T_ZSMM 0004-2023 免疫组化染色显色校准质控方法.docx

学兔兔　ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ　标准下载ICS 11.100CCS C30ZSMM浙 江 省 数 理 医 学 学 会 团 体 标 准T/ZSMM 0004—2023免疫组化染色显色校准质控方法Method of calibrating coloration for immunohistochemistry2023 - 12 - 22 发布 2024 - 1 - 22 实施浙江数理医学学会  发 布学兔兔　ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ　标准下载T/ZSMM 0004—2023目 次前 言 ............................................................................ II1 范围 .................................................................................  12 规范性引用文件 .......................................................................  13 术语和定义 ...........................................................................  14 缩略语 ...............................................................................  25 试剂和材料 ...........................................................................  26 免疫组化染色操作步骤 .................................................................  37 免疫组化染色显色校准 .................................................................  48 免疫组化染色质控数据存储 .............................................................  6附 录 A （资料性附录） 通用质控物技术原理 .......................................... 7参  考  文  献 .........................................................................  8I学兔兔　ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ　标准下载T/ZSMM 0004—2023前 言本标准按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则  第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本标准由浙江省数理医学学会提出并归口本标准起草单位：微邦（武汉）医疗健康产业有限公司、深圳市诺高实验器材有限公司、广州大学、武汉市武昌医院、湖北省临床检验中心、重庆市公共卫生医疗救治中心、重庆市急救医疗中心、湖北中医药大学、武汉谱尼医学检验实验室有限公司、珠海贝索生物技术有限公司等单位起草本标准主要起草人：钱峰、汪建阳、李涵、王显科、冯骥良、高志成、舒清明、罗琳、邹宇量、崔新伍、杨芳宇、王贝晗、吕梦雪、俞斌、谢征、敖伟、刘洪涛、魏世隽、邓晖、郑婵双、陈军、林志标、岑子祥、刘宴、朱威帧、董明国、冯斌、胡君、张玥、刘秀萍、沈鹤柏、易祥华II学兔兔　ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ　标准下载T/ZSMM 0004—2023免疫组化染色显色校准质控方法1 范围本标准规定了免疫组化染色显色校准方法相关的术语和定义、缩略语、方法原理、试剂和材料、仪器和设备、通用质控物制备、IHC实验步骤、免疫组化染色显色校准（MCC）和免疫组化染色质控数据本标准适用于病理技师或研究人员进行免疫组化染色反应的显色校准质控管理、对免疫组化学反应过程是否合格的验证与评估，形成免疫组化显色结果最终的质量控制规范2 规范性引用文件本标准暂无规范性引用文件。

3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准3.1 二氨基联苯胺显色 DAB coloration在免疫组化染色中使用二氨基联苯胺显色底物使标记辣根过氧化物酶的抗体经过反应后产生肉眼可见棕黄色颜色的化学反应3.2 通用质控物 allpurpose quality control object; AQCO适用于免疫组化染色的系列小鼠、兔、驴蛋白混合物组合，可用于验证不同的标靶点：1  其中一类蛋白混合物特异性与抗小鼠、兔的羊属第二抗体工作液结合，用于验证样本抗原修复情况及第二抗体工作液效价；2  其中一类蛋白混合物不与小鼠、兔属第一抗体工作液及抗小鼠、兔的羊属第二抗体工作液发生特异性结合，作为阴性对照；3  其中一类蛋白混合物可与任何小鼠、兔属第一抗体工作液结合，配合封闭剂排除未结合的第一抗体，用于验证第一抗体工作液效价通用质控物可用作参照对象，具有规定特性，足够均匀和稳定，已被证实符合标称特性检查的预期用途注：通用质控物涉及免疫学技术创新应用，具体原理详见附录A3.3 通用质控载玻片 allpurpose quality control slides; AQCS通用质控物（3.2）被预先铺贴于粘附载玻片上，用蜡膜封存，该载玻片用于任何组织标本的免疫组化染色。

3.4 免疫组化染色显色校准质控方法 method of calibrating coloration for IHC; MCC在免疫组化染色中使用通用质控载玻片（3.3）,依据给定的操作指南（6.1）来校准组织标本的显色情况3.5 显色校准 calibrating coloration在免疫组化染色中，通过比对组织标本与同步染色的通用质控物显色情况，排除不合格因素，评估显色质量；同时可用已知抗原浓度的通用质控物（3.2）显色作为颜色深浅标准，辅助校准组织标本的显色程度3.6 质控数据 quality control data1　ｗｗｗ．ｂ学兔兔ｚｆｘｗ．ｃｏｍ　标准下载T/ZSMM 0004—2023用于判定检验结果是否符合预期的数据，包括且不限于抗原修复结果、第一抗体效价、第二抗体效价、显色结果（合格/不合格）等3.7 假阳性结果 false-positive results分析物为阴性的样本，检测结果为阳性3.8 假阴性结果 false-negative results分析物为阳性的样本，检测结果为阴性4 缩略语下列缩略语适用于本标准AQCO:通用质控物(Allpurpose Quality Control Object)AQCS:通用质控载玻片(Allpurpose Quality Control Slides)IHC:免疫组织化学染色/免疫组化染色(Immunohistochemistry)MCC:免疫组化染色显色校准质控方法(Method of Calibrating Coloration for IHC)PBS:磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffered Saline)5 试剂和材料5.1 通用质控物设计5.1.1 每片免疫组化染色时使用新的通用质控载玻片，通用质控物和与患者标本同步染色。

5.1.2 通用质控物应至少提供阳性、阴性对照功能5.1.3 通用质控物推荐设置多个（3 个以上）梯度浓度靶点提供组织标本的显色参考标准见图 1图1 通用质控物靶点5.1.4 通用质控物应提供组织标本内抗原修复情况、第一抗体效价、第二抗体效价的评估功能，提供有效的质控信息5.1.5 通用质控物应提供显色背景颜色亮度值（0～255）的功能，来校准不同光源条件下观察结果产生的差异，以通用质控物阴性靶点亮度值=255 作为校准参考见图 22　ｗｗｗ．ｂ学兔兔ｚｆｘｗ．ｃｏｍ　标准下载T/ZSMM 0004—2023图2 背景颜色亮度值调整示意5.2 通用质控物制备5.2.1 依次制备蛋白总含量相同但成分比例不同的小鼠、兔、驴来源 IgG 蛋白混合液，其中小鼠和兔蛋白组成比例为 1:15.2.2 基于小鼠、兔 IgG 中的相同 FcyrⅠ 位点制备通用型抗原蛋白混合液5.2.3 推荐使用蛋白 3D 打印技术打印出不同梯度浓度蛋白混合液标靶点见图 35.2.4 使用甲醛固定后，石蜡干封图3 蛋白混合液梯度比例5.3 免疫组化染色试剂5.3.1 小鼠或兔属第一抗体工作液（EDTA 热修复）5.3.2 抗小鼠、兔的羊属第二抗体工作液。

5.3.3 使用推荐的第二抗体封闭液：Bovine IgG（牛 IgG）、BSA（牛血清蛋白）、Donkey IgG(驴 IgG)5.3.4 PBS（pH 值=7.2～7.4，含 0.05% 吐温-20）5.3.5 EDTA 抗原修复液（50×，使用时稀释至 1×）5.3.6 3% H2O25.3.7 DAB 显色液（辣根过氧化物酶型，pH=7.5～7.6）5.3.8 苏木素染色液（0.1%）6 免疫组化染色操作步骤3学兔兔　ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ　标准下载T/ZSMM 0004—20236.1 手工操作6.1.1 裱贴有标本组织的通用质控载玻片脱蜡至水6.1.2 常规抗原热修复（修复温度不高于 97℃）6.1.3 PBS 浸泡 5min×2 次,蒸馏水浸泡 3min×2 次6.1.4 3% H2O2 室温孵育 5min～10min×1 次，以消除内源性过氧化物酶的活性6.1.5 蒸馏水冲洗，PBS 浸泡 5min×2 次6.1.6 滴加第一抗体工作液（小鼠或兔属），37℃孵育 1h～2h 或 4℃孵育 12h 以上。