天根染料1 FP401miRcute_mi 说明书.pdf

产品简介产品简介产品简介产品简介：：：： 本试剂盒采用 SYBR Green I 嵌合荧光法的原理进行 miRNA 荧光定量检测 本试剂盒包含 miRNA 荧光定量检测的所有试剂，包括 2miRcute miRNA premix 和 Reverse primer 2 miRcute miRNA premix（含 SYBR，含 ROX）是专门为 miRNA 定量检测 而研发的新一代预混形式的荧光定量 PCR 检测试剂， 其中的 DNA polymerase 采用 的是抗体修饰的热启动形式， 配合特殊的 Buffer 体系，使反应特异性更好，灵敏 度更高，并能在更广的范围内进行准确定量 注注注注：：：：该试剂盒该试剂盒该试剂盒该试剂盒须与须与须与须与 miRcute miRNA cDNA 第一链合成试剂盒第一链合成试剂盒第一链合成试剂盒第一链合成试剂盒（（（（KR201））））配套配套配套配套 使用使用使用使用 需自备的试剂需自备的试剂需自备的试剂需自备的试剂：：：： 1. 分子生物学实验级别的水（无核酸酶） 2. PCR 上游引物（Forward primer） Forward Primer 设计原则设计原则设计原则设计原则：：：： 1. 遵循引物设计的最普遍原则。

2. 以成熟的 miRNA 序列为基础，将 U 替换成 T，这是最基础和最简单的设计方 法 3. 试剂盒中提供的下游引物的 Tm 值为 65℃，设计上游引物的 Tm 值要尽量保 证在 65℃左右 4. 若按照原则 2 的方式直接设计的引物其 Tm 值过低，可以在引物的 5’端添加 几个碱基（最好为 G 或 C 碱基）；也可以在 3’端添加 1 个或几个 A 碱基；或 者 5’端和 3’端同时修饰 5. 若按照原则 2 的方式直接设计的引物其 Tm 值过高，可以在引物的 5’或 3’端 去掉几个碱基 操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤：：：： 1. 室温融化 2 miRcute miRNA premix（含 SYBR，含 ROX）和 Reverse primer （10uM） 2. 使用时请将 2 miRcute miRNA premix 上下颠倒轻轻均匀混合，避免起泡，并 经轻微离心后使用如果试剂没有混匀，其反应性能会有所下降 注注注注：：：：请不要使用振荡器混匀请不要使用振荡器混匀请不要使用振荡器混匀请不要使用振荡器混匀 3. 将试剂置于冰上，并按下表配制反应体系 组成成分组成成分组成成分组成成分 50l 体系体系体系体系 20l 体系体系体系体系 终浓度终浓度终浓度终浓度 2miRcute miRNA premix （含 SYBR,含 ROX） 25 l 10 l 1 Forward primer（自备） - - 200 nM Reverse primer （10uM） 1l 0.4l 200 nM miRNA 第一链 cDNA - - - ddH2O 至 50 l 至 20 l - 注注注注：：：： 1. miRNA 第一链第一链第一链第一链 cDNA 的加入量不要超过的加入量不要超过的加入量不要超过的加入量不要超过 real time PCR 体积体积体积体积 1/10。

2.对于特殊的检测体系中对于特殊的检测体系中对于特殊的检测体系中对于特殊的检测体系中，，，，高含量的高含量的高含量的高含量的 cDNA 模板易导致非特异性扩增模板易导致非特异性扩增模板易导致非特异性扩增模板易导致非特异性扩增，，，，根据所根据所根据所根据所 检测检测检测检测 miRNA 的丰度适当的稀释的丰度适当的稀释的丰度适当的稀释的丰度适当的稀释 cDNA（（（（10 倍或者倍或者倍或者倍或者 100 倍倍倍倍）））） 注意事项注意事项注意事项注意事项：：：： 以下为使用本试剂盒时的注意事项，使用前一定认真阅读 1. 本品中含有荧光染料 SYBR Green I，保存本品或配制 PCR 反应液时应避免强 光照射 2. 反应液的配制和分装中，一定请使用新的（无污染的）枪头等耗材，尽量避 免污染 技术支持：010-59822661/2665 WWW.TIANGEN.COM 订货：010-59822688 WWW.TIANGEN.COM 适用的适用的适用的适用的Real Time PCR扩增仪扩增仪扩增仪扩增仪：：：： Applied Biosystems 公司： ABI PRISM7000/7700/7900HT， 7300/7500 Real-Time PCR System，7500 Fast Real-Time PCR System Roche Diagnostics 公司：LightCycler Bioer（杭州博日） ：Line-Gene 其它各种 Real Time PCR 扩增仪 PCR反应反应反应反应程序设置程序设置程序设置程序设置：：：： 2miRcute miRNA premix (含 SYBR， 含 ROX)中含有抗体介导的 DNA polymerase， 该酶与其他热启动Taq酶不同之处是需要很短的热激活处理时间， 缩短了整个PCR 所需时间。

循环循环循环循环 温度温度温度温度 时间时间时间时间 内容内容内容内容 1 94℃ 2 分钟 起始模板变性 94℃ 20 秒 PCR 循环中模板变性 60℃ 30 秒 退火 40-45 72℃ 30 秒 延伸 miRcute miRNA qPCR detection kit（（（（SYBR）））） miRcute miRNA 荧光定量检测试剂盒荧光定量检测试剂盒荧光定量检测试剂盒荧光定量检测试剂盒 （（（（SYBR）））） 目录号目录号目录号目录号：：：：FP401 试剂盒内容试剂盒内容试剂盒内容试剂盒内容：：：： 试剂盒组成试剂盒组成试剂盒组成试剂盒组成 FP401 （（（（50 次次次次50ul 体系体系体系体系）））） 2miRcute miRNA premix （含 SYBR,含 ROX） 1.35ml Reverse primer （10uM） 55ul 说明书 1 份 运输条件运输条件运输条件运输条件：：：： 干冰运输干冰运输干冰运输干冰运输 储存条件储存条件储存条件储存条件：：：： -20℃℃℃℃避光保存避光保存避光保存避光保存 本制品使用后本制品使用后本制品使用后本制品使用后，，，，2miRcute miRNA premix（（（（含含含含 SYBR,含含含含 ROX））））请置于请置于请置于请置于 4℃℃℃℃ 避光保存避光保存避光保存避光保存，，，，存放时间可达半年存放时间可达半年存放时间可达半年存放时间可达半年；；；；Reverse primer （（（（10uM））））仍置于仍置于仍置于仍置于 -20℃℃℃℃保存保存保存保存。

TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD. Order: 010-59822688 Technical: 010-59822661/2665 Toll-free: 800-810-2177 本产品仅供科研使用请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途 版本号版本号版本号版本号: QP110124 。