色谱实验报告之芳香族化合物的定性、定量分析.pdf

三、仪器与试剂仪器：岛津 LC-2010A 高效液相色谱仪 （配有 UV 检测器和 CLASS-VP 色谱工作站） ；色谱柱， Lichrospher C18色谱柱（ 4.6×250mm） 操 作 条件： 甲醇：水=85： 15； 检测波长：254； 柱温： 室温； 流动相流速：1.0mL/min；进样体积： 10 uL试剂与样品 ：甲醇（99.9%，色谱纯） 、二次蒸馏水、苯与甲苯（分析纯） 、试样（未知浓度的苯与甲苯的混合液）四、实验步骤1. 标准溶液配置先取少量流动相置于100 mL 容量瓶中，放入天平中去皮归零，用移液管分别取少量苯（ 1.0000g） 、甲苯（ 1.0000g） ，于容量瓶中依次称重，精确至0.0001g，然后用流动相定容制成标准母液分别取标准母液1mL、2mL、3mL、4mL、5mL，用流动相稀释定容至25mL，编号依次为 1、2、3、4、5. 2. 色谱分析（1）试样溶液：未知浓度的苯、甲苯混合溶液，进样，所得色谱图显示两个色谱峰2）苯、甲苯标准溶液分别进样，所得色谱图与试样溶液的色谱图比较来定性分析，确定色谱峰的归属3）标准溶液依次进样，将所得色谱图上苯和甲苯的峰面积对相应浓度作图，得到苯和甲苯的标准曲线。

4）将试样溶液色谱图中苯、甲苯的峰面积与标准曲线对照，从而求得试样溶液中苯和甲苯浓度中南大学学院化 学 化 工 学 院班级应 化 0904学号*********姓名********实验日期 2012年4 月28日 指导教师郭 方 遒芳香族化合物的定性、定量分析——HPLC 一、实验目的1．了解并掌握高效液相色谱法的分离原理2．学习并掌握高效液相色谱仪的操作3．掌握保留时间初步定性和外标标准曲线法定量的方法二、实验原理高效液相色谱法有正相和反相两种模式反相高效液相色谱是指采用非极性固定相（如 C18等） 、极性溶液（如甲醇等）作为流动相的一种分离模式正相色谱法与之相反，它是以极性物质为固定相（如带有氨基和氰基的固定相） ，非极性溶剂（正己烷等）为流动相的一种液相色谱分离模式在反相色谱中，极性较强或亲水的样品分子与固定相的相互作用较弱，分配较少，因此随着流动相的较快流出，反之，疏水性相对较弱的分子和固定相间存在较强的相互作用，在柱内保留时间相对较长C18反相柱，样品的保留一般要从其极性和疏水性两方面考虑）本实验采用反相色谱分离模式色谱定性原理：同种物质在相同色谱条件下，具有相同的保留值（保留时间或保留体积）。

通过比较已知物与未知物的保留值，即可初步确定未知物是何种物质色谱定量原理：在一定的色谱条件下， 组分的质量或其在流动相中的浓度，与检测器响应信号（峰面积或峰高）成正比五、实验数据及处理2. 苯和甲苯的标准曲线0.20.40.60.81.01.21.41.61.82.02.2200.0k400.0k600.0k800.0k1.0M1.2M1.4M1.6M1.8M2.0M2.2M2.4MbenzenemethylbenzeneStandard Curve for benzene and methylbenzeneAreaC (mg/mL)定量苯的标准曲线的回归方程为：y=851227.25x+35042.1；定量甲苯标准曲线的回归方程为：y=1113220x-122.2y表示峰面积，x表示浓度）3.苯和甲苯的定性分析 根据已知的苯和甲苯混合溶液的色谱图，根据保留时间对未知样的组分 进行定性保留时间混合样 /min 未知样 /min 苯8.225 8.230 甲苯11.717 11.708 1.苯和甲苯的定量分析 对照混合样的谱图定性后，把苯和甲苯的色谱峰的面积带入到相应的回 归方程，得到响应苯和甲苯的含量峰面积浓度 /mg/mL 苯161230 0.148 甲苯389294 0.350 六、结果与讨论1. 从苯和甲苯的性质解释其出峰顺序。

答：实验所采用的是反相色谱分离模式，流动相是甲醇与水的混合物，属于强极性流动相，固定相是十八烷键合硅胶单纯考虑苯和甲苯的极性，应该是甲苯先出峰事实上是苯先出峰，因为苯环上烷基取代，相对来说洗脱较为困难液相色谱的分离机理比较复杂，组分的分离是受组分与流动相的溶解性、粘度、表面张力、极性等多种因素影响2.实验采用峰面积而不采用峰高定量，说明原因（即说明峰高定量的缺点）答：峰高受柱效的影响较大，数值波动较峰面积大，从而实验的精确度就相对较差七、思考题1. 本实验为什么采用反相液相色谱，试说明理由答：苯和甲苯都是疏水性物质，容易被反相色谱的固定相吸引，不会快速地冲刷下来，从而会有比较好的分离度；而正相色谱的固定相是亲水性的，吸引苯和甲苯的能力都相对弱很多，很快就被淋洗出来， 柱效就不是那么高了2. HPLC 分析中流动相为何要脱气，不脱气对实验有何影响？答：不脱气会产生气峰。