艾滋病实验室检测新技术-课件.ppt

艾滋病实验室检测新技术艾滋病实验室检测新技术目的目的方法方法监测监测感染检测感染检测抗体检测抗体检测(EIA/PA/RT)检测策略检测策略窗口期检测窗口期检测抗原检测，核酸检测抗原检测，核酸检测poolingRT-PCR诊断诊断感染诊断感染诊断WB检测策略检测策略近期感染诊断近期感染诊断STARSH方法方法治疗评价治疗评价CD4/CD8测定测定流氏仪检测流氏仪检测显微镜法显微镜法病毒载量测定病毒载量测定NASBA,b-DNA，RT-PCR耐药性检测耐药性检测基因型，表型基因型，表型窗口期检测窗口期检测抗原检测抗原检测核酸检测核酸检测PoolingRT-PCR方法方法窗口期的范围窗口期的范围定义依据定义依据时间长度时间长度抗体检测抗体检测3-6个月个月新的新的EIA试剂可以缩短至试剂可以缩短至14-21天天抗原检测抗原检测1-2周周第四代抗原抗体检测试剂可以第四代抗原抗体检测试剂可以使窗口期比第三代抗体试剂缩使窗口期比第三代抗体试剂缩短短4-5天天核酸检测核酸检测5-11天天抗原检测抗原检测P24试剂盒，第四代试剂盒，第四代EIA试剂（试剂（1997年在欧洲正式批年在欧洲正式批准用于血液筛查）准用于血液筛查）每一个每一个HIV粒子含有粒子含有1200个个p24抗原分子抗原分子=0.048fg每一个每一个HIV粒子含有粒子含有2个个RNA拷贝，如果病毒载量测拷贝，如果病毒载量测定结果为定结果为400拷贝拷贝/ml，即等于有即等于有2.4X105个分子个分子=0.0096pgp24抗原抗原/ml，800拷贝拷贝/ml，即等于有即等于有4.8X105个分子个分子=0.019pgp24抗原抗原/ml目前最敏感的抗原检测试剂盒的检测阈值为目前最敏感的抗原检测试剂盒的检测阈值为0.01pg/ml抗原在血清抗体阳转前抗原在血清抗体阳转前2-18天既可以检测到天既可以检测到样本（血清样本（血清/浆）中的浆）中的p24抗原包括游离的抗原和病毒粒抗原包括游离的抗原和病毒粒子中的抗原子中的抗原EIA测定的抗原浓度测定的抗原浓度(F)：病毒病毒RNA拷贝数推算的抗原浓拷贝数推算的抗原浓度度(A)=0.16：2900样本号样本号EIA(Cutoff)EIA(pg/ml)RNA拷贝拷贝/mlp24pg/ml F/A13.10.11,4000.033.124.70.1637000.091.83451.511000.0356432011800001.95.65682.3400000.962.46220.731900004.50.16样本经过预处理，破碎病毒粒子后将有利于样本经过预处理，破碎病毒粒子后将有利于p24抗原的检测抗原的检测病毒病毒RNA检测检测第一次病毒学症高峰时间大约在感染后第一次病毒学症高峰时间大约在感染后4-11天天病毒病毒RNA检测方法：检测方法：NASBA,RT-PCR,b-DNA在高度怀疑有原发感染时，且经抗体检测之后在高度怀疑有原发感染时，且经抗体检测之后抗体检测阴性或不确定，有高危行为史或暴露抗体检测阴性或不确定，有高危行为史或暴露史，特别是伴有相应的临床表现时，用核酸检史，特别是伴有相应的临床表现时，用核酸检测进行辅助诊断。

测进行辅助诊断早期诊断应用：早期诊断应用： 个体检测、血液筛查、性病个体检测、血液筛查、性病门诊病人筛查、门诊病人筛查、PMTCTPoolingRT-PCR由于核酸检测的成本很高，方法费时，不可能作由于核酸检测的成本很高，方法费时，不可能作为血液筛查的方法，目前在欧洲用为血液筛查的方法，目前在欧洲用pooled血液的方法进行血液的方法进行核酸检测，其敏感性取决于核酸检测，其敏感性取决于pooped样本大小及检测的预样本大小及检测的预值（用特殊的值（用特殊的RT-PCR试剂盒检测，以提高敏感性）可试剂盒检测，以提高敏感性）可能低于抗原检测，但在个体献血者核酸检测可能比抗原能低于抗原检测，但在个体献血者核酸检测可能比抗原检测更具成本效益检测更具成本效益1473份样本处理过程份样本处理过程新近感染检测新近感染检测抗体检测抗体检测EIA,PA,RTWB试验试验阴性阴性抗原检测抗原检测/核酸检测核酸检测阳性阳性STARSH新近感染新近感染STARHS法法1998年年开开始始，美美国国JanssenRS等等专专家家推推出出一一种种新新的的实实验验室室方方法法用用于于新新感感染染病病例例的的监监测测，即即敏敏感感的的酶酶联联免免疫疫检检测测法法（3A11）和和非非敏敏感感的的酶酶联联免免疫疫检检测测法法（3A11LS）:原原理理：利利用用感感染染早早期期抗抗体体滴滴度度低低的的特特征征，以以敏敏感感ELISA试试剂剂（3A11）和和非非敏敏感感ELISA试试剂剂（3A11-LS）对对经经过过一一定定程程度度稀稀释释的的同同一一样样品品进进行行测测定定，3A11检检测测呈呈阳阳性性而而3A11LS检检测测呈呈阴阴性性反反应应者者为为新新发发感感染染，与与以以往往感感染染的的病病例例区区分分开开来来，可可以以确确切切地地估估测测新新感感染染人人数数。

近近几几年年，该该方方法法已已在在一一些些国国家家得得到到了了应应用用，为为这这些些国国家家制制定艾滋病预防控制策略提供了准确和重要的技术支持定艾滋病预防控制策略提供了准确和重要的技术支持检测新发或新近检测新发或新近HIV感染的目的感染的目的l l无须耗时并昂贵的前瞻性队列研究来识别早期感染无须耗时并昂贵的前瞻性队列研究来识别早期感染l l由单一的患病样本来估计人群发病率由单一的患病样本来估计人群发病率l l以新发感染的个体为研究或干预对象以新发感染的个体为研究或干预对象l l识别早期感染以进行早期治疗和临床关怀识别早期感染以进行早期治疗和临床关怀l l评估预防措施和目标评估预防措施和目标l l监测亚型和药物抵抗株的传播监测亚型和药物抵抗株的传播l l找出适合疫苗实验的高危人群找出适合疫苗实验的高危人群 TARHS：新发新发HIV血清转换的血清转换的血清检测运算法则血清检测运算法则 暴露暴露HIV+AIDS(1)敏感性试验敏感性试验+(2)STARHS试验试验_+在同一时间应用两种不同试验分析血样来检测新发感染在同一时间应用两种不同试验分析血样来检测新发感染（1）敏感性试验（敏感性试验（EIA）血清转换早期即可出现阳性血清转换早期即可出现阳性（2）非敏感性试验（改调的非敏感性试验（改调的EIA：STARHS）血清转换晚期才可出现阳性血清转换晚期才可出现阳性新发感染血清转换新发感染血清转换=EIA+&STARHS-STARHS试验的窗口期试验的窗口期 暴露暴露EIA+DetunedEIA+AIDS 窗口期窗口期=从从EIA+到到detuned的的EIA+之间的时间之间的时间在血清转换者有所不同，依赖于在血清转换者有所不同，依赖于HIV的亚型和试验的亚型和试验OrganoTekniaka,对亚型对亚型B，估计值为：估计值为：90%3.3个月个月754.0505.1256.4108.2 STARHS的应用条件的应用条件 非非AIDS病人病人AIDS病人有很低的抗体病人有很低的抗体水平，象血清阳转水平，象血清阳转非非HAART治疗治疗HAART治疗病人有治疗病人有很低的抗体水平，象血清阳转很低的抗体水平，象血清阳转抗体检测策略抗体检测策略监测：初筛监测：初筛-复合复合-确认策略确认策略EIA-EIA替代策略替代策略诊断：初筛诊断：初筛-复合复合-确认策略确认策略EIA-EIA-PA/RT替代策略替代策略（VCT） WHO和和UNAIDS推推荐荐的的利利用用几几种种快快速速检检测测方方法法，在在HIV流流行行率率不不同同的的地地区区针对针对不同的目的而进行的不同的目的而进行的HIV诊断方法诊断方法目的目的流行率流行率策略策略血液筛查血液筛查任何情况下任何情况下1监测监测10%110%2诊断诊断征兆征兆/症状症状30%130% 2诊断诊断症状症状10%210%3策略策略1：用一种筛选试剂。

出现阳性反应时可被认为是：用一种筛选试剂出现阳性反应时可被认为是HIV阳性策策略略2：用用两两种种筛筛选选试试剂剂如如果果第第一一次次检检测测出出现现阳阳性性反反应应则则用用第第二二种种试试剂剂重重复，两种试剂检测结果均出现阳性反应时可被认为是复，两种试剂检测结果均出现阳性反应时可被认为是HIV阳性策策略略3：用用三三种种筛筛选选试试剂剂三三种种试试剂剂检检测测结结果果均均为为阳阳性性时时才才可可被被认认为为是是HIV阳性诊断替代策略诊断替代策略1、HIV感染高流行地区的高危人群感染高流行地区的高危人群2、EIA-1+EIA-2+,且且2次检测次检测S/CO大于等于大于等于63、在、在2检测结果的基础上检测结果的基础上+高特异性试剂检测高特异性试剂检测+衷心感谢参与本课题的研究人员和研究生衷心感谢参与本课题的研究人员和研究生参比室工作人员：参比室工作人员：强来英，肖瑶，张桂云，裴丽健，张辉强来英，肖瑶，张桂云，裴丽健，张辉研究生研究生/进修生：进修生：张棋，左合拉，刘波，冯基刚张棋，左合拉，刘波，冯基刚。