2O洗2次，去掉所有上清7、 蒽酮法测纤维素在纤维素沉淀中加入4mL 67%硫酸，涡旋，25°C摇床150rpm/_|UJl 吏W业-|UJT/-|UJ8-0/_|UJ9,0/_|UJy0/_|UJ乙0 滥昭B呈 z 1^001 吏场丰W翱建聊lUJO'Ol 型傅徑趨翅ITS耒1UJ/6UJ00-1男闿第叩致毀翅翅ITte耒（I） 舌郦翅翅黯、£。

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再加入 100uL 1.5mg/mL间羟基联苯溶液，混匀，5min后520nm再读一次，吸光 度的增加表示糖醛酸的含量2）果胶提取液及空白对照（空白对照为提取液）摇匀后取1mL 比色。