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牛人工授精技术 广西武宣金泰丰农业科技有限公司 人工授精的概念 • 种畜配种：自然交配、人工授精 • 人工授精是指利用器械采取公畜的精液， 经过适当的检查和处理，再用器械把精液 输送到母畜生殖道的适当部位，使之受孕 的配种方法 人工授精的发展 • 试验阶段： 1780年意大利生理学专家司拜伦谨尼（ Spallanzani）第一次进行狗的人工授精20世纪初对 马试验成功 • 实用阶段：在20世纪30年代形成了一套较完整的操作方 法40～60年代，欧洲多数国家，北美、大洋洲国家及 日本人工授精已相当普及 • 冷冻精液阶段： 出现：1949年英国波芝（Polge）对鸡精液冷冻成功 发展：1950年英国的史密斯（Smith）和波芝研究开 发了牛精液冷冻保存技术1960年后冷冻精液的人工授 精技术广泛展开我国的人工授精技术始于50年代（猪 ），但精液冷冻技术70年代才得以推广 人工授精的意义 • 充分发挥优秀种公畜的种用价值和配种效能， 加快品种改良步伐 • 提高母畜的受胎率 • 防止疾病特别是传染病的传播 • 克服因家畜体形悬殊造成的配种困难 • 冷冻精液的应用使种畜的利用不受时间和空间 的限制。

• 是发展繁殖新技术的一项基础措施 人工授精技术程序 • 采精 • 精液品质检查 • 精液稀释 • 精液保存 • 输精 采精 • 采精的准备 • 采精方法 • 采精频率 采精的准备 • 场地：宽敞、明亮、安静、清结，有消毒 设施和保护栏 • 台畜：活台畜、假台畜 • 假阴道：安装调试后具备适宜的温度、压 力、和润滑度 • 公畜：具备良好的繁殖体况；经过训练； 采精前进行充分的性准备 采精操作 • 假阴道法： • 手握法： • 电刺激法： • 按摩法： 公畜的采精频率 • 公牛：每周两天，每天两次 • 公猪、马：宜隔日一次，如果连续两天采 精，要休息2-3天 • 公羊：每天数次，连续数周 精液的品质检查 • 外观检查 • 精子活力检查 • 精子密度检查 • 精子畸形率检查 • 其他检查 精液的外观检查￿ • 精液量 • 精液色泽 • 精液气味 • 云雾状 项项目乳牛肉牛水牛猪绵绵羊 每周采精 次数 2～62～62～62～57～25 平均每次 射精量（ ml） 5～104～83～6150～ 300 0.8～1.2 精子活率 （%） 50～7540～7560～8050～8060～80 精子活力检查 • 平板压片法 • 悬滴法 载玻片预温 精液稀释 取样检查 镜检 活力估测 活力记录 将恒温加热板放在 载物台上，打开电 源并调整控制温度 至37℃，然后放在 载玻片 将生理盐水 与精液等温 后，按1:10 稀释 取10ul放在预温后载玻片中间， 盖上盖玻片 在400倍显微 镜下观察 判断视野中直线 前进运动精子所 占的百分率 按"十级一分制"评 分和记录 精子精子活力检查的程序活力检查的程序 精子密度检查 • 估测法 • 血细胞计计数法 • 精子密度仪测定 估测法 • 密：在整个视野中，精子间空隙不明显，看不 清单个精子运动。

10亿／ml • 中：在整个视野中，精子间空隙明显，可容纳1 —2个精子，3—10亿／ml • 稀：在整个视野中，精子间空隙较大，可容纳 数个精子，1—3亿／ml (二)血细胞计数法： • 在显微镜看清血细胞计数板上的方格： • 稀释精液：用移液管吸取精液50微升置于小试管 中，再吸取3%NaCI溶液450或950微升与精液混匀 • 镜检：在400倍的显微镜下找出具有代表性的五 个中方格，四角和中间一个或对角线五个，用计数 器计数其中的精子数 • 计算：1毫升原精液精子数=5*5*10*1000* 稀释倍数 精子密度仪 各种家畜精子密度比较各种家畜精子密度比较 畸形率的检查 • 畸形精子：头部畸形、颈部畸形、尾部畸 形 • 精子畸形率：精液中畸形精子占总精子数 的百分率 • 优质精液精子畸形率应小于：牛18%、羊 15%、猪18%、马12% 畸形率的检查 • 取一滴原精液，均匀的涂在载玻片上，干 燥1～2分钟 • 用96%以上酒精固定2～3分钟 • 用美蓝或墨水染色1～2分钟 • 用蒸馏水轻轻冲洗 • 干燥后镜检， 其他检查 • 顶体异常率 • 精子生存时间和生存指数的测定 • PH测定 • 美蓝褪色试验 • 果糖分解试验 • 精子耗氧量测定 顶体异常率的检查 • 取鲜精适量，在37℃下用生理盐水稀释。

• 涂片，干燥，用5%福尔马林固定10分钟 • 姬姆萨液染色1.5～2小时 • 干燥后用树脂封闭，制成标本 • 400～600倍镜检，数500～1000个精子， 计算项体异常率 精子生存时间和生存指数的测定 • 精子生存时间：指精子在某温度下在体外 的总的生存时间 • 生存指数：将精液在某温度下，每隔8～ 12小时检查一次精子活力，直至无活动精 子为止，相邻两次检查的平均活力与间隔 时间的积之和为生存指数 PH测定 • 正常精液PH： 牛、羊 6.5～6.9、猪、 马 7.4～7.5 • 同种精液PH偏低的，品质较好，PH偏高 的受精率、生活力和保存效果都显著降低 美蓝褪色试验 精液稀释 • 稀释的目的 • 稀释液的成分及作用 • 稀释液的配制方法 • 稀释倍数的确定 • 稀释方法 稀释的目的 • 大精液容量，增加了一次采精量的可配母 畜数 • 延长精子存活时间 • 有利于精液的保存和运输 稀释液的成分及作用 •稀释剂：单纯扩大容量的等渗液0.9%NaCl、5%葡萄糖 •营养剂：主要提供营养，以补充精子在代谢过程中消耗营养 （1）奶类：奶粉(脱脂、速溶)10—12%；鲜奶经消毒加入10— 20ml。

（2）卵黄，通常加入20% （3）糖类，3%葡萄糖，11%蔗糖 •保护剂：主要保护精子免受各种不良外界环境因素的危害 （1）非电解质或弱电解质：降低精液电解质浓度，常用糖类、氨 基乙酸 （2）缓冲物质：维持精液的PH，常用柠檬酸盐、酒石酸钾钠、 磷酸二氢钾和三羟甲基氨基甲烷（tris)等 （3）防冷物质：防止精子发生冷休克，常用卵黄、奶类 （4）抗冻物质：甘油、二甲基亚砜(DMSO) （5）抗菌物质：青霉素、链霉素、氨基苯磺胺 •其他添加剂：激素类、维生素、酶类、染料类、有机酸、精氨酸等 稀释液的配制要求 • 药物原料应选用化学纯和分析纯制剂 • 用具须洗净消毒 • 药品用蒸馏水溶解后，要进行过滤和水浴 消毒 • 蒸馏水要新鲜 • 卵黄要取自新鲜鸡蛋 • 最好现用现配，卵黄、奶类、抗生素现用 现加 稀释倍数的确定 • 一头公牛一次采得鲜精12毫升，经检查精子活 力为0.7，密度为11亿/毫升，如为母牛输精时要 求有效精子数不少于0.1亿，输精量为0.25毫升 ，本次采得的精液可为多少头母牛输精？ （1）每毫升原精液中有效精子数：11*0.7＝7.7亿 /毫升 （2）稀释后每毫升精液中有效精子数：0.1/0.25 ＝0.4亿/毫升 （3）稀释倍数：7.7/0.4＝19.25 取19倍 （4）可配母牛头数：12*19/0.25＝912头 稀释方法 • 将精液精液与稀释液同处在30℃的环境中 。

• 检查精液品质，确定稀释倍数 • 稀释时，将稀释液沿着精液容器的壁慢慢 加入精液中，同时慢慢转动精液瓶，使之 混匀 • 如需高倍稀释，应先做3—5倍的低倍稀释 精液稀释 精液保存 • 常温保存：15—25℃ • 低温保存：0—5 ℃ • 冷冻保存：保存在液氮(-196℃)或干冰(- 79℃) 中 液氮及其容器 • 液氮的特性：超低温性、易挥发性、抑菌 性 • 利用液氮：防冻伤、防窒息、防爆炸 • 液氮罐： 液氮罐的构造 液氮罐的使用 • 购买时要检查合格证，查看各部件是否齐 备完好，测定液氮损耗率是否正常 • 运输液氮要有专门的车辆，防止剧烈振荡 • 贮存液氮要在专门的室内 • 当液氮量达容积的1/3时要及时充氮 • 每年要清洗保养一次 精液的冷冻保存原理 • 玻璃化假说：稀溶液在冰晶化温区（0～ －60 ℃）易形成冰晶，冰晶为分子有序 排列、形态规则、颗粒较大的固体，可对 精子产生渗压和机械危害如溶液快速降 温，则形成分子无序排列、颗粒较小的玻 璃化固体，对精子危害小，再以同样的方 式升温，精子即会恢复活力 细管冻精的生产程序 • 采精及精液品质检查 • 精液稀释：二次稀释法 • 降温平衡： • 分装 • 冻结：液氮熏蒸浸泡法 • 抽样检查 细管冻精的制作 人工授精技术 • 输精前的准备 • 输精的要求 • 输精方法 输精前的准备 • 母畜的准备：母畜经发情鉴定后，确定已到输精时间， 将其适当保定，尾巴拉向一侧，清洗消毒外阴。

• 器械准备：输精所用的器械应彻底消毒，用稀释液冲洗 后才能使用 • 精液准备（1）液态保存的精液：轻轻振荡后升温至 35℃，活力不低于0.6 （2）冷冻精液：需先解冻，活力在0.3以上 • 术者准备：输精人员应穿好工作服，指甲必须剪短磨光 ，戴上长臂手套 输精要求 • 输精时间的确定：母牛发情后9－24h输精 两次，间隔8-12小时第一次输精经产 牛在发情后12h左右，初产20h） 例：早9点某经产母牛发情，当晚7－8：30时第一次输精，次日早 5－9时可第二次输精，第二次输精前检查卵泡 • 细管冻精1支，0.5ml或0.25ml，有效精子 数不少于1000万 直肠把握子宫颈输精法操作要点 1、冻精的适宜解冻温度：38~39℃ 2、母牛的输精时间：发情开始后8~12小时一次，隔8~12小时一次 3、适宜的输精部位：子宫颈深部和子宫体内 4、精液解冻后要尽快输精 5、精液解冻后要保存在34~36℃下，温度不可波动过大 6、细管装入枪内后，要检查一下精液是否能从套管外流出 7、排出宿粪后，先擦洗牛外阴部，再插入输精器 8、插入输精器时，先斜向上方前进10~15cm ，再水平插入。

9、向子宫颈插入输精器时，要注意两手协同操作 10、输精器与子宫颈方向要保持一致 11、注入精液困难时，要适当改变输精器方向或稍后拉，但切忌后退过多 12、注入精液要缓慢，一般为10秒 13、注入精液的同时要减缓母牛的努责，防止精液倒流 14、输精同时要注意保护输精器不受粪便污染 15、输精完毕后，先撤出输精器后撤出直肠内的手臂 提高受胎率的措施 • 发情正常而屡配不孕的母牛：大麦芽120克，当 归、红花、生地、地骨皮各60克，黑豆500～ 1000克，加水熬汤母牛发情1～3天开始喂药 ，每日1剂，连服3剂，第3剂药服完后的第2天 配种 • 按碘片1克、碘化钾3克、蒸馏水6克的比例配成 稀释液，同时取4毫升原液，加200毫升蒸馏水 冲洗子宫此方法对慢性子宫内膜炎、化脓性 子宫炎、卡他性子宫炎、阴道炎等引起的母牛 不孕症有明显疗效 提高受胎率的措施 • 卵巢机能不全时，肌注0.5%新斯的明2毫 升，连注3次，每次间隔48小时第3次可 同时注射孕马血清1000国际单位，82.4% 的母牛可恢复机能 • 对隐性子宫内膜炎的母牛，在发情配种前 2小时，用生理盐水200～500毫升冲洗子 宫之后，注入青霉素40～100万单位，链 霉素100万单位，再适时输精，受胎率可 达60%以上。

提高受胎率的措施 • 肌注维生素输精后15～20分钟，肌肉注射维 生素E500毫克，情期受胎率可提高14.4%在 输精的当天，输精后的第5～6天，各肌注维生 素A58万单位，维生素D310万单位，维生素 E500毫克一次情期受胎率可提高20%。