药物相互作用实验方案.docx
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艾迪注射液（中药）与培美曲塞（西药）相互作用实验方案1、 实验目的与任务1.1实验目的本实验的目的是探究艾迪注射液与培美曲塞联合用药时在动物 体内的药动学参数，来进一步探究两者的相互作用1.2实验任务本次实验任务如下：（1） 完成艾迪注射液与培美曲塞生物样品检测条件摸索，并进行方 法学验证2） 在大鼠体内进行艾迪注射液与培美曲塞的药物代谢动力学研究（3） 数据的统计和处理，药动学参数的计算，得出结论2、 实验材料和仪器2.1实验材料艾迪注射液市售品；人参皂苷Re对照品；黄芪对照品；斑鳌对 照品；培美曲塞市售品；培美曲塞对照品；甲醇（色谱纯）；乙腈（色 谱纯）；磷酸钠缓冲液（分析纯）；纯净水等约SD大鼠130只（雌雄各半，体重200土20g）2.2实验仪器LC-15C高效液相色谱仪；AB-135型分析天平；低速离心机；涡 旋混合仪等3、 实验方法3.1标准品色谱条件摸索3.1.1艾迪注射液高效液相色谱方法建立艾迪注射液是由斑蝥、人参、黄芪和刺五加组成的纯中药制剂， 根据查阅相关文献，本实验选择斑蝥、人参、黄芪三个有效成分用于 艾迪注射液的方法建立供试品和对照品分别注入高效液相色谱仪， 并确定最低检测限及内标液的选择。
参考色谱条件：色谱柱：Cosmos% (250mmX4.6mm, 5um), 流动相A：纯水，B：乙腈；梯度洗脱程序：0min 6%B； 0-15min 6%-11%B； 15-80min 11%-33%B；流速：1.0mL/min；检测波长：203nm；柱温： 40°C ；进样量 20uL3.1.2培美曲塞高效液相色谱方法建立将供试品和对照品分别注入高效液相色谱仪，并确定最低检测限 及内标液的选择参考色谱条件：色谱柱：Cosmos% (250mmX4.6mm, Sum)； 流动相：50mmol/L；磷酸钠缓冲液(用磷酸调节pH=3.35)：乙腈=84:16 (V/V)；流速=1mL/min；检测波长 250nm；柱温 30C3.2生物样品处理方法的确定取空白大鼠血浆100uL置于离心管中，按体积1： 3加入300uL 甲醇作为沉淀剂，涡旋震荡3min后，4000r/min离心15min，沉淀蛋 白，精密吸取上清液200uL，分别加入经稀释过的艾迪注射液标准品 和培美曲塞标准品溶液，过0.22um有机滤膜，20uL进样，用HPLC 进行分析根据分析结果来优化处理方法3.3预实验预实验按照下述的动物试验方法，但是SD大鼠每组仅选用2只， 且只选做单剂量动物实验，并取3min； 7min； 10min； 15min； 20min； 30min； 40min； 50min； 1h； 1.5h； 2h； 4h； 6h； 8h； 12h； 15h； 18h； 21h； 24h （具体按实际操作进行），确定最佳取血点，且进HPLC中， 确定取血点的设计和取血时间以及标准曲线的范围，进一步优化实 验。
3.4方法学验证3.4.1艾迪注射液高效液相色谱法方法学验证需要检测的项有：专属性；标注曲线和定量下限；精密度（日内， 日间）；回收率；稳定性具体实验方法以实际操作为准）3.4.2培美曲塞高效液相色谱法方法学验证与艾迪注射液检测的项相同3.5动物实验3.5.1单剂量给药实验3.5.1.1艾迪注射液对培美曲塞的作用取健康SD大鼠30只，体重约200±20g，雌雄各半随机分成 空白组（生理盐水）、对照组和联合用药组（艾迪注射液分为高、中、 低三个剂量），每组6只，大鼠禁食但可以自由饮水12h后，空白组 尾静脉给予生理盐水，对照组尾静脉给予培美曲塞，联合用药组尾静 脉先分别给予高、中、低三个剂量的艾迪注射液，5min后再给予培 美曲塞，分别于注射后按照预实验得出的取血点从大鼠眼底静脉丛取 血处理血样，进HPLC分析3.5.1.2培美曲塞对艾迪注射液的作用取健康SD大鼠12只，体重约200±20g，雌雄各半随机分成 对照组和联合用药组，每组6只，大鼠禁食但可以自由饮水12h后， 对照组尾静脉给予艾迪注射液，联合用药组尾静脉先给予培美曲塞， 5min后再给予艾迪注射液，分别于注射后按照预实验得出的取血点 从大鼠眼底静脉丛取血。
处理血样，进HPLC分析3.5.2多剂量给药实验3.5.2.1艾迪注射液对培美曲塞的作用取健康SD大鼠30只，体重约200±20g，雌雄各半随机分成 空白组（生理盐水）、对照组和联合用药组（艾迪注射液分为高、中、 低三个剂量），每组6只，前7天分别每天早上给予联合用药组尾静 脉注射艾迪注射液，其他组别不进行任何处理第8天大鼠禁食但可 以自由饮水12h后，空白组尾静脉注射生理盐水，对照组尾静脉注射 培美曲塞溶液，联合用药组尾静脉先分别注射高、中、低三个剂量的 艾迪注射液，5min后再给予培美曲塞，分别于注射后按照预实验得 出的取血点从大鼠眼底静脉丛取血处理血样，进HPLC分析备注：培美曲塞每21天为一个周期，所以不用进行多剂量试验） 3.6数据处理采用DAS2.1版本软件计算艾迪注射液和培美曲塞的药动学参数， 确定房室模型，采用SPSS软件进行统计学检验，确定有无显著性差 异4、实验安排(按照实验室实际情况)(1) 2015.1—2015.2:完成色谱条件摸索及预实验;(2) 2015.3—2015.4:完成动物实验部分；(3) 2015.5:结题。
