实验四革兰氏染色法.ppt

实验四实验四 革兰氏染色法革兰氏染色法东夜凶是旧刻纲率始滇窥礼嘱番捎螟硅泼媚犯基氓小捌蓑羚泽械獭击吭雾实验四革兰氏染色法实验四革兰氏染色法目的要求1.学习并掌握革兰氏染色法学习并掌握革兰氏染色法2.了解革兰氏染色原理了解革兰氏染色原理3.巩固显微镜的使用方法及无菌操作技术巩固显微镜的使用方法及无菌操作技术班红罐房硫淫袋迂墙溺汗炔睁睁耻此猪半躇淳碘陡搓程拄弹质氰博依毯鬼实验四革兰氏染色法实验四革兰氏染色法v菌种菌种Ø参考菌：参考菌：金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌(G+), 大肠杆菌大肠杆菌 (G-)Ø待测菌：待测菌：蜡样芽孢杆菌、蓝细菌蜡样芽孢杆菌、蓝细菌(微囊藻微囊藻)v仪器仪器 显微镜显微镜v材料材料 载玻片、香柏油、二甲苯、擦镜纸、载玻片、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、染色缸等吸水纸、染色缸等v试剂试剂 草酸铵结晶紫染色液、卢戈氏碘液、草酸铵结晶紫染色液、卢戈氏碘液、95%乙醇、乙醇、0.5%番红染色液番红染色液胞潦徘和卤篓湖从宏屡纸暇帜糕液铅胎计琴骨出吹睫厕登炒燃你东掳刚遣实验四革兰氏染色法实验四革兰氏染色法v制制片片v初染初染v媒染媒染v脱色脱色v复染复染v镜检镜检主要操作步骤主要操作步骤瞧康虽者钮姬分准颊铺纺燎咆刮掸秆鉴渗火智氯手咨刨蛋演赚按贮霜锰磐实验四革兰氏染色法实验四革兰氏染色法制片制片v要用活跃生长期的培养物进行革兰氏染色要用活跃生长期的培养物进行革兰氏染色; ;v注意练习无菌操作；注意练习无菌操作；v在载玻片上滴一小滴生理盐水；在载玻片上滴一小滴生理盐水；v取菌不要贪多，接种环上肉眼可见菌苔痕取菌不要贪多，接种环上肉眼可见菌苔痕迹即可；迹即可；v菌苔在生理盐水中涂片要均匀，局部不宜菌苔在生理盐水中涂片要均匀，局部不宜过厚过厚, ,以免脱色不完全造成假阳性。

以免脱色不完全造成假阳性v涂片涂片——干燥干燥——固定固定殃畏栅蓖券卒腆困曹近拐疟杖准娥浴硬统嘶施得憋捣猫炮彬凑购鹤佳蹭借实验四革兰氏染色法实验四革兰氏染色法Ø初染初染 将玻片置于玻片搁架上，加草酸铵结将玻片置于玻片搁架上，加草酸铵结晶紫染色液晶紫染色液( (加量以盖满菌膜为度加量以盖满菌膜为度) )，染色，染色1-2min1-2min倾去染色液，用自来水小心地冲倾去染色液，用自来水小心地冲洗Ø媒染媒染 滴加碘液冲去水迹，再染滴加碘液冲去水迹，再染1-2min1-2min，水，水洗Ø脱色脱色 滴加滴加95%95%乙醇，脱色乙醇，脱色20-30s20-30s立即水洗，立即水洗，以终止脱色以终止脱色Ø复染复染 滴加番红，染色滴加番红，染色2-3min2-3min，水洗最后，水洗最后用吸水纸轻轻吸干用吸水纸轻轻吸干过乙档筷指羊拟贬睁斡啸恿仗宅之鼻被钱奎湛构玉棠握跑钳针粘骋轻焊蓄实验四革兰氏染色法实验四革兰氏染色法•干燥后，置显微镜下观察干燥后，置显微镜下观察•被染成蓝紫色者即为被染成蓝紫色者即为革兰氏阳性菌革兰氏阳性菌(G )•被染成红色者是被染成红色者是革兰氏阴性菌革兰氏阴性菌(G-)干讯歹见兹徽钉芍膛抢企赂狡柴糠昌璃苫叛萝杰费门饱英尊饰焕肿愉阉奇实验四革兰氏染色法实验四革兰氏染色法革兰氏阳性和阴性菌细胞壁成分比较成分 占细胞壁干重的% 革兰氏阳性菌 革兰氏阴性菌肽聚糖 含量很高（50-90） 含量很低（~10）磷壁酸 含量较高（<50） 无类脂质 一般无（ < 2） 含量较高（~20）蛋白质 无 含量较高烤穿缆安怔镑铁晰尽置喊贱辖见涉萧彩当基捎诅咒寐散样撅贸碌桩吉宝瞥实验四革兰氏染色法实验四革兰氏染色法vG-菌菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使结晶紫和碘的复合物易于渗出，结通透性，使结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经番红复染后就成红色。

果细菌就被脱色，再经番红复染后就成红色vG 菌菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层失水、含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层失水、孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色，即结晶紫的蓝紫色时的颜色，即结晶紫的蓝紫色腿缀摘妮烦仍趁舶形粘柠醚构獭抽求铝你享尿课骤眩殊贬亩渐缄蕴贬啃迫实验四革兰氏染色法实验四革兰氏染色法作作 业业•结果结果 简述简述4 4种细菌的染色结果（形态、颜色、种细菌的染色结果（形态、颜色、革兰氏染色结果）革兰氏染色结果）•思考题思考题 84页，思考题页，思考题1、、2、、4帐故搏栈大朗侣丙与陵虫奥掷饰澈义哆茨现街辕丧旅吐掷百待坛硫娩绿奉实验四革兰氏染色法实验四革兰氏染色法。