医学专题：尿液蛋白质葡萄糖与酮体检测.ppt

尿液蛋白质、葡萄糖与酮尿液蛋白质、葡萄糖与酮体检测体检测长沙医学院临检教研室 陈丽华目的要求v掌握：尿蛋白、尿糖定性试验和尿酮体掌握：尿蛋白、尿糖定性试验和尿酮体Rothera改良改良法v熟悉：尿蛋白形成机制与分类、尿蛋白测定的质量熟悉：尿蛋白形成机制与分类、尿蛋白测定的质量控制v了解：尿酮体的产生了解：尿酮体的产生v重点：尿蛋白、尿糖定性试验和尿酮体重点：尿蛋白、尿糖定性试验和尿酮体Rothera改良改良法v难点：质量控制难点：质量控制肾单位是肾肾单位是肾的基本功能的基本功能单位，由肾单位，由肾小体和肾小小体和肾小管组成肾单位与集肾单位与集合管共同完合管共同完成泌尿功能成泌尿功能肾单位示意图肾单位示意图肾小球滤过膜肾小球滤过膜有筛孔屏障和有筛孔屏障和电荷屏障葡电荷屏障葡萄糖可完全滤萄糖可完全滤过，白蛋白难过，白蛋白难于滤过肾小球滤过膜示意图肾小球滤过膜示意图影响肾小球滤影响肾小球滤过的因素：过的因素：①①肾小球毛细血肾小球毛细血管血压②②囊内压③③血浆胶体渗血浆胶体渗透压④④肾血流量肾血流量近球小管重吸收葡萄糖示意图近球小管重吸收葡萄糖示意图重吸收葡萄糖重吸收葡萄糖的部位仅限于的部位仅限于近球小管。

近近球小管近球小管重吸收球小管重吸收葡萄糖有一定葡萄糖有一定的限度正常情况下葡正常情况下葡萄糖被全部重萄糖被全部重吸收入血吸收入血NaG          脂肪酸脂肪酸                乙酰辅酶乙酰辅酶A      乙酰乙酸乙酰乙酸丙酮丙酮β羟丁酸羟丁酸酮体在肝细胞中的生成酮体在肝细胞中的生成β羟丁酸羟丁酸乙酰乙酸乙酰乙酸乙酰乙酰乙酰乙酰CoA丙酮丙酮自肺、自肺、肾排出肾排出 乙酰乙酰CoA酮体的氧化示意图酮体的氧化示意图酮体肝内生成酮体肝内生成肝外利用肝外利用一、概述v1.历史：历史：1673年，弗雷德里克年，弗雷德里克.德克斯德克斯(Frederick Dekkers)用加热醋酸酸化尿液方法测定尿液中的蛋白用加热醋酸酸化尿液方法测定尿液中的蛋白v1790年，弗兰西斯年，弗兰西斯.贺母（贺母（Fancis Home）用硝酸法检）用硝酸法检测水肿患者尿液中的蛋白测水肿患者尿液中的蛋白v1827年，理查德年，理查德.伯瑞特（伯瑞特（Richard Bright）用加热的）用加热的方法检测肾病患者尿液中的蛋白方法检测肾病患者尿液中的蛋白v2.正常尿蛋白的含量和组成正常尿蛋白的含量和组成：：尿蛋白总量为尿蛋白总量为30~130 30~130 mg/24hmg/24h，一次随机尿为，一次随机尿为0~80mg/L0~80mg/L。

v蛋白定性试验：阴性蛋白定性试验：阴性v主要成分是相对分子质量小的蛋白如主要成分是相对分子质量小的蛋白如ββ2微球蛋白、微球蛋白、αα2 2微球蛋白、溶菌酶等微球蛋白、溶菌酶等v3.3.蛋白尿：蛋白尿：尿蛋白总量超过尿蛋白总量超过150mg/24h150mg/24h或或100mg/L100mg/L，，蛋白定性试验：阳性蛋白定性试验：阳性二、病理性蛋白尿分类及原因v1、肾小球性蛋白尿：最常见、肾小球性蛋白尿：最常见v（（1）选择性蛋白尿：）选择性蛋白尿：当肾小球损伤较轻时当肾小球损伤较轻时, 以以4－－9万的相对分子质量中等的清蛋白为主，可伴抗凝血万的相对分子质量中等的清蛋白为主，可伴抗凝血酶、转铁蛋白、糖蛋白及少量小相对分子质量的酶、转铁蛋白、糖蛋白及少量小相对分子质量的β2－－M、、Fc片断等 Pro:+++-++++. Pro大于大于3.5g/24h.v最典型的是肾病综合症最典型的是肾病综合症（（2）非选择性蛋白尿）非选择性蛋白尿v反映肾小球毛细血管壁有严重破裂损伤以分子量反映肾小球毛细血管壁有严重破裂损伤以分子量较大和中等的蛋白质同时存在为主，较大和中等的蛋白质同时存在为主，Pro：＋－＋＋：＋－＋＋＋＋。

定量＋＋定量0.5~3g/L多见于原发或继发肾小球疾多见于原发或继发肾小球疾病2.肾小管性蛋白尿肾小管性蛋白尿:感染、中毒引起小分子蛋白质尿，感染、中毒引起小分子蛋白质尿，Pro：＋－：＋－＋＋定量＋＋定量1~2g/L常见于肾小管疾病常见于肾小管疾病v3 3、混合性蛋白尿：、混合性蛋白尿：肾小管和肾小球同时损伤，大中肾小管和肾小球同时损伤，大中小小ProPro均增多 v4 4、溢出性蛋白尿：、溢出性蛋白尿：指血液循环中，出现了以中、小指血液循环中，出现了以中、小相对分子质量为主的异常蛋白质，如：游离相对分子质量为主的异常蛋白质，如：游离HbHb、肌、肌红蛋白、溶菌酶、本周蛋白等增多，经肾小球滤出，红蛋白、溶菌酶、本周蛋白等增多，经肾小球滤出，超过了肾小管的重吸收最大能力，而大量出现在尿超过了肾小管的重吸收最大能力，而大量出现在尿中Pro：＋：＋—＋＋常见于＋＋常见于MMv5、组织性蛋白尿：、组织性蛋白尿：肾组织代谢产生、组织破坏分解肾组织代谢产生、组织破坏分解的、炎症或药物刺激泌尿系统分泌的蛋白质等的、炎症或药物刺激泌尿系统分泌的蛋白质等Pro：：±－＋；多为－＋；多为T－－H糖蛋白糖蛋白三、生理性蛋白尿三、生理性蛋白尿v1.1.功能性蛋白尿功能性蛋白尿：剧烈运动、发热、寒冷刺激、精：剧烈运动、发热、寒冷刺激、精神紧张、交感神经兴奋等，多见与青少年。

神紧张、交感神经兴奋等，多见与青少年v2.2.体位性蛋白尿：体位性蛋白尿：又称直立性蛋白尿，特点：卧位又称直立性蛋白尿，特点：卧位时尿蛋白阴性，起床活动或久立后，尿蛋白阳性，时尿蛋白阴性，起床活动或久立后，尿蛋白阳性，平卧后又阴性多见于发育期少年平卧后又阴性多见于发育期少年v3.3.偶然性蛋白尿：偶然性蛋白尿：又称假性蛋白尿，混入多量血液、又称假性蛋白尿，混入多量血液、脓液、粘液或生殖系统分泌物，如：白带、月经血、脓液、粘液或生殖系统分泌物，如：白带、月经血、精液、前列腺液等精液、前列腺液等尿蛋白尿蛋白血浆蛋白血浆蛋白 组织蛋白组织蛋白肾肾小球性小球性 肾小管性肾小管性 混合性混合性 溢出性溢出性 组织性组织性泌尿系统、泌泌尿系统、泌尿外系统尿外系统 肾病肾病综合征、综合征、肾病性肾病性蛋白尿蛋白尿 原发、原发、继发肾继发肾小球疾小球疾病病肾小管间肾小管间质病变、质病变、中毒性肾中毒性肾病病 浆细胞病、浆细胞病、血管内溶血管内溶血、肌肉血、肌肉损伤损伤肾脏疾病、肾脏疾病、炎症、中炎症、中毒、泌尿毒、泌尿道结石道结石 泌尿道、泌尿道、生殖道炎症、生殖道炎症、出血、排泌出血、排泌物污染物污染四、蛋白质定性检测方法v（一）加热乙酸法（一）加热乙酸法v1.原理：原理：①①加热煮沸使蛋白变性、凝固，加热煮沸使蛋白变性、凝固，v②②然后加酸使尿液然后加酸使尿液pHpH接近尿蛋白质等电点，在含有接近尿蛋白质等电点，在含有适量无机盐状况下，蛋白质更易于变性沉淀。

适量无机盐状况下，蛋白质更易于变性沉淀v③③加酸还可溶解因加热析出的磷酸盐或碳酸盐结晶加酸还可溶解因加热析出的磷酸盐或碳酸盐结晶所致的混浊所致的混浊v2、材料：、材料：酒精灯、试管、试管夹、滴管酒精灯、试管、试管夹、滴管v3、试剂：、试剂：５％醋酸５％醋酸（一）加热乙酸法v4.操作操作：（：（1）取大试管）取大试管1支，用试管夹夹住管底部，支，用试管夹夹住管底部，加尿液至试管加尿液至试管2/3处2）斜持试管下端，在酒精灯上加热下）斜持试管下端，在酒精灯上加热下1/3处，煮沸处，煮沸即止3）加）加5%乙酸乙酸2~3滴，再煮沸后立即观察结果滴，再煮沸后立即观察结果4）结果判断如下：）结果判断如下：           实验结果实验结果             结果判断结果判断        相当含量（相当含量（g/L））清晰透明无清晰透明无                -                      0改变改变黑色背景下，黑色背景下，           ±            　　  0.1~0.15极轻度混浊极轻度混浊明显白色雾状，明显白色雾状，        +                 0.2~0.5 但无颗粒但无颗粒明显混浊，明显混浊，               ++               0.6~2.0出现颗粒出现颗粒大量絮状沉淀大量絮状沉淀          +++               2.0~5.0但无凝块但无凝块严重混浊，严重混浊，             ++++               ＞＞5.0      有大凝块有大凝块5.注意事项v（（1）操作程序要对：加热）操作程序要对：加热         加酸加酸          再加热。

再加热v（（2）加入醋酸量要适当，）加入醋酸量要适当，pH>9或或pH<3可以产生可以产生假假阴性v（（3）加热时使底部受热，上部好作对照加热时使底部受热，上部好作对照v（（4）加热时管口勿对别人加热时管口勿对别人加加尿液尿液1ml判断结果判断结果（二）磺基水杨酸法磺基水杨酸法v1.原理：原理：在酸性条件下，磺基水杨酸的阴离子和蛋白在酸性条件下，磺基水杨酸的阴离子和蛋白质氨基酸阳离子结合，形成不溶性蛋白盐沉淀质氨基酸阳离子结合，形成不溶性蛋白盐沉淀v2.操作：操作：加尿液加尿液1ml加磺硫酸加磺硫酸2滴滴1分钟内判断结果分钟内判断结果同加热乙酸法同加热乙酸法v3.注意事项注意事项①①本试验方法灵敏度高，极微浑浊无意义本试验方法灵敏度高，极微浑浊无意义②②判断结果需及时判断结果需及时③③尿酸盐和尿酸过多，可出现假阳性尿酸盐和尿酸过多，可出现假阳性④④尿内含碘造影剂、大剂量青霉素等可使反应呈假阳尿内含碘造影剂、大剂量青霉素等可使反应呈假阳性（三）试带法法v原理：原理：pH指示剂的蛋白误差原理指示剂的蛋白误差原理①①试剂模块中含有酸碱指示剂溴酚蓝试剂模块中含有酸碱指示剂溴酚蓝,pH阈值阈值3.0(黄色）黄色）~4.6（蓝紫色）。

蓝紫色）②②pH3.2时，溴酚蓝产生阴离子，与带阳离子的蛋白时，溴酚蓝产生阴离子，与带阳离子的蛋白质（清蛋白）结合形成复合物，发生颜色变化从质（清蛋白）结合形成复合物，发生颜色变化从淡黄色变成绿色甚至是蓝色淡黄色变成绿色甚至是蓝色③③根据颜色变化可目测也可用尿液分析仪判读结果根据颜色变化可目测也可用尿液分析仪判读结果五、蛋白质定性检查参考值：阴性v1、加热醋酸法、加热醋酸法：：v（（1））特异性强，干扰因素少，能同时检出特异性强，干扰因素少，能同时检出A、、G，，但敏感性较低，一般在但敏感性较低，一般在0.15g/L左右；左右；v（（2）为蛋白定性确证实验为蛋白定性确证实验六、蛋白质定性检查方法学评价（3）加热乙酸法干扰因素及控制：①①尿液偏碱（尿液偏碱（pH>9）或偏酸（）或偏酸（pH<3）时呈）时呈假阴性假阴性，，故试验前应先将尿液故试验前应先将尿液pH值调至值调至5~6.②②尿液离子强度低（无盐或低盐饮食者）时，可呈尿液离子强度低（无盐或低盐饮食者）时，可呈假假阴性阴性可在标本中滴加饱和可在标本中滴加饱和NaCl溶液溶液1~2滴后再进滴后再进行试验③③尿中混有生殖系统分泌物时，可出现尿中混有生殖系统分泌物时，可出现假阳性假阳性，故用，故用中段尿或离心后取上清液检测。

中段尿或离心后取上清液检测④④加热加酸再加热后，立即判读结果加热加酸再加热后，立即判读结果2、磺基水杨酸法v（（1）操作简单，反应灵敏、结果显示快，灵敏度可）操作简单，反应灵敏、结果显示快，灵敏度可达达0.05－－0.1g/Lv（（2）） A、、G、、T－－H糖蛋白和本周氏蛋白均呈阳性糖蛋白和本周氏蛋白均呈阳性发应；发应；v（（3）适于蛋白尿筛选试验，为干化学法的参考方法适于蛋白尿筛选试验，为干化学法的参考方法v（（4）本法阴性可靠，阳性需进一步鉴别本法阴性可靠，阳性需进一步鉴别（5）磺基水杨酸法干扰因素及质量控制v①①尿液尿液pH值值>9或或pH<3时呈时呈假阴性假阴性，故试验前应先，故试验前应先将尿液将尿液pH值调至值调至5~6.v②②大剂量青霉素钾盐、庆大霉素、磺胺、含碘造影大剂量青霉素钾盐、庆大霉素、磺胺、含碘造影剂时可出现剂时可出现假阳性v③③ 尿中混有生殖系统分泌物时，可出现尿中混有生殖系统分泌物时，可出现假阳性假阳性，故，故用中段尿或离心后取上清液检测用中段尿或离心后取上清液检测v④④判断结果应于判断结果应于1分钟内3.试带法v（（1）本法快速、简便、易于标准化，可肉眼观察结）本法快速、简便、易于标准化，可肉眼观察结果，也可用于尿液自动分析。

果，也可用于尿液自动分析v（（2）对）对A敏感，对敏感，对G不敏感，可漏检本周氏蛋白不敏感，可漏检本周氏蛋白v（（3）适于健康普查或临床筛检，不适用于肾病疗效）适于健康普查或临床筛检，不适用于肾病疗效观察及预后判断和泌尿系统其他疾病的筛选观察及预后判断和泌尿系统其他疾病的筛选（4）试带法干扰因素和质量控制v①①pH影响：影响：pH>9时，呈假阳性；时，呈假阳性；pH<3时，呈假阴时，呈假阴性故试验前应先将尿液故试验前应先将尿液pH值调至值调至5~6.v②②食物因素：检验前一天宜均衡饮食食物因素：检验前一天宜均衡饮食v③③药物因素：药物因素：假阳性假阳性：奎宁、嘧啶或尿中含磷酸盐、：奎宁、嘧啶或尿中含磷酸盐、季胺盐等季胺盐等假阴性：假阴性：青霉素、庆大霉素、磺胺、含青霉素、庆大霉素、磺胺、含碘造影剂碘造影剂v④④操作：试带浸渍时间过长，操作：试带浸渍时间过长，假阳性假阳性；过短或太长；过短或太长以至模块中试剂消失，以至模块中试剂消失，假阴性小结：一些干扰因素的影响               加热乙酸法加热乙酸法        磺基水杨酸法磺基水杨酸法      试带法试带法pH>9        假阴性假阴性                 假阴性假阴性               假阳性假阳性 pH<3        假阴性假阴性                 假阴性假阴性               假阴性假阴性 青霉素青霉素                                   假阳性假阳性               假阴性假阴性七、临床意义v1、生理性蛋白尿、生理性蛋白尿    定性试验：不超过＋；定量试验：定性试验：不超过＋；定量试验：小于小于0。

5g/L（（1）功能性蛋白尿：）功能性蛋白尿：          （（4）偶然性蛋白尿：）偶然性蛋白尿：（（2）直立性蛋白尿：）直立性蛋白尿：          （（5）老年性蛋白尿：）老年性蛋白尿：（（3）摄入性蛋白尿：）摄入性蛋白尿：          （（6）妊娠性蛋白尿：）妊娠性蛋白尿：2.病理性蛋白尿v（（1）肾前性蛋白尿）肾前性蛋白尿：浆细胞病；血管内溶血；大面积肌肉：浆细胞病；血管内溶血；大面积肌肉损伤；酶类增多等损伤；酶类增多等v（（2）肾性蛋白尿）肾性蛋白尿：：v1）肾小球性蛋白尿：肾病综合症；原发性肾小球肾炎；继）肾小球性蛋白尿：肾病综合症；原发性肾小球肾炎；继发性肾小球肾炎发性肾小球肾炎v2）肾小管性蛋白尿：肾小管间质病变；重金属中毒；药物）肾小管性蛋白尿：肾小管间质病变；重金属中毒；药物中毒；器官移植等中毒；器官移植等v（（3）肾后性蛋白尿）肾后性蛋白尿：泌尿、生殖系统炎症；泌尿系统结石、：泌尿、生殖系统炎症；泌尿系统结石、结核、肿瘤等；泌尿系统邻近器官疾病；其他病理性蛋白尿结核、肿瘤等；泌尿系统邻近器官疾病；其他病理性蛋白尿等一、概述v1.糖尿糖尿:尿糖定性试验呈阳性的尿液。

主要指葡萄糖尿糖定性试验呈阳性的尿液主要指葡萄糖v2.是否是否出现糖尿出现糖尿取决于取决于3 3个因素个因素: :v动脉血液中葡萄糖浓度动脉血液中葡萄糖浓度v每分钟流经肾小球的血浆量每分钟流经肾小球的血浆量v近端肾小管上皮细胞重吸收葡萄糖的能力近端肾小管上皮细胞重吸收葡萄糖的能力二、尿葡萄糖测定的方法v（一）班氏法（（一）班氏法（Benedict法）法）v1.原理原理   含有醛基的葡萄糖具有还原性，在高热及碱含有醛基的葡萄糖具有还原性，在高热及碱性溶液中能将蓝色的硫酸铜还原为黄色的氢氧化亚性溶液中能将蓝色的硫酸铜还原为黄色的氢氧化亚铜及红色氧化亚铜，出现黄色至砖红色沉淀物铜及红色氧化亚铜，出现黄色至砖红色沉淀物葡萄糖葡萄糖+硫酸铜硫酸铜            氢氧化亚铜氢氧化亚铜            氧化亚铜氧化亚铜v2.试剂试剂  班氏定性试剂班氏定性试剂v3. 操作操作 如下如下OH--CHO-黄色黄色红棕色红棕色蓝色蓝色 加班氏试剂加班氏试剂1ml加热加热取尿液取尿液0.1ml加入上述试剂加入上述试剂中中再再加热加热冷却冷却判断结果判断结果4.4.尿糖定性结果判断尿糖定性结果判断: :实验结果实验结果               结果判断结果判断       相当含量（相当含量（g/L））仍呈蓝色仍呈蓝色                      -               蓝绿色，无沉淀蓝绿色，无沉淀          ±                ＜＜0.1 绿色，有少量绿色，有少量               +               0.1~0.5绿黄色沉淀绿黄色沉淀黄绿色，有较多黄绿色，有较多          ++              0.5~1.0沉淀沉淀土黄色，有大量土黄色，有大量         +++             1.0~2.0沉淀沉淀砖红色沉淀，上砖红色沉淀，上        ++++　　　　  　＞　＞2.0清液无色清液无色5.注意事项v（（1）试剂：尿液的比例为）试剂：尿液的比例为10:1,改变比例将影响灵改变比例将影响灵敏度和结果。

敏度和结果v（（2）糖尿病患者应于空腹或餐后）糖尿病患者应于空腹或餐后2小时留尿标本检小时留尿标本检验v（（3）存在大量尿酸盐时，煮沸后可呈绿色但久置后）存在大量尿酸盐时，煮沸后可呈绿色但久置后不变黄而呈灰蓝色，因此必须冷后观察结果不变黄而呈灰蓝色，因此必须冷后观察结果5.注意事项v（（4）尿中非糖还原性物质过多，如链霉素、青霉素、）尿中非糖还原性物质过多，如链霉素、青霉素、水杨酸、水化氯醛、水杨酸、水化氯醛、VitC、中药大黄、黄岑等可呈、中药大黄、黄岑等可呈阳性反应所以应停阳性反应所以应停3天后留标本检测，如静注天后留标本检测，如静注VitC 5天内不宜做尿糖测定天内不宜做尿糖测定v（（5）蛋白含量过高，可影响尿糖定性测定，应用加）蛋白含量过高，可影响尿糖定性测定，应用加热乙酸法除去蛋白后再进行检验热乙酸法除去蛋白后再进行检验6.方法学评价v为非特异性试验，可测定尿中所有的还原性物质，因为非特异性试验，可测定尿中所有的还原性物质，因此，尿中此，尿中其它糖其它糖如果糖、乳糖和戊糖和如果糖、乳糖和戊糖和一些还原性药一些还原性药物物如氯醛、氨基比林、阿斯匹林、如氯醛、氨基比林、阿斯匹林、VitC和青霉素等都和青霉素等都可出现可出现假阳性假阳性。

v已逐渐被葡萄糖氧化酶试带法取代已逐渐被葡萄糖氧化酶试带法取代7.参考值：阴性参考值：阴性（二）干化学试带法v采用葡萄糖氧化酶法原理进行采用葡萄糖氧化酶法原理进行v1.原理：原理：葡萄糖氧化酶试带法：葡萄糖氧化酶试带法：    葡萄糖葡萄糖+H2O+O2  葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶  葡萄糖酸葡萄糖酸+H2O2     H2O2 +色原剂色原剂    过氧化物酶过氧化物酶    有色物质有色物质（常用的色源剂有邻联甲苯胺、碘化钾、氨基比林）（常用的色源剂有邻联甲苯胺、碘化钾、氨基比林）v2.方法学评价方法学评价v（（1 1）特异性强，灵敏度高，方法简单快捷可用于目）特异性强，灵敏度高，方法简单快捷可用于目视比色和自动化分析视比色和自动化分析v（（2 2）干扰因素：）干扰因素：v①①假阳性假阳性：：a.尿标本容器残留强氧化性物质如漂白尿标本容器残留强氧化性物质如漂白粉等；粉等；b.尿比密过低；尿比密过低；v②②假阴性假阴性：：a.标本久置葡萄糖分解；标本久置葡萄糖分解；b.尿酮体浓度过尿酮体浓度过高c.VitC、、L-多巴、水杨酸、氟化钠多巴、水杨酸、氟化钠（三）（三）薄层层析法薄层层析法Ø1. 1.原理：原理：原理：原理：在层析法中有固定相和流动相，两相间可在层析法中有固定相和流动相，两相间可在层析法中有固定相和流动相，两相间可在层析法中有固定相和流动相，两相间可做相对流动。

当样品中各种糖随流动相通过固定相做相对流动当样品中各种糖随流动相通过固定相做相对流动当样品中各种糖随流动相通过固定相做相对流动当样品中各种糖随流动相通过固定相时，即反复发生吸附、脱附、解析或其他亲和作用，时，即反复发生吸附、脱附、解析或其他亲和作用，时，即反复发生吸附、脱附、解析或其他亲和作用，时，即反复发生吸附、脱附、解析或其他亲和作用，由于各种糖在上述性能上的差异而产生移动速度的由于各种糖在上述性能上的差异而产生移动速度的由于各种糖在上述性能上的差异而产生移动速度的由于各种糖在上述性能上的差异而产生移动速度的差异，而相互分离差异，而相互分离差异，而相互分离差异，而相互分离v2.2.方法学评价：方法学评价：可作为确证试验是鉴定非葡萄糖可作为确证试验是鉴定非葡萄糖的还原性糖的首选方法操作繁杂、费时，成本高，的还原性糖的首选方法操作繁杂、费时，成本高，多用于临床和基础研究多用于临床和基础研究三、质量控制v1.检测前：容器、标本、消除检测前：容器、标本、消除VitC干扰v2.检测中：做好室内质控，严格遵循标准化操作规检测中：做好室内质控，严格遵循标准化操作规程v3.检测后：报告审核，与临床联系。

检测后：报告审核，与临床联系q氧化酶试纸法阴性，班氏试剂（还原）实验法氧化酶试纸法阴性，班氏试剂（还原）实验法阳性阳性           试纸质量问题试纸质量问题 葡萄糖以外的其他还原糖葡萄糖以外的其他还原糖 尿液中含有较高浓度的还原性物质尿液中含有较高浓度的还原性物质 存在少量葡萄糖伴有高浓度的还原物质存在少量葡萄糖伴有高浓度的还原物质q氧化酶试纸法阳性，还原实验法阴性氧化酶试纸法阳性，还原实验法阴性            尿液标本被过氧化物或者次氯酸盐污染尿液标本被过氧化物或者次氯酸盐污染四、尿糖测定结果分析：四、尿糖测定结果分析：五、临床意义v1.血糖增高性糖尿血糖增高性糖尿：：①①糖尿病性糖尿糖尿病性糖尿②②其他内分其他内分泌异常：如甲亢泌异常：如甲亢③③应激状态：脑血管意外、突然应激状态：脑血管意外、突然情绪紧张情绪紧张④④饮食因素：一次性摄食过多糖饮食因素：一次性摄食过多糖v2.血糖正常性糖尿血糖正常性糖尿：即肾性糖尿见于慢性肾小球：即肾性糖尿见于慢性肾小球肾炎、肾病综合征、新生儿糖尿等及妊娠晚期肾炎、肾病综合征、新生儿糖尿等及妊娠晚期。

v3.其他糖尿其他糖尿：乳糖、半乳糖、果糖、戊糖等乳糖、半乳糖、果糖、戊糖等尿糖检查的临床意义尿糖检查的临床意义糖糖糖糖尿尿尿尿非葡萄糖尿非葡萄糖尿非葡萄糖尿非葡萄糖尿葡萄糖尿葡萄糖尿葡萄糖尿葡萄糖尿胰岛外性糖尿胰岛外性糖尿胰岛外性糖尿胰岛外性糖尿生理性糖尿生理性糖尿生理性糖尿生理性糖尿摄食性糖尿摄食性糖尿摄食性糖尿摄食性糖尿妊娠性糖尿妊娠性糖尿妊娠性糖尿妊娠性糖尿神经精神性糖尿神经精神性糖尿神经精神性糖尿神经精神性糖尿病理性糖尿病理性糖尿病理性糖尿病理性糖尿真性糖尿真性糖尿真性糖尿真性糖尿半乳糖尿半乳糖尿半乳糖尿半乳糖尿果糖尿果糖尿果糖尿果糖尿戊糖尿戊糖尿戊糖尿戊糖尿其他糖尿其他糖尿其他糖尿其他糖尿酮体酮体：脂肪酸分解代谢的中间产物 丙酮 2% 乙酰乙酸 20% β -羟丁酸 78%酮血症酮血症酮尿酮尿一、尿液酮体检测原理一、尿液酮体检测原理v（一）亚硝基铁氰化钠法原理（一）亚硝基铁氰化钠法原理 尿中丙酮和乙酰乙酸在碱性溶液中与亚硝基尿中丙酮和乙酰乙酸在碱性溶液中与亚硝基铁氰化钠反应生成紫色化合物铁氰化钠反应生成紫色化合物（注：不与酮（注：不与酮体中体中β-β-羟丁酸检测羟丁酸检测) )。

 基于亚硝基铁氰化钠法原理的尿酮体检测v1.试带法试带法  v2.Lange法（朗格法）法（朗格法）v3. RotheraRothera法法v4.4.改良改良RotheraRothera法（酮体粉法）法（酮体粉法） v5.5.片剂法片剂法改良改良RotheraRothera法（酮体粉法）法（酮体粉法）v[试剂试剂]酮体粉：亚硝基铁氰化钠酮体粉：亚硝基铁氰化钠0.5g（粉红色颗粒），（粉红色颗粒），无水碳酸钠无水碳酸钠10g，硫酸铵，硫酸铵10g，混合并研磨均匀，密，混合并研磨均匀，密闭于棕色磨口瓶内，严防受潮闭于棕色磨口瓶内，严防受潮v[操作操作] ①①向玻片或试管中加向玻片或试管中加1小勺酮体粉小勺酮体粉v②②滴加尿液于酮体粉上，至完全浸润滴加尿液于酮体粉上，至完全浸润v③③结果观察：结果观察：5分钟内出现紫色为阳性结果判定如分钟内出现紫色为阳性结果判定如下表：下表： 表 尿酮体定性结果判断标准反应表现反应表现                     结果结果                  报告方式报告方式立即出现深紫色立即出现深紫色          强阳性强阳性                 3+ ~ 4+立即出现淡紫色立即出现淡紫色          阳性阳性                          2+逐渐出现淡紫色逐渐出现淡紫色         弱阳性弱阳性                         +5分钟内无颜色改变分钟内无颜色改变     阴性阴性                           -[参考值参考值] 阴性阴性注意事项v①①标本应新鲜：标本应新鲜：由于尿酮体中的丙酮和乙酰由于尿酮体中的丙酮和乙酰乙酸都具有挥发性，乙酰乙酸更易受热分解乙酸都具有挥发性，乙酰乙酸更易受热分解成丙酮；尿液被细菌污染后，酮体消失，因成丙酮；尿液被细菌污染后，酮体消失，因此尿液必须新鲜，及时送检，以免因酮体的此尿液必须新鲜，及时送检，以免因酮体的挥发或分解出现假阴性结果或结果偏低挥发或分解出现假阴性结果或结果偏低 。

注意事项v②②不同方法灵敏度的差异不同方法灵敏度的差异：干学法与酮体粉：干学法与酮体粉法灵敏度存在差异，故同一病理标本两种方法灵敏度存在差异，故同一病理标本两种方法可能出现结果的差异，分析结果时应特别法可能出现结果的差异，分析结果时应特别注意注意事项v③③根据病程分析结果：根据病程分析结果：早期，主要酮体成分早期，主要酮体成分β羟丁酸，羟丁酸，很少或缺乏乙酰乙酸，此时测得结果可导致对总酮很少或缺乏乙酰乙酸，此时测得结果可导致对总酮体量估计不足体量估计不足v在糖尿病酮症酸中毒症状缓解之后，在糖尿病酮症酸中毒症状缓解之后，β-羟丁酸转变羟丁酸转变为乙酰乙酸，反而使乙酰乙酸含量比初始急性期增为乙酰乙酸，反而使乙酰乙酸含量比初始急性期增高，易对病情估计过重高，易对病情估计过重v因此检验人员必须注意病程发展，与临床医生共同因此检验人员必须注意病程发展，与临床医生共同分析实验结果分析实验结果 方法学评价v1.灵敏度：灵敏度：不同方法对各种成分灵敏度不一不同方法对各种成分灵敏度不一致本法与乙酰乙酸发生强反应，与丙酮发致本法与乙酰乙酸发生强反应，与丙酮发生弱反应，与生弱反应，与β-羟丁酸不反应羟丁酸不反应。

v2.干扰因素干扰因素  v（（1）假阳性：）假阳性：①① 尿中含多量肌酐、肌酸，高尿中含多量肌酐、肌酸，高色素尿，尿中含酞、苯丙酮、左旋多巴代谢色素尿，尿中含酞、苯丙酮、左旋多巴代谢物等方法学评价v（（2）假阴性：）假阴性：①①标本收集和保存不当，标本收集和保存不当，②②亚硝基铁氰化钠失效，亚硝基铁氰化钠失效，③③大量维生素大量维生素C，，④④糖尿病酮症酸中毒者肾功能严重受损而肾阈值升高糖尿病酮症酸中毒者肾功能严重受损而肾阈值升高时，尿酮体可减少，出现加阴性时，尿酮体可减少，出现加阴性⑤⑤乙酰乙酸和丙酮不稳定，易分解或挥发导致假阴性乙酰乙酸和丙酮不稳定，易分解或挥发导致假阴性（二）（二）GerhardtGerhardt法：法：尿中乙酰乙酸的检测：尿中乙酰乙酸的检测：   试验原理：尿液中的乙酰乙酸与氯化高铁作用形成赭红试验原理：尿液中的乙酰乙酸与氯化高铁作用形成赭红试验原理：尿液中的乙酰乙酸与氯化高铁作用形成赭红试验原理：尿液中的乙酰乙酸与氯化高铁作用形成赭红色（酒红色）乙酰乙酸铁化合物色（酒红色）乙酰乙酸铁化合物色（酒红色）乙酰乙酸铁化合物色（酒红色）乙酰乙酸铁化合物vv该法对乙酰乙酸测定的敏感度为该法对乙酰乙酸测定的敏感度为该法对乙酰乙酸测定的敏感度为该法对乙酰乙酸测定的敏感度为700700700700mg/Lmg/Lmg/Lmg/L，，，，尿液久置后尿液久置后尿液久置后尿液久置后乙酰乙酸可转变为丙酮，使结果偏低。

乙酰乙酸可转变为丙酮，使结果偏低乙酰乙酸可转变为丙酮，使结果偏低乙酰乙酸可转变为丙酮，使结果偏低vv尿液中的酚类、安替比林、水杨酸盐和重碳酸钠等药尿液中的酚类、安替比林、水杨酸盐和重碳酸钠等药尿液中的酚类、安替比林、水杨酸盐和重碳酸钠等药尿液中的酚类、安替比林、水杨酸盐和重碳酸钠等药物可呈假阳性反应物可呈假阳性反应物可呈假阳性反应物可呈假阳性反应附：附：β -β -羟丁酸检测羟丁酸检测( (分光光度法）：分光光度法）：β -β -羟丁酸羟丁酸+NAD +NAD 乙酰乙酸乙酰乙酸 +NADH +NADH ( (烟碱辅酶腺嘌呤二核苷酸烟碱辅酶腺嘌呤二核苷酸 ) ) 在乳酸脱氢酶抑制剂存在下，加入在乳酸脱氢酶抑制剂存在下，加入β -β -羟丁酸脱羟丁酸脱氢酶和氢酶和NADNAD，，测定测定340nm340nm NADHNADH增加的速度增加的速度β -羟丁酸羟丁酸    脱氢酶脱氢酶意义：意义：意义：意义： β -β -羟丁酸的肾阈值比较高，如尿中出羟丁酸的肾阈值比较高，如尿中出现较多现较多β -β -羟丁酸表明酮血症加重表明酮血症加重。

二、临床意义v1. 糖尿病酮症酸中毒糖尿病酮症酸中毒①①早期诊断早期诊断 ②②治疗监测治疗监测 ③③新生儿：新生儿：出现尿酮体强阳性，应怀疑为遗传性疾病出现尿酮体强阳性，应怀疑为遗传性疾病v2.2.非糖尿病性酮症者：非糖尿病性酮症者：（（1 1））碳水化合物摄入不足碳水化合物摄入不足（（2 2））碳水碳水化合物丢失化合物丢失 v3．中毒：（．中毒：（1）如氯仿、乙醚麻醉后、磷中毒等（）如氯仿、乙醚麻醉后、磷中毒等（2）服用双）服用双胍类降糖药（如降糖灵）等胍类降糖药（如降糖灵）等v4.其他：其他：应激状态，感染性疾病如肺炎、伤寒、败血症、结应激状态，感染性疾病如肺炎、伤寒、败血症、结核等发热期，严重腹泻、呕吐包括妊娠反应性、全身麻醉后核等发热期，严重腹泻、呕吐包括妊娠反应性、全身麻醉后等均可出现酮尿等均可出现酮尿v当一些原因引起肾糖阈下降时，尿中也可出现尿糖当一些原因引起肾糖阈下降时，尿中也可出现尿糖 这些原这些原因包括：因包括： 1.30%的孕妇会出现生理性肾糖阈下降；的孕妇会出现生理性肾糖阈下降； 2.另外肾另外肾小管病变也可导致肾糖阈下降（如家庭性肾性糖尿、范可尼小管病变也可导致肾糖阈下降（如家庭性肾性糖尿、范可尼综合症、肾小管酸中毒，葡萄糖重吸收障碍，肾病综合症时综合症、肾小管酸中毒，葡萄糖重吸收障碍，肾病综合症时有糖尿）；有糖尿）； 3.由于进食过多的半乳糖、甘露糖、果糖、乳糖由于进食过多的半乳糖、甘露糖、果糖、乳糖以及一些糖，在体内代谢失常时可出现相应的糖尿。

颅脑外以及一些糖，在体内代谢失常时可出现相应的糖尿颅脑外伤、脑血管意外、急性心肌梗塞等，由于肾上腺素释放出现伤、脑血管意外、急性心肌梗塞等，由于肾上腺素释放出现应激性糖尿应激性糖尿 4.尿酸、维生素尿酸、维生素C、葡萄糖醛酸，或一些随尿、葡萄糖醛酸，或一些随尿排泄的药物，异烟肼、青霉素、强心甙、噻嗪类利尿剂，在排泄的药物，异烟肼、青霉素、强心甙、噻嗪类利尿剂，在尿中浓度升高时，使尿糖假阳性尿中浓度升高时，使尿糖假阳性。