光谱分析2ppt课件.ppt

任务一、了解光学分析法基本知识 任务二、紫外－可见分光光度法• 实训一、吸收曲线的绘制（721型光光度计手动绘制、UV1240自动绘制）• 实训二、吸光系数的测定（721型光光度计手动测定、UV1240自动测定）• 实训三、邻菲啰啉显色可见分光光度法测定水中微量Fe含量项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法1 任务一、了解光学分析法基本知识 一、知识点： 1、光学分析法：以电磁辐射为测量信号,从而获得物质组成、结构等定性或定量信息分析的方法 2、分光光度法：利用待测物质受到光的作用后，根据物质对光的吸收程度不同，而对物质进行定性或定量信息分析的方法 3、光的性质 （1）电磁辐射电磁辐射（电磁波）：（电磁波）：•￿￿￿￿￿￿￿￿不需要任何物质作传播媒介，以接近光速（在真空中为光速）传播的能量不需要任何物质作传播媒介，以接近光速（在真空中为光速）传播的能量光是一种电磁光是一种电磁辐射 ￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法2*•电磁辐射的基本性质电磁辐射的基本性质￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿电磁辐射具有波粒二象性：电磁辐射具有波粒二象性：￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿波动性：具有一定的频率波动性：具有一定的频率νν（（HZ）、强度、速度，能透过物质）、强度、速度，能透过物质　　　　　　￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿c =λν￿=ν/σλν￿=ν/σ￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿微粒性：微粒性：￿ ￿“光光”￿ ￿因而叫光子，具有质量，能产生光电效应。

因而叫光子，具有质量，能产生光电效应•　　　　￿￿￿￿￿￿E￿=￿hν￿=￿h￿E￿=￿hν￿=￿h￿c /λλ•　　Ｘ射线等，因波长小，则能量大，为高辐射，微粒性突出　　Ｘ射线等，因波长小，则能量大，为高辐射，微粒性突出•　　　　￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿c：：光速；光速；λλ：：波长；波长；1nm=10-3μm=10-6mm=10-9m￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿νν：：频率；频率；￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿σ￿σ￿（（ΣΣ））￿ ￿：波数：波数￿ ￿；；　　￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿E￿E￿：能量：能量(eV)；；￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿h h：普朗克常数：普朗克常数，，3*电磁波谱：按各种电磁辐射的波长、频率大小顺序进行排列电磁波谱：按各种电磁辐射的波长、频率大小顺序进行排列 　光学光谱区（中辐射区）波谱区（低辐射区）高辐射区4*4、电磁辐射与物质的相互作用 (1) (1) 吸收吸收 多数物质处于基态，当电磁辐射能恰好等于两能级的能量差时，物质就会选择性数物质处于基态，当电磁辐射能恰好等于两能级的能量差时，物质就会选择性吸收特定频率的辐射能，并从低能级跃迁到高能级；吸收的能量、频率用由普朗克方程求得吸收特定频率的辐射能，并从低能级跃迁到高能级；吸收的能量、频率用由普朗克方程求得 (2) (2) 发射发射 受激发的粒子通过弛豫可回到低能态或基态，同时将吸收的能量以光的形式释受激发的粒子通过弛豫可回到低能态或基态，同时将吸收的能量以光的形式释放出，产生发射光谱；放出，产生发射光谱； (3) (3) 散射散射 丁铎尔散射和分子散射；丁铎尔散射和分子散射； (4) (4) 折射折射 折射是光在两种介质中的传播速度不同；折射是光在两种介质中的传播速度不同； (5) (5) 反射反射 (6) (6) 干涉：干涉： 干涉现象；干涉现象； (7) (7) 衍射：衍射： 光绕过物体而弯曲地向他后面传播的现象；光绕过物体而弯曲地向他后面传播的现象； (8) (8) 偏振：偏振： 只在一个固定方向有振动的光称为平面偏振光。

只在一个固定方向有振动的光称为平面偏振光 5*5、原子光谱与分子光谱、原子光谱与分子光谱 分子光谱复杂，光谱图呈带状，电子跃迁时带有分子振动和分子转分子光谱复杂，光谱图呈带状，电子跃迁时带有分子振动和分子转动能级跃迁；动能级跃迁； 原子光谱简单，为线状光谱，由原子内、外层电子跃迁产生原子光谱简单，为线状光谱，由原子内、外层电子跃迁产生  6（２）原子发射光谱（（２）原子发射光谱（AES）；）； 以火焰、电弧、等离子炬等作为光源，使气态原子的外层电子受激发射出特征光以火焰、电弧、等离子炬等作为光源，使气态原子的外层电子受激发射出特征光谱进行定量分析的方法谱进行定量分析的方法原子光谱原子光谱 （１）原子吸收光谱（（１）原子吸收光谱（AAS）：基于原子外层电）：基于原子外层电子跃迁；子跃迁； 利用特殊光源发射出待测元素的共振线，并利用特殊光源发射出待测元素的共振线，并将溶液中离子转变成气态原子后，测定气态原子将溶液中离子转变成气态原子后，测定气态原子对共振线吸收而进行的定量分析方法对共振线吸收而进行的定量分析方法7•（３）原子荧光分析法（（３）原子荧光分析法（AFS）：）：￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿气态原子吸收特征波长的辐射后，外层电子从基态或低能态跃迁到高能态，在气态原子吸收特征波长的辐射后，外层电子从基态或低能态跃迁到高能态，在10-8s后跃回基态或低能态时，发射出与吸收波长相同或不同的荧光辐射，在与光后跃回基态或低能态时，发射出与吸收波长相同或不同的荧光辐射，在与光源成源成90度的方向上，测定荧光强度进行定量分析的方法。

度的方向上，测定荧光强度进行定量分析的方法•（４）（４）X射线荧光分析法（射线荧光分析法（XFS）：）：￿￿￿￿￿￿￿￿基于原子内层电子跃迁的原子受高能辐射，其内层电子发生能级跃迁，发射出特基于原子内层电子跃迁的原子受高能辐射，其内层电子发生能级跃迁，发射出特征征X射线（射线（￿ ￿X射线荧光），测定其强度可进行定量分析射线荧光），测定其强度可进行定量分析8分子光谱（为带状光谱）：分子光谱（为带状光谱）：￿￿￿￿￿￿￿￿•（１）（１）￿ ￿紫外光谱法（紫外光谱法（UV）；）；•（２）红外光谱法（（２）红外光谱法（IR）；）；•（３）分子荧光光谱法（（３）分子荧光光谱法（MFS）；）；￿ ￿•（４）分子磷光光谱法（（４）分子磷光光谱法（MPS）；）；•（５）核磁共振与顺磁共振波谱（（５）核磁共振与顺磁共振波谱（N））•￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿分子吸收光谱的产生：分子吸收光谱的产生：•￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿基于分子中电子能级、振动、转能级跃迁产生基于分子中电子能级、振动、转能级跃迁产生•（（1）物质分子内部三种运动形式：）物质分子内部三种运动形式：•￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿电子运动：原子核外电子相对于原子核的运动；电子运动：原子核外电子相对于原子核的运动；•￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿振动：原子核在其平衡位置附近的相对振动；振动：原子核在其平衡位置附近的相对振动；•￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿转动：分子本身绕其重心的转动。

转动：分子本身绕其重心的转动•（（2）分子具有三种不同能级：）分子具有三种不同能级：•￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿电子能级、振动能级和转动能级三种能级都具有相应的能量电子能级、振动能级和转动能级三种能级都具有相应的能量•￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿分子的内能＝电子能量分子的内能＝电子能量Ee +振动能量振动能量Ev +转动能量转动能量Er￿￿￿￿￿￿•￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿即即:￿￿:￿￿E＝＝Ee+Ev+Er，且，且Εe>ΔΕv>ΔΕr910* 转动能级间的能量差ΔΕr：0.005～0.0２5eV(电子伏特)，如果用能量很低的远红外光照射分子，分子吸收远红外光跃迁产生远红外吸收光谱或分子转动光谱，波长范围 50m—1000m ） 振动能级的能量差ΔΕv约为：0.0２5～１eV，跃迁产生近、中红外吸收光谱或分子振动光谱，波长范围 0.8 m 50 m , ） 电子能级的能量差ΔΕe较大，为1～20eV电子跃迁产生紫外—可见吸收光谱或分子的电子光谱，吸收光谱在紫外—可见光区（200—４００—800nm） １１ m ＝＝ 10 3 m m m ＝＝ 10 6   m m ＝＝ 10 9 nmnm = 10 12 pmpm项目二项目二项目二项目二 光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量11•6、吸收光谱•　　具有连续谱的光波通过物质样品时，处于基态的样品原子或分子将吸收特定波长的光而发生能级跃迁，于是在连续谱的背景上出现相应的暗线或暗带，称为吸收光谱。

•￿￿￿￿￿￿电子能级间跃迁的同时，总伴随有振动和转动能级间的跃迁即电子光谱中总包含有振电子能级间跃迁的同时，总伴随有振动和转动能级间的跃迁即电子光谱中总包含有振动能级和转动能级间跃迁产生的若干谱线而呈现宽谱带动能级和转动能级间跃迁产生的若干谱线而呈现宽谱带￿项目二项目二项目二项目二 光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量12 7 7、单色光和互补光、单色光和互补光 单色光：单波长的光单色光：单波长的光(由具有相同能量的光子组成由具有相同能量的光子组成)　　 互补光：共同组成白光的两种颜色的光互补光：共同组成白光的两种颜色的光白光橙光青蓝光青蓝光红光红光青光青光黄光蓝光紫光绿光绿光项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法13白白 光光(太阳光太阳光)红外光（无色）红外光（无色）可见光（有色）可见光（有色）:肉眼能感觉到的光，波长肉眼能感觉到的光，波长400-780 nm红、橙、黄、红、橙、黄、绿、青、蓝、紫光绿、青、蓝、紫光紫外光（无色）；近紫外区，波长紫外光（无色）；近紫外区，波长200 - 400 nm的光的光.远紫外区，波长远紫外区，波长10 - 200 nm的光的光项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法8 8、、复合光复合光 由各种单色光组成的光。

如白光由各种单色光组成的光如白光14 光的互补：蓝光的互补：蓝 黄黄项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法9 9、物质颜色的产生、物质颜色的产生 （物质分子对光的选择性吸收）（物质分子对光的选择性吸收）例：高锰酸钾可选择性吸收绿光，因而白光中剩下互补光例：高锰酸钾可选择性吸收绿光，因而白光中剩下互补光—紫色光，溶液呈紫色紫色光，溶液呈紫色15白色光通过无色溶液白色光通过无色溶液　　　溶液呈无色透明溶液呈无色透明白色光通过无色溶液白色光通过无色溶液　　　溶液呈黑色溶液呈黑色不吸收不吸收全吸收全吸收白色光通过无色溶液白色光通过无色溶液　　　溶液呈互补光色溶液呈互补光色部分吸收（有选择性）部分吸收（有选择性）项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法1610、光的吸收定律 朗伯－比尔定律￿￿￿￿￿￿￿￿布格(Bouguer)和朗伯(Lambert)先后于1729年和1760年阐明了光的吸收程度和吸收层厚度的关系 A∝b 1852年比耳(Beer)又提出了光的吸收程度和吸收物浓度之间也具有类似的关系。

A∝ c 二者的结合称为朗伯—比耳定律17 A＝lg（I0/It)= εεb c 式中： A：吸光度；描述溶液对光的吸收程度； b：液层厚度(光程长度)，通常以cm为单位； c：溶液的摩尔浓度，单位mol·L－１ εε：摩尔吸光系数：摩尔吸光系数εε在数值上等于浓度为1 mol/L、液层厚度为1cm时该溶液在某一波长下的吸光度 单位 L·mol－１·cm－１ A A＝＝lglg（（I I0/ /I It)= )= ＫＫ b cb c 式中：ＫＫ与与εε的关系为：的关系为： ＫＫ = =εε/M /M （（M M为摩尔质量）为摩尔质量） c c：：溶液的浓度，单位溶液的浓度，单位g g·L L－１－１ ＫＫ：质量吸光系数：当于浓度为：质量吸光系数：当于浓度为1 1 g/Lg/L、、液层厚度为液层厚度为1 1cmcm时，溶液在某一波长下的吸光度。

时，溶液在某一波长下的吸光度单位单位L L·g g－１－１·cmcm－１－１ 百分吸光系数：百分吸光系数： 浓度为浓度为1g/100ml1g/100ml（（1%1%））, ,液层厚度为液层厚度为1 1cmcm时，溶液在某一波长下的吸光度时，溶液在某一波长下的吸光度项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法18 透光率和吸光度的关系 透光率：描述入射光透过溶液的程度描述入射光透过溶液的程度: :• 透射光的强度It与入射光强度I0之比称为透光率(transmittance). 用T表示 T = I t  / I0￿￿吸光度：透光率的负对数称为吸光度，用符号A表示 A ＝＝ －－lg T A愈大，溶液对光的吸收愈多项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法19 物质对光的吸收偏离朗伯物质对光的吸收偏离朗伯—比耳定律的原因比耳定律的原因 标准曲线法测定未知溶液的浓度时，发现：标准曲线常发生弯曲（尤其当溶液浓度较高时），标准曲线法测定未知溶液的浓度时，发现：标准曲线常发生弯曲（尤其当溶液浓度较高时），这种现象称为对朗伯这种现象称为对朗伯— —比耳定律的偏离。

比耳定律的偏离 引起偏离的因素（两大类）：引起偏离的因素（两大类）： 1 1、、 物理性因素，即仪器的非理想引起的；物理性因素，即仪器的非理想引起的； 2 2、化学性因素化学性因素项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法20 物理性因素物理性因素 分光光度计只能获取近乎单色的狭窄光带分光光度计只能获取近乎单色的狭窄光带 因而，复合光可导致对朗伯因而，复合光可导致对朗伯— —比耳定律的正或负偏离非单色光、杂散光、非平行入射光都会比耳定律的正或负偏离非单色光、杂散光、非平行入射光都会引起对朗伯引起对朗伯— —比耳定律的偏离，最主要的是非单色光作为入射光引起的偏离应选择比较好的单比耳定律的偏离，最主要的是非单色光作为入射光引起的偏离应选择比较好的单色器 化学性因素化学性因素 朗伯朗伯— —比耳定律的假定：所有的吸光质点之间不发生相互作用；假定只有在稀溶液比耳定律的假定：所有的吸光质点之间不发生相互作用；假定只有在稀溶液( (c<10-c<10-2mol/L)2mol/L)时才基本符合。

时才基本符合 当溶液浓度当溶液浓度c >10 c >10 －－2 2 mol/L mol/L 时，吸光质点间可能发生缔合等相互作用，直接影响了对光的吸时，吸光质点间可能发生缔合等相互作用，直接影响了对光的吸收故：朗伯收故：朗伯— —比耳定律只适用于稀溶液比耳定律只适用于稀溶液 项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法21项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法1111、吸收光谱曲线、最大吸收波长、吸收光谱曲线、最大吸收波长 吸收曲线：　　将不同波长的单色光依次通过溶液，测量溶液的吸光度A，以波长为横坐标，吸光度A为纵坐标作图，得吸收曲线最大吸收波长 吸收光谱中，吸光度最大处的波长为最大吸收波长，用max表示 定性鉴别物质的依据——max 定量分析的依据——不同浓度的溶液，max不变，浓度与峰值成正比，这是进行定量分析的依据右图：四种浓度的KMnO4的吸收曲线22讨论：讨论：￿￿￿￿￿￿￿￿（（1 1）同一种物质，对不同波长光的吸光度不同不同物质的）同一种物质，对不同波长光的吸光度不同不同物质的λmax有有时可能相同，但时可能相同，但εmax不一定相同。

不一定相同￿￿￿￿￿￿￿￿（（2 2）同一种物质，浓度不同，其吸收曲线形状相似）同一种物质，浓度不同，其吸收曲线形状相似λmax不变￿￿￿￿￿￿￿￿（３）对于不同物质，它们的吸收曲线形状和（３）对于不同物质，它们的吸收曲线形状和λmax则不同23任务二、紫外－可见分光光度法 一、知识点： 分光光度计的结构构成 分光光度计的光路原理 分光光度计的类型及特点 240.5750.575光源单色器样品池检测器显示显示光源单色器样品室（吸收池）检测器信号显示器项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法25氘灯氘灯钨灯钨灯样样品品池池检测器检测器入射狭缝入射狭缝出射狭缝出射狭缝聚焦装置聚焦装置　透镜　透镜透镜透镜项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法261. 1. 光源光源 　　　是仪器中提供入射光的装置可以提供紫外或可见光　　　是仪器中提供入射光的装置可以提供紫外或可见光 具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。

常用光源有两种：常用光源有两种： （１）可见光源　（１）可见光源　　　　是热光源，发射的连续光谱的波长范围为　　　是热光源，发射的连续光谱的波长范围为　　　是热光源，发射的连续光谱的波长范围为　　　是热光源，发射的连续光谱的波长范围为400400～～800 nm800 nm A A A A、钨灯：光谱强度与灯丝温度有关钨灯：光谱强度与灯丝温度有关钨灯：光谱强度与灯丝温度有关钨灯：光谱强度与灯丝温度有关 B B B B、卤钨灯、卤钨灯、卤钨灯、卤钨灯（如（如加入加入加入加入I I I I2 2 2 2 叫碘钨灯）：叫碘钨灯）： 提高发光效率、光的强度、及使用寿命提高发光效率、光的强度、及使用寿命提高发光效率、光的强度、及使用寿命提高发光效率、光的强度、及使用寿命 　　项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法27（２）紫外光源　　　工作气体（氢气、氘气）在阴阳两极间放电，发射出1 16060～～375 nm375 nm波长范围的紫外连续光谱　　　　　　 A A、氢灯：、氢灯：根据阴阳极电压高低不同，又分为低压氢灯和高压氢灯。

B B、氘灯：、氘灯：现在多用氘灯，氘灯的辐射强度大于氢灯氘灯的辐射强度大于氢灯￿￿￿￿￿岛津岛津UV2450型、型、￿ ￿UV mini-1240型紫外可见分光光度计均具有碘钨灯和氘灯两种光源型紫外可见分光光度计均具有碘钨灯和氘灯两种光源可发射光的波长范围为：２００可发射光的波长范围为：２００—１０００１０００￿ ￿nm项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法28 2.2.单色器单色器 将光源发射的复合光分解成单色光，并可从中选出任意波长的单色光，这样一个光学系统将光源发射的复合光分解成单色光，并可从中选出任意波长的单色光，这样一个光学系统　　　　①①入射狭缝：　光源的光由此进入单色器，入射狭缝：　光源的光由此进入单色器，调节狭缝宽度可以调节入射光的强度调节狭缝宽度可以调节入射光的强度 ② ②准光装置：　使入射光成为平行光束（含透镜、反射镜）准光装置：　使入射光成为平行光束（含透镜、反射镜） ③ ③聚焦装置：　透镜或凹面反射镜，将分光后所得单色光聚焦至出射狭缝聚焦装置：　透镜或凹面反射镜，将分光后所得单色光聚焦至出射狭缝。

项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法29④④出射狭缝：　出射狭缝：　只让所需单色光通过，进入样品池只让所需单色光通过，进入样品池⑤⑤色散元件（棱镜色散元件（棱镜/光栅）：将复合光分解成单色光，光栅）：将复合光分解成单色光，•￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿•单色器部件最关键的部件单色器部件最关键的部件•　　　　￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿•利用不同波长的光有不同利用不同波长的光有不同￿ ￿的折射率而使复合光分开的光学元件的折射率而使复合光分开的光学元件•￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿•有石英棱镜、玻璃棱镜两种：有石英棱镜、玻璃棱镜两种：•　　　石英棱镜可用于紫外光区光谱的分光　　　石英棱镜可用于紫外光区光谱的分光•　　　玻璃棱镜只用于可见光区光谱的分光　　　玻璃棱镜只用于可见光区光谱的分光30f f入射狭缝入射狭缝入射狭缝入射狭缝准直镜准直镜准直镜准直镜棱镜单色器棱镜单色器棱镜单色器棱镜单色器聚焦物镜聚焦物镜聚焦物镜聚焦物镜聚焦面聚焦面聚焦面聚焦面出射狭缝出射狭缝出射狭缝出射狭缝项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法棱镜光路图棱镜光路图31入射狭缝入射狭缝入射狭缝入射狭缝准直镜准直镜准直镜准直镜平面衍射光栅平面衍射光栅平面衍射光栅平面衍射光栅聚焦物镜聚焦物镜聚焦物镜聚焦物镜出射狭缝出射狭缝出射狭缝出射狭缝f f项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法光栅光路图光栅光路图 利用光的衍射和干涉原理使复合光色散。

利用光的衍射和干涉原理使复合光色散32 3. 3. 样品室（样品室（吸收池）吸收池） 分光光度计中用来盛放溶液的容器分光光度计中用来盛放溶液的容器　 样品室放置吸收池（样品池、比色皿）和相应的池架附件样品室放置吸收池（样品池、比色皿）和相应的池架附件 吸收池主要有石英池和玻璃池两种：吸收池主要有石英池和玻璃池两种：　　　　 石英池：用于紫外区　　　石英池：用于紫外区　　　 玻璃池：用于可见区玻璃池：用于可见区　　比色皿的规格：用厚度（光束通过溶液的路径长度）表示：　　比色皿的规格：用厚度（光束通过溶液的路径长度）表示： 1mm 1mm、、2mm2mm、、5mm5mm、、1cm1cm、、2cm2cm、、4cm4cm　　定量测定时，所使用的一组样品池的规格要完全一致　　定量测定时，所使用的一组样品池的规格要完全一致 项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法33•4. 4. 检测器：通过吸收池的光转换为光电流，再经放大输入指示器，然后显示检测器：通过吸收池的光转换为光电流，再经放大输入指示器，然后显示。

　　（　　（1 1）光电转换器：）光电转换器： 利用光电效应将透过吸收池的光信号转化为可以测量的电信号的器件应利用光电效应将透过吸收池的光信号转化为可以测量的电信号的器件应用波段用波段190190－－1100nm1100nm 光电转换器的类型光电转换器的类型光电转换器的类型光电转换器的类型有：有：　　　　光电管（　　　　光电管（64006400型火焰光度计的检测器上使用）型火焰光度计的检测器上使用）　　　　 光电倍增管（光电倍增管（ UV24 UV24５５0 0型紫外可见分光光度计上用）型紫外可见分光光度计上用） 二极管阵列检测器二极管阵列检测器　　　　 光电晶体管（光电晶体管（ UVmini1240UVmini1240型紫外可见分光光度计上用型紫外可见分光光度计上用硅二极管硅二极管硅二极管硅二极管））　　　在分光光度计中常用检测器：光电管、光电倍增管 （（2 2）电导检测器）电导检测器　（　（3 3）热检测器）热检测器　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法34光电管　　￿￿￿光电管内装有一个阴极和丝状阳极，两极间加有高压。

　　￿￿阴极的凹面涂一层对光敏感的碱金属或碱金属氧化物，当光线照射时，阴极金属物质由于光电效应而发射出自由电子，在阴阳两极间高压电场作用下加速射向阳极而形成电流　　　光越强，放出的电子越多，电流就越强电流通过光电管负载电阻，即可变成电压信号，经放大后将信号输给信号显示装置项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法35光电倍增管　　　光电倍增管 与光电管结构上的差别： 在涂有光敏金属的阴极和阳极之间还有9-169-16个个倍增光敏阴极 　　　　　 当单色器分出的光照射到外加有负压的光敏阴极K上，轰击光敏材料，发射出一次光电子，一次光电子又射向第一倍增极（打拿极１），轰击出二次光电子，二次光电子又射向第二倍增极（打拿极２），轰击出更多的光电子，依次倍增，在最后放出的光电子，比最初增加106倍以上，这此电子最后射向阳极，形成电流　　　 最大电流可达 10μA，电流经负载电阻转变为电压信号送入放大器，经放大后将信号输入显示装置•￿ ￿项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法36二极管阵列检测器 微型紫外分光光度计常用二极管阵列检测器，体积小。

　　　二极管阵列检测器由集成在硅片上的几百个至上千个光敏二极管、场效应管及移位寄存器所组成项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法375. 5. 结果显示记录系统结果显示记录系统 检流计、数字显示、微机进行仪器自动控制和结果处理检流计、数字显示、微机进行仪器自动控制和结果处理项目二项目二项目二项目二 光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量38 项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法721型可见分光光度计　39721型可见分光光度计　（模型）项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法40项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法41722型可见分光光度计　项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法42项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法43日本岛津Uvmini-1240型紫外-可见分光光度计项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法44日本岛津UV2450型紫外可见分光光度计波长范围：190-900nm，双光束方式 光电倍增管检测器项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法45项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法46　　分光光度计的类型及特点分光光度计的类型及特点　　　　根据仪器光学系统的不同，紫外分光光度计分为有两类：　　　　单波长分光光度计　　　　双波长分光光度计　　　　　　单光束分光光度计双光束分光光度计项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法——知识拓展知识拓展知识拓展知识拓展47•1. 1. 单光束单光束分光光度计•　　由一束经过单色器的光，轮流通过参比溶液和样品溶液，以进行吸光强度测量。

　　由一束经过单色器的光，轮流通过参比溶液和样品溶液，以进行吸光强度测量 　　特点是：结构简单　　特点是：结构简单 、价格便宜、价格便宜 ，适于在给定波长处测量吸光度或透光度，主要适，适于在给定波长处测量吸光度或透光度，主要适于做定量分析于做定量分析　　缺点是：测量结果受电源的波动影响较大，容易给定量结果带来较大误差，对光源　　缺点是：测量结果受电源的波动影响较大，容易给定量结果带来较大误差，对光源和检测器等电学组件的质量要求很高具有的稳定性和检测器等电学组件的质量要求很高具有的稳定性 主要有国产的主要有国产的721721型、型、 751751型型 、、岛津岛津UVmini-1240UVmini-1240型型项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法——知识拓展知识拓展知识拓展知识拓展48单波长单光束分光光度计结构及原理示意图0.575光源单色器样品池检测器显示参比池项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法——知识拓展知识拓展知识拓展知识拓展49￿　　2 2、双光束紫外分光光度计、双光束紫外分光光度计    　　　光源发出的复合光，经单色器色散为单色光，此单色光经过切光器，将其分成　　　光源发出的复合光，经单色器色散为单色光，此单色光经过切光器，将其分成S S、、R R两束光线，并分别通过样品池和参比池，各自到达检测器（光电倍增管），并把来自两两束光线，并分别通过样品池和参比池，各自到达检测器（光电倍增管），并把来自两光束的电信号加以比较，获得吸光度的差值光束的电信号加以比较，获得吸光度的差值ΔAΔA，进行定量分析。

进行定量分析双光束分光光度计的特点：双光束分光光度计的特点：•因样品溶液、空白溶液的对比测定几乎同时进行，不会受到光源与检测系统漂移产生的因样品溶液、空白溶液的对比测定几乎同时进行，不会受到光源与检测系统漂移产生的影响，可消除背景干扰但光路复杂、价格高　如日本岛津影响，可消除背景干扰但光路复杂、价格高　如日本岛津UV2450UV2450型紫外可见分光光型紫外可见分光光度计度计项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法——知识拓展知识拓展知识拓展知识拓展50差值ΔA光源单色器吸收池检测器显示切光器　　　单波长双光束分光光度计结构及原理图参比池双道双道项目二项目二项目二项目二 光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量——知识拓展知识拓展知识拓展知识拓展51　　　　3 3、双波长、双波长分光光度计 光源辐射通过两个单色器，分出两束不同波长的光光源辐射通过两个单色器，分出两束不同波长的光( (λλ1 1、、λλ2 2) ) ，经切光器并束后于不，经切光器并束后于不同时间、交替通过盛有同时间、交替通过盛有“空白空白+ +试样试样”溶液的吸收池（无需参比池），而后到达检测器，经溶液的吸收池（无需参比池），而后到达检测器，经仪器的电子学装置直接获得两光束的吸光度之差仪器的电子学装置直接获得两光束的吸光度之差ΔAΔA进行定量分析。

　　　进行定量分析　　　项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法——知识拓展知识拓展知识拓展知识拓展52单色器..吸收池检测器λ1λ1λ2λ2双波长分光光度计结构及原理图双波长分光光度计结构及原理图单色器1切光器切光器项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法——知识拓展知识拓展知识拓展知识拓展53•任务二、紫外－可见分光光度法•知识点：分析条件的选择•技能点：•实训一、吸收曲线的绘制（721型光光度计手动绘制、UV1240自动绘制）•实训二、吸光系数的测定（721型光光度计手动测定、UV1240自动测定）•实训三、物质含量测定• 邻菲啰啉显色可见分光光度法测定水中微量Fe含量 54•知识点：分析条件的选择•一、显色反应条件的选择一、显色反应条件的选择•二、仪器测定条件的选择二、仪器测定条件的选择•三、参比溶液的选择三、参比溶液的选择一、显色反应条件的选择一、显色反应条件的选择•1.1.显色反应要求显色反应要求•￿￿￿￿￿￿￿￿显色剂选择性好，显色反应灵敏度高、生成物稳定、显色剂在测定波长处无明显显色剂选择性好，显色反应灵敏度高、生成物稳定、显色剂在测定波长处无明显吸收，显色剂与产物的颜色差异明显，要求两种有色物之间最大吸收波长之差吸收，显色剂与产物的颜色差异明显，要求两种有色物之间最大吸收波长之差——“对对比度比度””：：△△ ￿ ￿>￿60>￿60nm。

55显色剂显色剂 无机显色剂：硫氰酸盐、钼酸铵、过氧化氢等几种无机显色剂：硫氰酸盐、钼酸铵、过氧化氢等几种 有机显色剂：种类繁多有机显色剂：种类繁多（１）（１）三苯甲烷类三苯甲烷类：铬天青铬天青S S( (AlAl3 3+)+)、二甲酚橙、二甲酚橙( (FeFe3 3+ +、、CuCu2 2+ +、、BiBi3 3+ +、、PbPb2 2+)+)等等（２）偶氮类显色剂（２）偶氮类显色剂：本身是有色物质，生成配合物后，颜色发生明显变化；具有性质本身是有色物质，生成配合物后，颜色发生明显变化；具有性质稳定、显色反应灵敏度高、选择性好、对比度大等优点，应用最广泛稳定、显色反应灵敏度高、选择性好、对比度大等优点，应用最广泛如偶氮胂如偶氮胂ⅢⅢ( (测测CaCa2 2+ +、、PbPb2 2+)+)、邻菲罗啉（、邻菲罗啉（FeFe2 2+ +、、CuCu2 2+ +））等等 562.2.显色剂浓度、用量显色剂浓度、用量 吸光度吸光度A A与显色剂用量与显色剂用量CRCR的关系会出现的关系会出现如图所示的几种情况选择曲线变化平坦处如图所示的几种情况选择曲线变化平坦处。

3.3.溶液的酸度溶液的酸度 在相同实验条件下，分别测定不同在相同实验条件下，分别测定不同pHpH值条件下显色溶液的吸光度选择曲值条件下显色溶液的吸光度选择曲线中吸光度较大且恒定的平坦区所对应的线中吸光度较大且恒定的平坦区所对应的pHpH范围有色物本身是一种配合物有色物本身是一种配合物4.4.显色时间与温度显色时间与温度 实验确定，一般５实验确定，一般５—１０１０min.min.有的在常温＼有的要加热，应保持标准系列有的在常温＼有的要加热，应保持标准系列与样品测定一致．与样品测定一致．5.5.溶剂：溶剂： 一般尽量采用有机溶剂测定一般尽量采用有机溶剂测定. .提高有色物质的稳定性．提高有色物质的稳定性．576 6、显色反应中的共存离子的干扰及消除、显色反应中的共存离子的干扰及消除•干扰：干扰： 生成有色物质．使结果偏高生成有色物质．使结果偏高 共存离子本身有色共存离子本身有色 消耗显色剂，妨碍正常显色消耗显色剂，妨碍正常显色•消除方法：消除方法： （（1 1）加入掩蔽剂）加入掩蔽剂 选择掩蔽剂的原则是：掩蔽剂不与待测组分反应；掩蔽剂本身及掩蔽剂与干扰组分的反应选择掩蔽剂的原则是：掩蔽剂不与待测组分反应；掩蔽剂本身及掩蔽剂与干扰组分的反应产物不干扰待测组分的测定。

产物不干扰待测组分的测定 例如：用铬天菁例如：用铬天菁S S光度法测定光度法测定AlAl3+3+时，加入抗坏血酸作掩蔽剂将时，加入抗坏血酸作掩蔽剂将FeFe3+3+还原为还原为FeFe2+2+，，消除消除FeFe3+3+的干扰 （（2 2）分离干扰离子（如萃取分离法））分离干扰离子（如萃取分离法） （（3 3）选择适当的显色反应条件（如酸度）和测定条件（如入射波长＼参比溶液）选择适当的显色反应条件（如酸度）和测定条件（如入射波长＼参比溶液） 58二、仪器测定条件的选择二、仪器测定条件的选择1.1.选择适当的入射波长选择适当的入射波长 一般应该选择一般应该选择λλmaxmax为入射光波长为入射光波长 如果如果λλmaxmax处有共存组分干扰时，则应考虑选择灵敏度稍低但能避免干扰的入射光波处有共存组分干扰时，则应考虑选择灵敏度稍低但能避免干扰的入射光波长59三、参比溶液选择三、参比溶液选择 通过适当组分的溶液作为调节仪器通过适当组分的溶液作为调节仪器 A A值（值（A=0A=0）或）或T(T(透光率透光率T=100%)T=100%)，以消除吸收池＼试剂等，以消除吸收池＼试剂等对入射光的吸收，使测得的吸光度真正反映待测溶液的吸光强度。

对入射光的吸收，使测得的吸光度真正反映待测溶液的吸光强度参比溶液类型及选择原则：参比溶液类型及选择原则： ⑴ ⑴ 溶剂参比：如只有待测组分与显色剂的反应产物在测定波长处有吸收，可用溶剂作参比溶溶剂参比：如只有待测组分与显色剂的反应产物在测定波长处有吸收，可用溶剂作参比溶液，以消除吸收池、试剂等因素的影响；液，以消除吸收池、试剂等因素的影响； ⑵ ⑵ 试剂参比：若显色剂或其它所加试剂在测定波长处也略有吸收，则按显色反应相同条件加试剂参比：若显色剂或其它所加试剂在测定波长处也略有吸收，则按显色反应相同条件加试剂、显色剂和溶剂，只是不加试样，是又叫试剂、显色剂和溶剂，只是不加试样，是又叫““试剂空白试剂空白””( (不加试样溶液不加试样溶液) )参比溶液参比溶液60 ⑶ ⑶ 试液（样品）参比：若待测试液中干扰组分在测定波长处有吸收，但不与显色剂起显色试液（样品）参比：若待测试液中干扰组分在测定波长处有吸收，但不与显色剂起显色反应，则可用反应，则可用““试样空白试样空白””( (不加显色剂的样品溶液不加显色剂的样品溶液) )作参比溶液；其它应加的试剂应与加显色作参比溶液；其它应加的试剂应与加显色剂的待测样品溶液同样进行。

剂的待测样品溶液同样进行 ⑷ ⑷ 褪褪色色参参比比（（平平行行操操作作参参比比））：：若若显显色色剂剂、、试试液液中中其其它它组组分分在在测测量量波波长长处处有有吸吸收收，，则则可可让让显色的试液加入适当褪色剂，将显色的待测液褪色作为参比溶液显色的试液加入适当褪色剂，将显色的待测液褪色作为参比溶液61四四. .选择适当的待测溶液浓度，以控制适宜的吸光度读数范围选择适当的待测溶液浓度，以控制适宜的吸光度读数范围 不同的透光度读数，产生的误差大小不同，浓度测量值的相对误差（不同的透光度读数，产生的误差大小不同，浓度测量值的相对误差（ΔΔc c/ /c c））不仅与仪不仅与仪器的透光度误差器的透光度误差ΔΔT T 有关，而且与其透光度读数有关，而且与其透光度读数T T 的值也有关的值也有关 用仪器测定时应尽量使溶液透光度值在：用仪器测定时应尽量使溶液透光度值在： T T %=20%=20～～65% 65% 吸光度吸光度 A A =0.70=0.70～～0.200.20 62实训一、吸收曲线的绘制（721型光光度计手动绘制、UV1240自动绘制） 一、721型分光光度计操作（1）在仪器尚未接通电源时，电表的指针必须位于“0”刻线上，若不在零点，则调节电表上零点校正螺丝，使指针至“0”。

（2）打开比色皿暗盒盖已关闭光门，打开电源开关，预热仪器20min3）将波长调节旋钮调至所需波长，将灵敏选择预置于“1”档4）用“0”透光率调节旋钮将仪器调节在透光率“0”处，常称此操作为调节机械零点项目二项目二项目二项目二 光谱分析法光谱分析法光谱分析法光谱分析法——仪器操作仪器操作仪器操作仪器操作63•（5）将装有溶液的比色皿放入比色皿架中盖上比色皿暗盒盖，此时光路开启让参比溶液置于光路上，用“100%”透光率调节旋钮使电表指针指在透光率100%位置（即A=0.00）（6）重复几次打开、关上比色皿暗盒盖，反复调整透光率“0”和“100%”,待指示稳定后，方可开始测量7）将待测溶液推入光路，读取吸光度读数后将比色皿暗盒盖打开8）每当改变波长测量时，必须重新校正透光率“0”和“100%”9）仪器使用完毕，取出比色皿，洗净、晾干关闭电源开关，拔下电源插头，复原仪器 项目二项目二项目二项目二 光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量——仪器操作仪器操作仪器操作仪器操作64（二） 自动绘制吸收曲线 仪器：岛津UV1240型紫外可见分光光度计 天津UV5501型紫外可见分光光度计 项目二项目二项目二项目二 光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量65项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量 —UVmini-1240 —UVmini-1240紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法2、仪器：岛津UV1240型紫外可见分光光度计 ＬＣＤ单元-----显示操作菜单和测量结果键盘：------输入操作指令和数值66岛津岛津UVmini-1240型紫外型紫外—可见分光光度计可见分光光度计仪器面板仪器面板67岛津岛津UVmini-1240UVmini-1240型型紫外—可见分光光度计仪器键盘键盘：•START/SFOP:参数设置好后,按下该健开始测定,或停止测定.•AUTO ZERO:将波长下的读数自动归零•GOTO WL:改变当前波长设置•ENTER:当输入数值(如波长),或显示模式,必须按下该健确认.•光标< . >(△):可选一个项目,左右移动液晶屏上的光标,左光标还用于输入负数.•功能键:与液晶屏显示的功能相对应•RETURN:可以从当前屏幕反回前一屏幕•LCD CONT:按该健同时按住光标健,可改变液晶屏幕显示的对比度.•PRINT:输出到打印机•数字键:输入数值•CE键:用该健清除数值输入的错误,重新输入数值68 UVmini-1240 UVmini-1240型紫外可见分光光度计的操作步骤型紫外可见分光光度计的操作步骤型紫外可见分光光度计的操作步骤型紫外可见分光光度计的操作步骤一、预备操作1、开机前确认样品室里没有样品或其他东西档住光路。

2、关好样品室，打开电源开关，仪器开始初始化，直至初始化画面上每一项都显示 “OK”3、仪器初始化完成并预热10分钟后，根据自己的检测需要按数字键选择相对应的测量模式• 光度模式：单点法测含量时选用• 光谱模式：测吸收曲线（最大吸收波长）时选用• 定量模式：多点法测含量时选用项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量 —UVmini-1240 —UVmini-1240紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法69二、系统设置操作 按数字键“5”进入系统设置模式，在“系统设置”模式下： 按数字键“1”进入启动程序设置 按数字键“2” 进入显示数据设置 按“3”进入光源设置，波长200－400nm设氘灯，波长400－800nm设钨灯，按“ENTER”键确认 按“5”进入时钟设置 按“6”进入蜂鸣设置项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量 —UVmini-1240 —UVmini-1240紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法70三、测定操作（一）绘吸收曲线、测最大吸收波长 ----光谱测定模式 ① 按“返回键”，在初始化画面上按按数字键“2”进入光谱测定模式。

② 在光谱测定模式下，按“1”，设定测定方式：有吸光度ABS/透光率T﹪/energy三种，选吸光度ABS，按 “ENTER”键确认 ③ 在光谱测定模式下，按“2”设定波长范围200-400 ④ 将空白样品置于样品室并关紧样品室，按“F1”仪器进行自动基线校正项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量 —UVmini-1240 —UVmini-1240紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法71⑤ 听到蜂鸣声表示已经校正基线，将空白溶液换成样品，关紧样品室，按“START/STOP”键，仪器开始自动扫描，测量样品在不同波长下的吸光度，屏幕上显示以波长为横坐标，以吸光度为纵坐标的吸收光谱曲线⑥ 听到蜂鸣声表示扫描完毕，按“F2”即得到峰表，显示峰检测，横坐标下即为最大吸收波长 Vc的最大吸收波长245nm）项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量 —UVmini-1240 —UVmini-1240紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法72 （二）单点法测物质含量 —吸光度模式、对照品比较法测定物质含量 ① 按“返回键”，在初始化画面上按数字键“1”进入光度测定模式 ② 按“GOTO WL”设定波长（被测物质的最大吸收波长）并按“ENTER”键确认。

③ 按相应的功能键“F1~F4”输入需要测定的参数 ④ 将装有空白样品的比色皿放入样品室，并关好样品室 ⑤ 按“AUTO ZERO”键进行自动调零 ⑥ 将空白样品拿出倒掉，分别装入标样/样品，并关紧样品室（仍是同一比色皿） ⑦ 按功能键F1切换测定物质的吸光度ABS，按“START/STOP”键，分别进行标样/样品测试，或按功能键F3后再按“START/STOP”键进入测试，得出待测吸光度A ⑧ 样品浓度的计算：CX=（AX/AS）CS （ %或g/ml）项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量 —UVmini-1240 —UVmini-1240紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法73对照品比较法特点： 能消除仪器误差，但需要对照品，美国药典多用此法，中国药典应用不多，主要有：水杨酸镁、阿莫西林、氨苄西林钠、贝诺酯对照品比较法实例： 精密称取贝诺酯药品0.0750g，用无水乙醇定容到50ml，再定量稀释200倍后，在240nm波长处测定其吸光度（设为0.5585）。

另取105℃干燥2hr的贝诺酯对照品0.0400g用无水乙醇定容到50ml，配成8.0μg/ml的对照品溶液(100倍)，同样测定其吸光度（设为0.5960），计算贝诺酯药品中贝诺酯的百分含量结果计算式：项目二项目二项目二项目二 光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量74•（二）单点法测物质含量• —吸光度模式、吸收系数法测定物质含量① 按“返回键”，在初始化画面上按数字键“1”进入 光度测定模式② 按“GOTO WL”设定波长（被测物质的最大吸收波长） 并按“ENTER”键确认③ 按相应的功能键“F1~F4”输入需要测定的参数④ 将装有空白样品的比色皿放入样品室，并关好样品室⑤ 按“AUTO ZERO”键进行自动调零⑥ 将空白样品拿出倒掉，装入样品，并关紧样品室 （仍是同一比色皿）⑦ 按功能键F1切换测定物质的吸光度ABS，按“START/STOP”键进行待测溶液测试，或按功能键F3后再按“START/STOP”键进入待测溶液测试，得出待测溶液的吸光度A75吸收系数法原理A=ECL C=A/EL项目二项目二项目二项目二 光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量76吸收系数法特点： 不需要对照品 ，英国药典多用此法，但仪器误差大（如波长、吸收池误差），中国药典多用此法实例： 精密称取VB12药片0.0075g，用水溶解，定容到50ml，再定量稀释5倍后，在361nm波长处测定其吸光度（设为 0.580）。

查中国药典知本品的吸光度为 计算其百分含量结果计算式：项目二项目二项目二项目二 光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量77项目二项目二项目二项目二 光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量⑧待测溶液浓度的计算：吸收系数法A=ECL C=A/EL78（三）多点法测物质含量（标准曲线法） 先配制一系列浓度少不同的标准溶液（成梯度），在同一条件下分别测定其A值，然后绘制其A—C图（工作曲线）再在同样条件下测定样品的A值，从A—C工作曲线上查出样品的C值，最后计算出样品的含量 特点： 不需知道 ， 对仪器要求不高 ，但操作麻烦，需要标准品项目二项目二项目二项目二 光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量79 标准曲线法测定物质的含量之标准曲线法测定物质的含量之标准曲线法测定物质的含量之标准曲线法测定物质的含量之 —UVmini-1240 —UVmini-1240紫外可见分光光度计操作紫外可见分光光度计操作紫外可见分光光度计操作紫外可见分光光度计操作1、定量设定 ① 按“返回键”，在初始化画面上----模式选择屏幕中选择<3.定量>， 显示仪器处于定量模式。

② 在定量模式下按1进入<1测定>，再选“1”单波长，再输入最大吸收波长, 按“ENTER”键确认 ③ 在定量模式下按“2”进入<2方法>定量方法设定，再按“3”设定多点校准， 再设定多点校准下的标准个数为“4”（一个空白样品，三个标样）， 按“ENTER”键确认 ④在定量模式下按3进入<测量次数>设定，输入1测定一次按“ENTER”键 确认，过原点：“是”，按“ENTER”键确认 ⑤ 在定量模式下按4进入<单位>设定，要与样品实际单位一致 ⑥ 在定量模式，屏幕下方出现“取得ABS值的方法？”这时按数字键2，选2802、测定 ① 定量方法设定后，按“START/STOP”键，屏幕上面出现出现标样表 ② 进入标样的浓度的输入，要求输入标样浓度值，依次输入一个空白溶液浓度（0.00）和三个标样的浓度值（ 8.0μg/ml 、16 μg/ml、24 μg/ml ），都按“ENTER”键确认 ③ 依次放入四个样品（一个空白和三个标样），每次按“START/STOP”键，依次测量出四个样品（1空白、3标样）的吸光度 ④ 换成待测样品放入比色池，再按“START/STOP”键，显示待测样品的吸光度和浓度。

或者按“F3”样品测定，再按“START/STOP”键同样进入待测样品的测定项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量 —UVmini-1240 —UVmini-1240紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法81天津天津UV5501型紫外可见分光光度计型紫外可见分光光度计[SETλ][start][ESC/STOP]ENTERF1F2F3F4[0Abs/100%T][Save]82项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量 —UV5501 —UV5501紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法天津UV5501型紫外可见分光光度计操作方法 打开电源，仪器进行自检，等15分钟后进入主菜单一、吸收曲线（波长扫描） 1、在主菜单下选择[1] 进入光度计模式，将空白比色皿推入光路中，按[0Abs/100%T]进行本底测量，显示校准（Blanking） 2、按[SETλ]设置波长，从键盘输入波长，按回车盘（ENTER）确认设置，自动进行本底测量，显示：0.000 Abs 3、在主菜单下按[3]选择“光谱扫描”。

4、按F1（扫描设置）设定起始波长、终止波长，扫描间隔设为0.5nm，抛描速度设“高速”83 5、按F2（模式）选择测量模式，选“吸光度”模式 6、将空白比色皿推入光路中，按[0Abs/100%T]扫描基线按[ESC/STOP]停止扫描 7、将装有样品的比色皿推入光路中，按[START]开始扫描样品，得到吸收曲线，按[ESC/STOP]停止扫描 8、按F3（检索），配合＜、＞，逐点查吸收曲线上各点上的Abs值与波长值，配合、逐峰查吸收曲线上各峰上的Abs值与波长值结果将显示在屏幕右上角项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量 —UV5501 —UV5501紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法84二、样品测定（一）样品吸光度测定：1、将空白比色皿推入光路中，在主菜单下选择[1] 进入“光度计模式” ，自动进行本底测量，显示：0.000 Abs，等待操作下一步2、按F2（模式）选择测量模式，选“吸光度”模式，按[0Abs/100%T] 进行校准（Blanking）3、将样品比色皿推入光路中，读取数据Abs值。

项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量 —UV5501 —UV5501紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法85（二）对照品比较法测定物质含量1、按F1（设置单位）mg/l（用方向键选择单位或自定义单位如μg/l）2、将空白比色皿推入光路中，按[0Abs/100%T] 进行本底测量3、将装有标样的比色皿推入光路中，按F4（标样测定），输入标样己知浓度值C，将装有样品的比色皿推入光路中，读取样品浓度值项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量 —UV5501 —UV5501紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法86（三）标准曲线法测定样品 1、在主菜单下按F2，选择“定量测试”，按F1（单位），选择浓度单位 2、按[SETλ]设置波长、校正方法为标准曲线（单点/标准曲线/3点），按两次[ESC/STOP]，选F2（拟合曲线），按F1选拟合方法为“线性拟合/线性过0点”，按F3（标样设定），通过测定一组标准样品的测定建立工作曲线（即输入样品的标准浓度，每次输入后按ENTER），按[ESC/STOP]退出。

3、将空白比色皿推入光路中，按[0Abs/100%T] ，进行校准（Blanking）项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量 —UV5501 —UV5501紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法87•4、将一组将有标准样品的比色皿逐个推入光路，每次按START，按F4画出曲线，按SAVE保存曲线，按[ESC/STOP]退出•5、将空白比色皿推入光路中，按[0Abs/100%T]进行本底测量，将样品比色皿推入光路中，每次按START，结果将显示在屏幕上•6、按SAVE保存结果和拟合参数• ID Abs Conc.(mg/l)或μg/l• 1 0.062 0.076• 2 0.065 0.078项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量项目二、光谱分析法测定物质的含量 —UV5501 —UV5501紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法紫外可见分光光度计操作方法88 实训三 邻菲啰啉分光光度法测定水中微量Fe的含量 1、试剂：标准硫酸亚铁、铁铵矾（硫酸亚铁铵）、邻二氮菲（1.5g/L）、盐酸羟胺（100g/L ）、HAC-NaAC缓冲溶液 2、原理 邻二氮菲是铁的显色剂，在PH为2—9时与亚铁离子生成橙红色配合物，但与Fe3+生成 的配合物为蓝色，所以，事先要加盐酸羟胺还原剂将Fe3+还原成亚铁离子。

由于亚铁离子易水解，所在要加HAC-NaAC缓冲溶液，稳定PH在5—6，防止亚铁离子水解，使显色完全 取系列浓度标准溶液，测定吸光度A，作吸光度A对溶液浓度c的图，得过坐标原点的直线 在相同条件下，测量被测溶液的吸光度 在标准曲线上查得溶液浓度项目二项目二项目二项目二 光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量89 3、工作曲线的绘制 （1）配铁标准溶液： 称取0.4317g硫酸亚铁标样加6ml/L HCl 20ml，用蒸馏水定容到500ml(浓度100ug/ml) （2）配Fe 标准系列： 取铁标准溶液25ml稀到500ml，浓度5 ug/ml(标样2) 分别取标样2 ① 0.00ml ② 5.00ml ③ 10.00ml ④20.00ml到50ml容量瓶中， 分别加邻二氮菲5ml、盐酸羟胺1ml、HAC-NaAC缓冲溶液5ml，定容到50ml 标准系列： ① 0.00ug/ml、 ② 0.50、 ③ 1.00、 ④ 2.00ug/ml项目二项目二项目二项目二 光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量90标准曲线 C项目二项目二项目二项目二 光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量91 4、最大吸收波长测定（440—580nm每隔10nm测一次A值，作吸收曲线，确定最大吸收波长λmax 5、样品测定操作 （1） 取自来水30.00ml,分别加邻二氮菲5ml、盐酸羟胺1ml、HAC-NaAC缓冲溶液5ml，定容到50ml。

（2）在仪器尚未接通电源时，电表的指针必须位于“0”刻线上，若不在零点，则调解电表上零点校正螺丝，使指针至“0” 项目二项目二项目二项目二 光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量92 （2）打开比色皿暗盒盖已关闭光门，打开电源开关，预热仪器20min3）将波长调节旋钮调至所需波长，将灵敏选择预置于“1”档4）用“0”透光率调节旋钮将仪器调节在透光率“0”处，常称此操作为调节机械零点项目二项目二项目二项目二 光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量93•（5）将装有溶液的比色皿放入比色皿架中盖上比色皿暗盒盖，此时光路开启让参比溶液置于光路上，用“100%”透光率调节旋钮使电表指针指在透光率100%位置（即A=0.00）（6）重复几次打开、关上比色皿暗盒盖，反复调整透光率“0”和“100%”,待指示稳定后，方可开始测量7）将待测溶液推入光路，读取吸光度读数后将比色皿暗盒盖打开8）测得Ax，由工作曲线查得Cx W（ug/ml）=Cx/30/50 ，（9）仪器使用完毕，取出比色皿，洗净、晾干。

关闭电源开关，拔下电源插头，复原仪器 项目二项目二项目二项目二 光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量94《中国药典》2000年版二部对“阿苯达唑“性状的描述•￿￿￿本品为[5-(丙硫基)-1H- 苯并咪唑-2- 基] 氨基甲酸甲酯按干燥品计算，含C12H15N3O2S 不得少于98.5％ 【性状】 本品为白色或类白色粉末；无臭，无味 本品在丙酮或氯仿中微溶，在乙醇中几乎不溶，在水中不溶；在冰醋酸中溶解 熔点 本品的熔点（附录Ⅵ C）为206～212℃，熔融时同时分解• 吸收系数• 取本品约10mg，精密称定，置100ml 量瓶中，加冰醋酸5ml 溶解后，加乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml ，置50ml量瓶中(0.01g/l)(0.01g/l)，用乙醇稀释至刻度，摇匀，照分光光度法（附录Ⅳ A），在295nm 的波长处测定吸收度，吸收系数 为430 ～458 项目二项目二项目二项目二 光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量光谱分析法测定物质含量95•计算题•（１）1. 200μg/L的标准镉溶液在火焰原子吸收光谱仪上扣背景后吸光度读数为0.177，而50ml地下水经酸化并稀释至100ml后，在同样条件下测得吸光度读数为0.023，求此地下水中镉含量。

•解：根据题意，由A = KC得￿0.177 = 200 K•0.023 = C K (50/ 100)•联立方程，解出C = 52.0 ug / L•（２）￿钢样0.500g溶解后在容量瓶中配成100ml溶液分取20.00ml该溶液于50ml容量瓶中，其中的Mn2+氧化成MnO4-后，稀释定容然后在λ=525nm处，用b=2cm的比色皿测得A = 0.60已知525 = 2.3×103 L·mol-1·cm-1，计算钢样中Mn的质量分数(﹪)Mn：54.9）2103.260.03´´==bAc•解：由A=bc得，•￿￿￿￿￿•=1.3×10-4 mol/L •试样中锰的质量m=1.3×10-4 × 0.05 × (100 / 20) × 54.9 = 17.85 × 10-4 g•Mn%= = 0.36%2103.260.03 ´´==bAc项目二、光谱分析法项目二、光谱分析法项目二、光谱分析法项目二、光谱分析法——复复复复 习习习习 题题题题96•（３）采用标准加入法测定某试样中的微量锌，取试样1.000克溶解后，配制成50毫升试液，分取此试液两份各10.00毫升，其中一份加入1毫克/升的标准溶液0.50毫升，分别用原子吸收光谱法测得吸光度为0.31和0.62，计算试样中锌的百分含量。

•解：根据吸光度与浓度的关系有：•0.31 = K Cx (1) •0.62 = K (10.00 × Cx + 0.50 × 1) / (10 + 0.50) (2)•联立（1）和（2），可解出Cx = 0.045 mg/L•Zn% = 50.00 × 10-3 × 0.045 × 10-3 × 100% = 0.23%97•（４）￿用原子吸收分光光度法分析尿样品中的铜，分析线为324.8 nm由一份尿样得到的吸光度读数为0.28，在9 ml尿样中加入4.0 g/ml 的铜标准溶液1 ml这一混合液得到的吸光度读数为0.835，问尿样中铜的浓度是多少？•解：设样品的铜含量为C，•则由题意知0.28 = KC•0.835 = K（9 C + 1 × 4.0）/（9 + 1）•解出￿C = 0.19 g/ml•（５）一含重铬酸根离子和高锰酸根离子的混合溶液，在440nm及545nm处用1cm比色皿测得的吸光度分别为0.385及0.653，求混合溶液中重铬酸根离子和高锰酸根离子的浓度已知重铬酸根离子在440nm及545nm处的吸光系数分别为370 L·mol-1·cm-1、10.8 L·mol-1·cm-1。

高锰酸根离子在440nm及545nm处的吸光系数分别92.8 L·mol-1·cm-1、2350 L·mol-1·cm-1•解：设重铬酸根离子和高锰酸根离子的浓度分别为C1和C2，根据题意，建立联立方程组：•0.385 = 370 C1 + 92.8 C2•0.653 = 10.8 C1 + 2350 C2•解出￿C1 = 9.72×10-4 mol/L ，C2 = 2.73×10-4 mol/L项目四、色谱分析法测定物质含量项目四、色谱分析法测定物质含量项目四、色谱分析法测定物质含量项目四、色谱分析法测定物质含量98。