甜草化学成分的研究.doc

甜草化学成分的研究刘文基 李厚金*(中山大学化学与化工学院，广州，510275)摘要 甜草是我国南方的一种民间草药本文对采集于江西赣南的甜草化学成分进行了系统研究用95%的乙醇浸泡提取，用柱层析，薄层层析，以及重结晶的方法分离提纯甜草中的化学成分低极性成分的组成和含量通过GCMS分析确定，中等极性组分主要运用柱色谱法进行了分离、纯化,得到4个纯化合物，脂肪酸，谷甾醇和2个三萜类化合物，化合物结构通过紫外光谱法，红外光谱法，质谱法，核磁共振等实验综合解析确定同时对得到的三萜化合物进行了药理测试关键词：甜草，化学成分，三萜Abstract Oldenlandia cantonensis How is one of folk medicine in south of china. The Oldenlandia cantonensis How was extracted with 95% alcohol . The crude extracts was subjected to separation and purification by thin layer chromatography (TLC) and column chromatography (CC) . The constitution and content of low polarity component are analyzed by GCMS. The components of middle polarity are separated and purified by column chromatography(CC). Their structures were elucidated by UV, IR, NMR, MS. As a result, four compounds were obtained, fatty acid, plant sterol alcohol and two Triterpenoid compounds. Also we make some medicine testing to Triterpenoid compounds. Key words: Oldenlandia cantonensis How, Chemical constitute, Triterpenoid甜草是茜草科植物，在《江西草药》有药用记载，其性平，味甘，有治疗黄疸型肝炎、糖尿病、外伤出血、清热解毒的功效，其叶子榨汁，可用于蜜蜂、黄蜂等蜂类的蛰伤。

目前尚未见到关于甜草Oldenlandia cantonensis How 化学成分的研究报告，本实验对甜草化学成分的分离，提纯，鉴定，低极性成分用GCMS分析确定，中等极性成分中分离到4个纯化合物，脂肪酸，谷甾醇和2个新的三萜类化合物通过对三萜化合物药理测试，2个三萜化合物活性显著, 对人肝癌细胞株Bel-7402的IC50 值分别为6.5mg/ml，7.0mg/ml，对人胃腺癌细胞株Mcg-803的IC50值分别为8.0mg/ml，7.0mg/ml，化合物具有明显的制备抗肿瘤药物的前景1 实验部分1.1 仪器与试剂仪器：HP 6890/5973 GC/MS联用仪，红外光谱仪（KBr压片），300MHz、500MHz核磁共振仪试剂：95%乙醇，甲醇，乙酸乙酯，石油醚，氯仿，H-硅胶，1.2 采集与提取原料甜草，2004年7月份采集于江西省地区的向阳山坡，取地上全草，晒干剪碎，用95%乙醇多次浸泡，合并浸泡液，旋转蒸发浓缩至干，浓缩物再用甲醇溶解，溶解液拌硅胶1.3 分离提纯将硅胶拌样吹干至呈粉末状态，进行柱层析初步分离先用石油醚湿法装柱，然后用PE和EA配比溶液梯度冲洗柱子对初次柱层析得到的溶液,低极性成分用GC-MS分析，中等极性成分进行柱层析分离操作。

用重结晶方法对化合物进一步提纯，最后从中等极性成分中分离得到四个化合物成分（A，B，C，D）2 结果讨论2.1 低极性成分的GC-MS分析液体油状物用氯仿溶解，进行GC-MS分析色谱条件：HP25MS 30 m 0.25 mm 0. 25μm 弹性石英毛细管柱程序升温：初始柱温50℃，5℃/min升至250℃，运行时间50min进样口温度230℃，He气为载气，流速0.5mL/min，分流比20∶1，进样量1μL质谱条件：离子源为EI源，离子源温度230℃，质量范围40～500 amu表1 甜草Oldenlandia cantonensis How的低极性成分及相对含量序号化合物含量(%)序号化合物含量(%)13,3,6-三甲基-2,5-庚二酮0.10313,7-二甲基-7-羟基-二甲缩醛0.7326,10,14-三甲基-2-十五烷酮1.25321-二十八烷醇0.9239-十八烯酸-1-甲基酯0.21332-二十七烷酮0.904Z-8-十六烯0.7534二十六烷酸甲基酯0.8051-十六酸乙基酯1.6435十四烷酸十四烷基酯0.9961,1-二甲氧基十二烷0.1736十一烷二甲缩醛0.8178,11-十八二烯酸甲基酯1.4337二十六烷0.6789(Z)-十八烯酸甲基酯2.14382-甲基丙基酸-十二烷基酯0.909十八烷酸甲基酯0.783928-Nor-17α-(H)-hopane0.54101-十七碳烯0.13401-烯-3-酮-10-二甲氧基甲基-17-乙酰氧基-雄甾烷0.48119,12-十八二烯酸乙基酯0.44413,5,22-三烯-豆甾烷0.5712油酸乙基酯0.51422-二十九烷酮1.2613十八烷酸乙基酯0.4243二十七酸甲基酯0.72145(Z)-十九碳烯0.2244Vitamin E1.08153,7,11,15-四甲基-2-烯-1-十六醇0.3545十四酸十六烷基酯2.1616二十烷酸甲基酯0.4946十一烷基二甲缩醛0.9317正二十三烷0.774711-甲基-二十九烷0.79182,4-二-(1-甲基-1-苯基)乙基-苯酚0.7448桉叶油醇0.7619二十二烷酸甲基酯1.1549丁基酸环己醇酯1.5120二-n-辛基-邻苯二甲酸酯 1.04501,1-二甲氧基-9-(Z)-十八烷烯1.51212-十二烷基菲0.4751软木三萜酮0.6622二十三烷酸甲基酯1.16523,5-二烯-3,17-二（三甲基硅氧基）-雄甾烷1.6323二十五碳烷1.2553十六烷基环氧丙烷0.89241-二十六碳烯1.32547-酮基-3-乙酰氧基-胆甾烷1.3425二十四烷酸甲基酯1.32551-氨基-4-甲基-哌嗪1.21263-甲酰氧基-11-羟基-17-酮基-雄甾烷0.40565,9(11)-二烯-3β-乙酰氧基-胆甾烷1.392711,13-二甲基-12-十四烯-1-醇-乙酸酯0.845722,23-二氢豆甾醇1.73281,1-二甲基-十四烷基-叔硫醇1.13583-酮基香树脂0.95291-(2-十二烷烯)-丁二酸酐0.39595-雄甾烷烯-3β,17β-二乙酰氧基1.7430二十二烷酸甲基酯0.71609-十八烯酸-二十烷醇酯2.072.2 中等极性成分分析分离到的第一种化合物A：为浅白奶油色油状固体，微加热即融化,1H-NMR（CDCl3,TMS, ppm）： 7.223，3.634，2.340，2.316，2.291，2.272，2.246，1.277，1.232，1.144，1.123，0.877，0.855，0.832，0.810。

d 7.223为氘带氯仿的溶剂峰；d3.634为连氧氢所显示的峰（可能是化合物中含有羟基）d2.340，d2.316，d2.291，d2.272，d2.246，前后之间ppm值的差分别为0.024，0.025，0.019，0.026，通过分析，可能是T，D 峰的重叠，可确定此化合物中碳氢连着羰基d1.277，d1.232，d1.144，d1.123，峰的高度较高，可确定这些峰是烷基长链所显示的峰，其中通过高度可确定有7个亚甲基相连d0.877，d0.855，d0.832，d0.810，前后之间的ppm值平均相差为0.22，J=300*0.22=6.6，为四重峰，可确定化合物A中含甲基A红外光谱，IRn/cm－1（KBr）：3448，2920，2851，2366，2342，1740，1652，1545，1463，1438，1378，1172其中3448为羟基伸缩振动峰，2920和2851为碳氢伸缩振动吸收峰，2366和2342为空气中二氧化碳吸收峰，1740为羰基吸收峰，1378-1463为甲基伸缩振动峰确定此化合物为十二碳脂肪酸图1 化合物A的1H-NMR图化合物B，白色粉末固体,1H-NMR（CD3COCD3，TMS，ppm）：5.226，2.793，2.057，2.049，1.293，1.171，1.128，0.988，0.969，0.952，0.943，0.918，0.898，0.884，0.865，0.839，0.810，0.783。

d5.226为连双键氢的吸收峰；d2.793，为单峰，可初步确定此峰型为水（羟基）的吸收峰；d 2.057，2.049，其为背景溶剂氘带丙酮的吸收峰； d1.293，1.171，1.128为烷基长链的吸收峰；d0.988-d0.783号峰为甲基吸收峰 IRn/cm－1（KBr）：3421，2927，1690，1651，1574，1456，1407，1273，1185其中3421为羟基伸缩振动吸收峰，2927为碳氢伸缩振动吸收峰，1690和1651为双键伸缩振动吸收峰，1456和1407为甲基吸收峰确定此化合物为谷甾醇图2 化合物B的1H-NMR图化合物C，白色固体，可结晶成透明针状晶体1H-NMR（CD3COCD3，TMS，ppm）：7.981，5.222，5.208，5.197，2.794，2.250，2.213，2.045，1.957，1.943，1.933，1.922，1.902，1.891，1.168，1.125，0.982，0.964，0.949，0.937，0.914，0.894，0.870，0.835，0.777d7.981，为单峰，可初步确定此峰型为活泼氢的吸收峰，可能是羟基或羧基；d5.222、d5.208、d5.197，确定为双键氢的吸收峰；d2.794，确定为水的吸收峰；d2.045，为丙酮溶剂的吸收峰； ppm值在1-2之间，可确定为亚甲基和次甲基烷基长链的吸收峰； ppm值为0.7-1之间，确定为多个甲基吸收峰。

红外光谱分析，IRn/cm－1（KBr）：3428，2927，2856，2337，1736，1689，1632，1574，1458，1404，1385，1274，1254，1170。