（医学论文）医学论文发表苦木成分分析及质量评价初步研究.doc

医学论文发表苦木成分分析及质量评价初步研究苦木为我国南方地区常用中药，为苦木科苦树属植物Picrasmaquassioides (D.Don) Benn.的干燥枝和叶，性寒，味苦，有清热解毒，祛湿的功效，用于风热感冒，咽喉肿痛，湿热泻痢, 湿疹，疮疳，蛇虫咬伤［1］化学成分研究表明，苦木中主要含 有生物碱类，内酯类，黄酮类等化学成分［2・6］,其中生物碱类成 分主要为铁屎米・6■酮型及B ■咔巴咻型［摘要］建立RP-HPLC同时测定苦木中4个生物碱与1个黄酮成分含量的方法，并进行多批次药材成分分析，为苦木质量评 价提供依据采用KromasilC18色谱柱(4・6ininX250iniTb 5 U m),流动相为乙ffi-0.1%磷酸，梯度洗脱，流速LOmL-min-L检测波长254nmo 4个生物碱苦木碱L,苦木碱B,苦木碱F,苦木碱D和黄酮高丽槐素的标准曲线及线性范围依次为Y=6525・6X+37・25(0.009 〜1.780 U g , r=0.9968 ),Y=3662・3X+41・55(0.005 〜0.920 U g , r=0.9995 ),Y=3763・1X+146・87(0.015 〜3.060 ix g , r=0.9990 ),Y=2174・lX+21・52(0・003〜0.620 u g, r=0.9995), Y=276・25X+7・65(0.010〜1.96011 g, r=0.9989),平均加样回收率在 98.02%〜101.8%, RSD%在1.2%〜2.8%,重复性及精密度良好。

经过系统的方法学考察，该法简便，准确，可用于苦木药材的质量分析及控制[关键词I医学论文发表，苦木』■咔巴啦类生物碱，铁屎米酮类生物碱二氢异黄酮,RP-HPLC《中国药典》2010年版（一部）收载苦木的质量标准为性状鉴别，显微鉴别及生物碱薄层色谱鉴别，无含量测定项苦木 及含苦木制剂的质量分析报道多为HPLC测定其中铁屎米酮型 生物碱的含*[7-10],而对B •咔巴啦型生物碱及黄酮类成分的质 量控制尚鲜见报道为有效控制苦木质量提供可靠的方法，本研 究建立RP-HPLC同时测定苦木中2类生物碱（B ■咔巴咻型生 物碱，包括苦木碱L,苦木碱B；铁屎米・6■酮型生物碱，包括苦 木碱F,苦木碱D）及黄酮类（高丽槐素）含量，并进行多批次 样品中上述成分含量测定，以期为苦木药材及其制剂的质量控制 标准的再提高提供可资借鉴的基础研究资料1材料大连依利特P230高效液相色谱仪，配置紫外检测器及EC2000色谱工作站（大连伊利特分析仪器有限公司）；AT-330色谱柱恒温箱（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；Sartorius电子 天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）液相用乙睛为色谱纯（美国Honeywell）,水为超纯水，其他试剂均为国产分析纯（汕 头市光华化学厂有限公司）。

苦木碱 L (1-hydroxymethyl- 0 -carboline^ 1),苦木碱 B (1 -methoxicabony- B -carboline , 2 ),苦木碱 F(4-methoxy-5-hydroxy-canthin-6-one, 3),苦木碱 D ( 4 , 5-dimethoxy-canthin-6-one^ 4),高丽槐素(maackiain，5)均 为自制，经光谱学鉴定结构，色谱法检测其纯度均为98%以上苦木测试样品共10批，经广州中医药大学药用植物学教研室潘超美教授鉴定为苦木科苦树属植物苦木P.quassioides的干 燥枝和叶，凭证标本现保存于广州中医药大学临床药理研究所2方法与结果2.1色谱条件及系统适应性KromasiIC18色谱柱（4.6mmX250mm, 5um）;流动相为乙If （A） -0.1%磷酸（B）,梯度洗脱(0〜22min, 18%〜25%A； 22〜30min, 25%〜40%A； 30〜 60min, 40%〜45%A)；流速 1 .OmL-min-l；检测波长 254nm对照品和样品进样量均为15PL,色谱图见图1理论塔板数苦 木碱L和B不低于8000,苦木碱F和苦木碱D不低于1万，高 丽槐素不低于5000o2.2对照品溶液的制备精密称取对照品1〜5各适量，用甲醇充分溶解并定容，即得混合对照品储备液，其中1〜5的质量浓度分别为 88・& 46.0, 145.2, 31.2, 98.0mg-L-lo2.3苦木供试品溶液的制备取干燥至恒重的苦木粉末约l.Og,精密称定，加95%乙醇50mL,超声提取2次，每次15min,提取液过滤，滤液减压回收溶剂，残渣用甲醇溶解并定容至25mL,摇匀，进样前过0.45P m微孔滤膜。

2.4线性关系考察分别精密吸取混合对照品溶液0.1, L 5,10, 15, 20 UU进样测定，以峰面积积分值(Y)对进样质量(X)进行线性回归，得回归方程，结果见表12.5精密度试验精密吸取混合对照品溶液连续进样5次，5个目标成分的峰面积RSD (n=5)在0.7%〜1.2%,表明仪器精密度良好2.6稳定性试验精密吸取苦木供试品溶液，分别于0, 2, 4,8, 18, 24h依次进样，5个成分峰面积的RSD (n=8)在1.8%〜 2.8%,表明供试品在24h内稳定2.7重复性试验取同一批次样品6份，制备供试品溶液，测定5个化合物的含量，RSD （n=6）在1.6%〜2.3%,表明该方法重复性良好2.8加样回收率称取已知含量的同一批样品分别加入5个对品适量，制备供试品溶液，进样测定，见表22・9样品测定取10批次苦木样品，制备供试品溶液，进样测 定，每批样品平行制备3份，每份进样3次，见表33讨论3・1色谱条件优选比较了甲醇冰，乙睛■水，乙＞0.1%冰醋酸，乙＞0.1%三氯乙酸，乙ffi-0.1%磷酸等溶剂系统，以乙睛■0.1%磷酸溶液进行梯度洗脱时，各待测成分的分离度好3.2供试品溶液制备方法的优选以从苦木中分离得到的4个生物碱及1个黄酮成分含量为指标，比较了不同提取方法（超声 波萃取，热回流，索式提取法），不同提取溶媒种类（95%, 80%, 70%, 50%乙醇），不同提取溶媒用量（10, 20, 30, 50, 60,80倍量力 提取时间（15, 30, 40, 60min）,提取次数（1, 2, 3次），确定了 2.3所述供试品制备方法。

3.3苦木药材的质量评价迄今为止，苦木药材质量评价尚缺 乏有效的方法，2010年版《中国药典》苦木质量标准无专属成 分含量测定及限度，有学者采用HPLC测定苦木中铁屎米・6■酮型生物碱的含量，但未见B ■咔巴咻型及其他成分含量测定的报 道本文釆用RP-HPLC同时测定10批苦木样品中4个生物碱 及1个二氢异黄酮的含量，结果5个指标成分的含量范围分别为0・20〜0.34mg-g-l (1), 0・26〜0.45mg-g-l (2), 3・31 〜3.86mg-g-1 (3)，0・18〜0.52mgBg-l (4)和 2.64〜3.98mg-g-l (5)其中2个B ■咔巴啦型生物碱的总量平均值为0.61mg-g-l, 2个铁屎米-6■酮型生物碱的总量平均值为3.98mg-g-lo不同产地及釆 收时间的样品含量差异较小，初步推断该药材质量较稳定，尚需 大样本样品验证根据本实验样品测定结果建议苦木药材的质量控制标准中增加铁屎米・6•酮型生物碱即苦木碱F的含量测定并制定其含量 限度；增加B ■咔巴咻型生物碱及二氢异黄酮即高丽槐素的鉴别 项［参考文献］［1］中国药典•一部［SJ.2010： 186.［2］陈猛•苦木生物碱活性成分的研究［D］・烟台：烟台大学,2007.|3|LeeJJ , OhCH , YangJH , etaLCytotoxicalkaloidsfromthewoodofPicrasmaquassioides [ J]・ J KoreanSocApplBi, 2009, 2 (6)： 663・[4]ChenJ, YanXH, DongJH, etal.Tobaccomosaicvirus ( TMV )inhibitorsfromPicrasmaquassioidesBenn [J] .JAgrFoodChem , 2009, 57 (15)： 6590.⑸祝晨，邓贵华，林朝展•苦树化学成分研究［J］・中国中药杂志,201L 36 (7)： 886.［6］祝晨,邓贵华，林朝展•苦木化学成分研究［J］・天然产物研究与开发，2012, 24 (4)： 476.⑺黄晓丹，苏子仁，沈小玲，等•消炎利胆片中穿心莲内酯 类和苦木碱类的RP-HPLC法测定［J］冲成药，2003, 25 (6)： 451.［8］吕武清，黄卫东，宋友昕，等.HPLC法测定苦木药材中铁屎米酮生物碱[J]•中草药，2009, 40 (8)： 1321.[9] 黄卫东，宋友昕，吕武清•高效液相色谱法测定苦木注射液中铁屎米酮生物碱含量[J]・中国医院药学杂志，2010, 30(12)： 1066.[10] 易宇阳，赖正权，石书江，等•苦木药材中3种有效成分的含量测定[J]・中国实验方剂学杂志,2012, 18 (12)： 71.Simultaneousdeterminationof4alkaloidsandaflavonoidin。