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自考毕业论文样文自考毕业论文样文-08-08 材料李惠翔自考论文材料李惠翔自考论文“苏丹红一号“是一种人造化学制剂，全球多数国家都禁止将其用于食品生产这种色素常用于工业方面，比如机油、蜡和鞋油等产品的染色苏丹红一号“会导致鼠类患癌，它在人类肝细胞研究中也显现出可能致癌的特性1.1 苏丹红的简介检测苏丹红 I（Sudan I）是一种人工合成的红色亲脂性偶氮化合物，化学名称为 1-苯基偶氮-2-萘酚（图 1） 苏丹红 I 常作为工业染料，被广泛用于如溶剂、油和蜡的增色以及鞋、地板等增光方面科学家通过实验发现, 苏丹红一号会导致鼠类患癌症, 对小鼠的实验显示，注射了苏丹红一号的小鼠肝脏长了肿瘤苏丹红一号的化学衍生物苏丹红二号、三号和四号，已经发现它们能够使老鼠和兔子得癌症1.1.2 苏丹红的各个性质致癌性 国际癌症研究机构(International Agency for ResearchonCancer，IARC)将苏丹红 I 归为三类致癌物，即动物致癌物，主要基于体外和动物试验的研究结果，尚不能确定对人类有致癌作用肝脏是苏丹红 I 产生致癌性的主要靶器官，此外还可引起膀胱、脾脏等脏器的肿瘤。

用苏丹红 I 喂饲 F-344 大鼠(剂量为 15和 30mg/kg)和 B6C3F1 小鼠(剂量为 60 和 120mg/kg)103 周后，雌雄高剂量组大鼠肝癌的发生率较对照组显著升高，这提示苏丹红 I 可能诱导大鼠肝癌的发生；雌性低剂量组小鼠白血病和淋巴瘤发生率较对照组明显增加Bobs 等每天给大鼠喂饲苏丹红 I2 年，剂量为30mg/kgBW，可引发大鼠肝癌如前所述，依据欧洲辣椒粉中苏丹红I 的检出水平和人群辣椒粉的摄入水平，以最坏的假设人每天摄入含苏丹红 I3500mg/kg 的辣椒粉 500mg(最大摄入量)来推算，则每天人可能摄入苏丹红 I 的最大量为 1750g，即相当于人体每天摄入29.2g/kg(按成人正常体重 60kg 计算)，苏丹红诱发动物肿瘤剂量30mg/kgBW 约为其 1×103 倍以摄入含苏丹红较低水平(如 10mg/kg)的辣椒粉 500mg 来推算，则每天可能摄入苏丹红 I 的量为 5?g，即相当于人体每天摄入 0.083?g/kg(按成人正常体重 60kg 计算)，苏丹红诱发动物肿瘤剂量 30mg/kgBW 约为其 3.6×103 倍苏丹红 I 及其代谢产物可与 DNA 生成加合物，是一种潜在的致癌剂[1][2]，研究人员还发现苏丹红一号能造成人类肝脏细胞的突变，显现出致癌的特性。

由于苏丹红一号具有潜在的致癌危险，国际癌症研究机构已将苏丹红一号列为第三类致癌物质可引起肝脏、膀胱和脾脏等脏器的肿瘤[3][4]因此，国际癌症研究机构（International Agency for Research on Cancer，IARC）将苏丹红 I 归为三类致癌物另外，苏丹红 I 还具有致敏性和遗传毒性[5][6] 遗传毒性 研究显示，苏丹红 I 在 S-9 存在的条件下，对沙门氏伤寒杆菌具有致突变作用；对小鼠淋巴瘤 L5178YTK+/-细胞具有致突变作用；大鼠骨髓微核试验呈阳性；可增加 CHO 细胞姐妹染色单体交换彗星试验表明可引起小鼠胃和结肠细胞的 DNA 断裂 致敏性 苏丹红 I 具有致敏性，可引起人体皮炎印度妇女习惯使用一种点在前额的 Kukus 牌化妆品但目前有报道称，有人因涂抹kokum 而引发过敏性接触性皮炎通过气相色谱分析，7 个 kukus 品牌中有 3 个可检测到不同浓度的苏丹红 I 代谢产物 苯胺和 1-氨基-2 萘酚：苏丹红 I 的代谢产物苯胺有毒，依据其对血红蛋白毒性作为敏感终点，其最小观察到有害作用剂量(LOAEL)为 7mg/kg/day，但在慢性毒性试验中尚未求出最大未观察到有害作用剂量(NOAEL)。

基于通过食品、空气和饮水的暴露途径，依据 LOAEL 为 7mg/kg/day，得出其安全限(MOS)为 0.7×10-6mg/kgbw/day有研究显示，人体多次每日摄入 0.4mg/kg 苯胺可引起血红蛋白毒性 苯胺在体内外均具有遗传毒性，被 IARC 列为三类致癌物，尚不能确定对人类有致癌性动物试验显示，给大鼠喂饲苯胺(72mg/kg)104 周，脾脏肿瘤发生率明显升高以最坏的假设如人体每天最大可能摄入苏丹红 I 为 1750?g，则理论上通过还原反应会产生 656?g 的苯胺，相当于人体每天摄入 11?g/kg(相当于 20 克胡萝卜中的苯胺含量)，动物试验诱发脾脏肿瘤剂量 72mg/kg 约是其6.5×103 倍如以每天人体摄入较低的苏丹红 I5?g 来推算，则理论上通过还原反应会产生 1.9?g 的苯胺，即相当于人体每天摄入0.03?g/kg，诱发脾脏肿瘤剂量 72mg/kgBW 约是其 2.4×106 倍 代谢产物 1-氨基-2 萘酚可引起鼠伤寒沙门氏菌 T100 基因突变，可诱发小鼠膀胱肿瘤图 1 苏丹红Ⅰ目前，苏丹红的检测方法主要有液质-联用法和高效液相色谱法[7][8]。

欧盟标准方法即《辣椒粉及以辣椒为主要成分的产品中苏丹红和胭脂树橙的含量分析》中使用的检测仪器是大型液质-联用仪2005 年 3 月 29 日，国家质检总局和国家标准委联合发布了有关苏丹红检测方法国家标准--《食品中苏丹红染料的检测方法-高效液相色谱法》GB/T 19681-2005）[9]该标准采用正相吸附固相萃取去除样品中红辣椒和番茄中的干扰成分，再使用高效液相色谱仪检测苏丹红检测流程包括样品制备－称样－分散－提取－离心－分出上清－蒸干－正己烷溶解－固相萃取－洗脱－定容－上机等过程，检测下限为 10μg/Kg但该方法采用的固相萃取方法既无法做到对苏丹红真正的特异性吸附，又没有经过质谱证实，可能存在假阳性结果，另外，由于操作过程太长，需经反复的提取、蒸干、固相萃取和洗脱等步骤，不仅要消耗大量有机溶剂，且易导致样品的回收率偏低近年来，国内学者建立了针对苏丹红的酶联免疫检测方法[10] [11]，但提取操作也相对较为复杂，限制了该方法的推广利用由于苏丹红主要的添加出现在辣椒、番茄酱等食品中，这些食品中成分相对复杂，这就造成提取的样品在检测时消除基质干扰的难度很大，这也限制酶联免疫检测方法在苏丹红快速检测的应用。

2.方法要点上述着色剂经乙腈提取后#过滤#滤液用反相高效液相色谱仪进行色谱分析$ 以波长可变的紫外可见检测器定性与定量$3.仪器与设备万分之一天平、250ml 具塞三角瓶、直径 10cm 的漏斗、50ml 容量瓶、5ml 移液枪 100ml 量筒 5ml 一次性注射器、0.45“m 滤膜、185mm 滤纸、打浆机、Ultra Turret 均质机、配有紫外- 可见检测器的高效液相色谱仪、色谱柱 LiChroCART250-4HPLC、Cartridge、Supers her 100RP184.1 苏丹红样品的提取方法苏丹红的高效液相色谱法检测是目前公认的比较准确的定性和定量的一种检测方法，但是其前处理较复杂目前，用于提取食品中苏丹红色素的溶剂主要有乙腈、正己烷、三氯甲烷、丙酮、石油醚、乙醇、环己烷等国标检测建立的方法中，不同的样品采用的方法不尽相同，但大体都是首先采用正己烷或者正己烷-丙酮的混合液作为苏丹红的提取液提取样品中的苏丹红，然后再经旋转蒸发浓缩提取液，最后将提取液过氧化铝层析柱，其原理是基于苏丹红的极性与天然色素、油脂的极性差异进行的，滤出样品再进行液相检测谢维平等[12]则选择乙醇作为提取液并重复提取一次，合并提取液。

提取液于 70℃水浴中用氮气吹干，用 1ml 环己烷-乙酸乙酯（体积比 1：1）溶液溶解然后将该溶液过 Bio-Beads SX3 凝胶柱滤液经洗脱环己烷-乙酸乙酯洗脱将洗脱液置于吹氮浓缩仪中于70℃水浴下吹干，残渣用 1：1 甲醇溶解，经 0.45μm 油性滤膜过滤后待测，也取得较好的效果周晓[13]等在建立饲料中苏丹红的检测方法时，直接利用乙腈作为提取液，经超声提取然后经简单过滤便上机检测，该方法简便易行，而且结果也基本令人满意4.2 苏丹红样品液相检测条件及检测结果液相色谱的条件选择主要有流动相的确定，检测波长的选定以及柱温等条件液相检测样品的前处理方法已如前所述国标检测选择的是 A B 系统溶剂 A 为 0.1%甲酸的水溶液：乙腈 = 85：15溶剂 B 为 0.1%甲酸的乙腈溶液：丙酮=80：20不同比例混合的 A、B 流动相保留时间不同周晓[13]等利用的流动相是A+B（20%+80%） 苏丹红 I 的检测波长为 478nm，苏丹红 II，苏丹红Ⅲ，苏丹红Ⅳ的检测波长均为 520nm在添加 1mg/kg 的色素时回收率在 92.6%～98.0%之间；相对标准偏差（RSD）在 0.8%～2.0%之间；最低检出限为 8～11μg/kg。

谢维平等[12]建立的方法样品经凝胶层析柱处理，以 100%甲醇为流动相，流速为 1.5ml/min，用二极管阵列检测器检测，检测波长 478nm方法的检测限为 7～14μg/kg；平均加标回收率为80.7%～96.3%（添加水平为 0.25，2.5mg/kg） ，相对标准偏差为2.4%～5.9%张翠英等[7]建立的 LC/MS/MS 法分析食品中微量苏丹红I、II、III、IV 以乙腈-0.1%甲酸进行梯度洗脱，以多反应监测(MRM)方式进行检测,分析时间仅为 5min苏丹红 I、II、III、IV用于定量分析的离子分别为 m / z 249→93、277→120、353→197、381→224苏丹红I、II、III、IV 的线性范围分别为1.1616～290.4、1.2608～315.2、1.184～296.0、1.1664～291.6 ng/mL5.薄层层析法检测苏丹红在薄层色谱法中薄板和展开剂的选择起着关键作用，在食品中苏丹红的检测利用薄层色谱也有不少研究张杨[14]采用展开剂正丁醇一无水乙醇-氨水，在聚酰胺薄层板上可将苏丹红 I-W 分开，但有拖尾现象窦红等[15]利用高效硅胶G 板作为薄层板，并对高效硅胶 G 板及聚酰胺薄层板分离苏丹红色素的结果进行比较,发现高效硅胶 G 板较聚酰胺薄层板分离苏丹红色素更具有优势，其检测灵敏度达到 0.3 mg/kg；而且分析速度快，用聚酰胺薄层板分析一般需要 40 min，而高效硅胶 G 板只需 5～10 min；4 种苏丹红色素与辣椒色素等干扰色素能够完全分离。

6.关于苏丹红 I 号的酶联免疫检测方法韩丹等利用多克隆抗体建立的针对苏丹红 I 号酶联免疫检测方法测得检出限为 0.12μg/L，IC50 值为 0.74μg/L苏丹红Ⅰ号在番茄酱和辣椒面中的回收率分别为 106%和 110%样品仅需甲醇萃取再用缓冲液稀释就可以直接进行 ELISA 测定Chunmei Ju 等[11]利用 2-萘酚和氨基苯甲酸人工合成苏丹红 I 号的类似物并连接蛋白作为免疫原免疫小鼠，制备出抗苏丹红 I 号的单克隆抗体，并在此基础上建立起针对苏丹红 I 号的酶联免疫检测方法，该方法的检测下限约为 0.5ng/g，样品的加标回收率为 84%～99%，变异系数为14.9%～33.3%，与苏丹红Ⅱ号、苏丹红Ⅲ号、苏丹红Ⅳ的交叉反应率分别为 1.8%、91.3%、3.7%Yuzhen Wang 等[10]也是用人工方法合成苏丹红 I 号的类似物，此类似物与 Chunmei Ju 等合成的类似物所不同的是在类似物与蛋白连接时中间加了碳桥，从而使得获得的单克隆抗体的特异性比 Chunmei Ju 等获得的单克隆抗体特异性高些Yuzhen Wang 等利用制备的单克隆抗体所建立的针对苏丹红的酶联免疫检测方法的检测下限为 0.07ng/mL～0.14ng/mL，样品的回收率为 88.2%～110.5%，变异系数为 2.4% ～ 17.4%，与苏丹红Ⅱ号、苏丹红Ⅲ号、苏丹红Ⅳ的交叉反。